一種試劑盒及其使用方法與流程
本發明涉及str檢測領域，具體而言，涉及一種試劑盒及其使用方法。
背景技術：
短串聯重復序列(shorttandemrepeat，str)也稱微衛星dna(microsatellitedna)或簡單重復序列(simplesequencerepeat，ssr)，是廣泛存在于人類基因組的一類以幾個堿基為核心單位串聯重復形成的dna序列。str基因座分布廣泛，人基因組中平均每100～200kb中出現一個，其核心重復單位一般為2～6個堿基，重復次數在10～60次之間。由于不同個體間的重復單位次數的差異而具有很高的多態性，同時這種多態性在遺傳過程中遵照孟德爾遺傳規律，因此str遺傳分析被廣泛應用于法醫個體識別、親緣鑒定、群體遺傳學等諸多領域。
復合擴增技術(多重pcr)是目前檢測str最主要的技術手段，這是由于str基因座片段小、易擴增且各基因座之間的擴增條件接近，因此能夠將兩個及兩個以上基因座放在同一反應管中進行復合擴增，其優點在于高效率和高產率，有效節約時間和所需試劑。通過將不同熒光分子標記于各基因座引物末端即可利用毛細管電泳技術將擴增出的多種不同片段分離開，并通過與dna分子量標準對比精確計算出str等位基因片段大小，進而實現str分型。
目前，str遺傳分析技術已成為法庭科學鑒定中最常用、發展最成熟的技術而被用于各類案件檢驗。str數據也已經成為各國法庭科學數據庫的重要組成部分，以實現對犯罪嫌疑人dna數據的比對和排查。美國fbi選用以下13個核心str基因座用于構建dna分型數據庫(combineddnaindexsystem，codis)，包括：d3s1358，d5s818，d7s820，d8s1179，13s317，d16s539，d18s51，d21s11，csf1po，fga，th01，tpox，vwa。90年代中后期，美國abi公司和promega公司分別推出ampfistridentifiler試劑盒與
但現有的str遺傳分析技術存在引物設計和str分組不合理、需要通過復雜方法處理dna模板、擴增體系以及反應條件不佳等缺陷，導致擴增效率低、檢測時間長和分型效果差。
有鑒于此，特提出本發明。
技術實現要素：
本發明的第一目的在于提供一種試劑盒，所述試劑盒能夠快速、準確地對所述16個str位點進行擴增和分型。
本發明的第二目的在于提供一種使用上述試劑盒進行pcr的方法，通過所述方法能夠快速、準確地對上述16個str位點進行分型。
為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：
一種試劑盒，包括用于擴增str位點d3s1358、d5s818、d7s820、d8s1179、d13s317、d16s539、d18s51、d21s11、csf1po、fga、th01、tpox、vwa、pentae、pentad和amelogenin的16對上、下游引物對中的一對或多對，所述16對上、下游引物對的序列如seqidno：1-32所示。
本發明還涉及一種使用上述試劑盒進行pcr的方法，所述方法包括以下步驟：(1)將上述試劑盒中的試劑與dna模板混合并進行pcr反應；(2)分析擴增產物的豐度。
本發明上述試劑盒能夠快速、準確地對所述16個str位點進行擴增和分型。
具體實施方式
本發明一方面涉及一種試劑盒，包括用于擴增str位點d3s1358、d5s818、d7s820、d8s1179、d13s317、d16s539、d18s51、d21s11、csf1po、fga、th01、tpox、vwa、pentae、pentad和amelogenin的16對上、下游引物對中的一對或多對，所述16對上、下游引物對的序列如seqidno：1-32所示。
本發明所述試劑盒涉及16對上、下游引物對，上述16對上、下游引物對具有特異性好、擴增效率高的優點，在pcr擴增過程中不會形成引物二聚體、非特異擴增和交叉反應，避免非目的產物的出現對分型結果的影響，同時擴增效率高，檢測信號強，一方面可以縮短pcr擴增時間，另一方面由于檢測信號高，可以快速、準確地實現對pcr產物的檢測和str分型。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括16對上、下游引物對中的13對、14對、15對或16對。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括所述16對上、下游引物對。
在一些實施方式中，試劑盒中包括的所述上、下游引物對被不同熒光染料標記為不同的組。
在一些實施方式中，所述上下游引物對被不同熒光染料標記為3組、4組、5組或6組。
在一些實施方式中，所述上下游引物對被不同熒光染料標記為4組。
在一些實施方式中，每對引物中的至少一條引物被熒光染料標記。
在一些實施方式中，每對上、下游引物中至少有一條引物的5’端或3’端被熒光染料標記。
在一些實施方式中，所述熒光染料選自fam、fitc、sybrgreenⅰ、hex、vic、joe、tamra、tet、rox、cy3、cy5、texas-red、pet、ned、alexafluor、dylight和ftm。
在一些實施方式中，所述熒光染料選自fam、hex、tamra和rox。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括所述16對上、下游引物對，其中所述16對上、下游引物對分別被4種不同熒光染料標記為4組。
在一些實施方式中，其序列依次如seqidno：1-10所示、分別用于擴增d5s818、th01、d8s1179、tpox和csf1po的上、下游引物對被標記為第1組；其序列依次如seqidno：11-18所示、分別用于擴增d13s317、d7s820、d21s11和pentae的上、下游引物對被標記為第2組；其序列依次如seqidno：19-26所示、分別用于擴增d3s1358、d16s539、vwa和d18s51的上、下游引物對被標記為第3組；其序列依次如seqidno：27-32所示、分別用于擴增amelogenin、pentad和fga的上、下游引物對被標記為第4組。
在一些實施方式中，標記第1組引物對的熒光染料為fam，標記第2組引物對的熒光染料為hex，標記第3組引物對的熒光染料為tamra，標記第4組引物對的熒光染料為rox。
本發明所述試劑盒對所述上、下游引物對的對數、分組和熒光標記情況作出限定，其中，通過引物對的巧妙分組確保組內引物對擴增獲得的產物在分子量大小上不存在重疊，配合不同熒光染料標記不同組的引物對，只需要對產物進行一次分析即可同時獲得多對引物的pcr檢測結果，從而實現多位點str分型。
在一些實施方式中，所述試劑盒還包括pcr反應緩沖液、dntps、dna聚合酶、去離子水、上樣緩沖液和dna分子量內標中的一種或多種。
在一些實施方式中，所述dna聚合酶選自taq、bst、vent、phi29、pfu、tru、tth、tl1、tac、tne、tma、tih、tf1、pwo、kod、sac、sso、poc、pab、mth、pho、es4dna聚合酶、klenow片段。
在一些實施方式中，所述dna聚合酶為taqdna聚合酶。
在一些實施方式中，所述taqdna聚合酶為熱啟動taqdna聚合酶。
在一些實施方式中，所述水選自雙蒸水或去離子水。
在一些實施方式中，試劑盒中包括的所述上、下游引物對混合在一起。
在一些實施方式中，所述上、下游引物對還與所述pcr反應緩沖液、dntps和dna聚合酶中的一種或幾種混合在一起。
在一些實施方式中，所述上樣緩沖液選自甲酰胺、去離子甲酰胺；優選地，所述上樣緩沖液為去離子甲酰胺。
在一些實施方式中，所述分子量內標為liz500。
在一些實施方式中，所述上樣緩沖液和所述dna分子量內標混合在一起。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括混合在一起的、序列如seqidno：1-32所示的引物，所述引物的摩爾濃度比依次為0.7～1.1：0.7～1.1：0.4～0.8：0.4～0.8：1.0～1.4：1.0～1.4：0.4～0.8：0.4～0.8：0.7～1.1：0.7～1.1：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.8～1.0：0.8～1.0：0.5～0.7：0.5～0.7：0.9～1.3：0.9～1.3：0.5～0.7：0.5～0.7：0.8～1.0：0.8～1.0：0.7～0.9：0.7～0.9：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：0.7～0.9：0.7～0.9：1.1～1.3：1.1～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.9～1.0：0.9～1.0：0.6～0.7：0.6～0.7：1.2～1.3：1.2～1.3：0.6～0.7：0.6～0.7：0.9～1.0：0.9～1.0：0.8～0.9：0.8～0.9：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：0.8～0.9：0.8～0.9：1.2～1.3：1.2～1.3：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.93：0.93：0.61：0.61：1.22：1.22：0.61：0.61：0.93：0.93：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84。
本發明所述試劑盒對上述16對上下游引物的摩爾量進行調整，確保組內引物的擴增效率一致，從而可以簡單、快速地對分析檢測結果，進行str分型。
本發明還涉及使用上述組合物或上述試劑盒進行pcr的方法，所述方法包括以下步驟：所述方法包括以下步驟：(1)將上述試劑盒中的試劑與dna模板混合并進行pcr反應；(2)分析擴增產物的豐度。
本發明所述方法涉及16對上、下游引物對，上述16對上、下游引物對具有特異性好、擴增效率高的優點，在pcr擴增過程中不會形成引物二聚體、非特異擴增和交叉反應，避免非目的產物的出現對分型結果的影響，同時擴增效率高，檢測信號強，一方面可以縮短pcr擴增時間，另一方面由于檢測信號高，可以快速、準確地實現對pcr產物的檢測和str分型。
在一些實施方式中，所述dna模板來自血液、唾液、精液、骨骼或毛發。
在一些實施方式中，所述dna模板通過飽和苯酚-氯仿法、樹脂提取法或磁珠提取法提取。
在一些實施方式中，所述dna模板為含有dna的血濾紙片、唾液卡片或fta卡。
本發明所述方法能夠直接以血濾紙片、唾液卡片、fta卡等為dna模板進行擴增，不需要對dna進行提取，極大縮短獲得最終分型結果所需要的時間。
在一些實施方式中，所述pcr反應的退火溫度為59～62℃，循環次數為28～32次；優選地，所述pcr反應的退火溫度為60.5℃，循環次數為30次。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，92～95℃變性3～8min；第2步，92～95℃變性5～15s；第3步，59～62℃變性0.5～2min；第4步，70～73℃延伸20～40s；第5步，重復第2～4步28～32次；第6步，58～61℃延伸7～12min；第7步，2～6℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，93～95℃變性3～6min；第2步，93～95℃變性7～15s；第3步，60～62℃變性0.5～1.5min；第4步，71～73℃延伸25～35s；第5步，重復第2～4步29～31次；第6步，59～60℃延伸8～11min；第7步，3～5℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，94～95℃變性3～5min；第2步，94～95℃變性7～10s；第3步，60～61℃變性0.5～1min；第4步，71～72℃延伸25～30s；第5步，重復第2～4步29～30次；第6步，59～60℃延伸9～10min；第7步，4～5℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，94℃變性5min；第2步，94℃變性10s；第3步，60.5℃變性1min；第4步，72℃延伸30s；第5步，重復第2～4步30次；第6步，60℃延伸10min；第7步，4℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述擴增產物的豐度通過以下步驟進行分析：將pcr反應產物和等位基因階梯分別與上樣緩沖液和dna分子量內標混合，經高溫變性和冰上冷卻后，進行電泳分離。
在一些實施方式中，在92～96℃變性2～5min后，立即放在冰上冷卻2～5min。
在一些實施方式中，在95℃變性3min后，立即放在冰上冷卻3min。
在一些實施方式中，所述方法還包括電泳后進行str分型的步驟。
在一些實施方式中，所述str分型包括利用數據分析軟件對樣品和等位基因階梯的電泳結果進行分析和比對，從而得到分型結果。
在一些實施方式中，所述數據分析軟件為genemapper或peakscanner。
在一些實施方式中，所述方法包括以下步驟：(1)將序列如seqidno：1-32所示的引物與dna模板混合并進行pcr反應；(2)分析擴增產物的豐度。
在一些實施方式中，序列如seqidno：1-32所示的引物的摩爾濃度比依次為0.7～1.1：0.7～1.1：0.4～0.8：0.4～0.8：1.0～1.4：1.0～1.4：0.4～0.8：0.4～0.8：0.7～1.1：0.7～1.1：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.8～1.0：0.8～1.0：0.5～0.7：0.5～0.7：0.9～1.3：0.9～1.3：0.5～0.7：0.5～0.7：0.8～1.0：0.8～1.0：0.7～0.9：0.7～0.9：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：0.7～0.9：0.7～0.9：1.1～1.3：1.1～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.9～1.0：0.9～1.0：0.6～0.7：0.6～0.7：1.2～1.3：1.2～1.3：0.6～0.7：0.6～0.7：0.9～1.0：0.9～1.0：0.8～0.9：0.8～0.9：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：0.8～0.9：0.8～0.9：1.2～1.3：1.2～1.3：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.93：0.93：0.61：0.61：1.22：1.22：0.61：0.61：0.93：0.93：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84。
與現有技術相比，本發明的有益效果為：
1)、本發明所述試劑盒和pcr方法中及的16對上、下游引物對，所述上、下游引物對具有特異性好、擴增效率高的優點，在pcr擴增過程中不會形成引物二聚體、非特異擴增和交叉反應，避免非目的產物的出現對分型結果的影響，同時上述引物還具有擴增效率高，檢測信號強的優點，一方面可以縮短pcr擴增時間，另一方面可以快速、準確地實現對pcr產物的檢測和str分型。
2)、本發明所述試劑盒和pcr方法通過巧妙的分組，避免同一組str位點的擴增產物在分子量大小上出現重疊，使擴增結果簡單明確、一目了然，從而可以快速、準確地根據檢測結果進行str分型。
3)、本發明所述試劑盒和pcr方法對16對上下游引物的摩爾濃度比進行調整，確保組內引物的擴增效率一致，從而可以簡單、快速地分析檢測結果，進行str分型。
4)、本發明所述試劑盒和pcr方法不但能夠將pcr擴增時間縮短至37～110分鐘，還能直接以血濾紙片、唾液卡片、fta卡等為dna模板進行擴增，不需要對dna進行提取，極大縮短獲得最終分型結果所需要的時間并降低實驗的復雜程度。
附圖說明
為了更清楚地說明本發明具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發明的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
圖1為以利用提取的dna為樣本復合擴增16個str位點的毛細管電泳圖譜；
圖2為以血液采集卡為樣品復合擴增16個str位點的毛細管電泳圖譜。
下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發明，而不應視為限制本發明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。
術語定義
本發明中使用的術語“試劑盒”既可以包括多試劑，也可以只包括單試劑；所述試劑既可以是組合物也可以是化合物。
實施例1以利用dna提取試劑盒提取的dna為樣本復合擴增16個str
一、樣品處理
利用dna提取試劑盒(購自天根生化科技有限公司)處理血液樣品，稀釋提取的基因組dna濃度至0.3ng/μl。
二、引物混合
將序列如seqidno：1-32所示的引物混合在一起，配制引物混合物，其中，所述引物混合物中各引物的濃度如表1所示。
表1引物混合物中序列如seqidno：1-32所示引物的濃度
三、pcr反應體系的配制
將含dna聚合酶的pcr反應緩沖液10μl，引物混合物6μl，dna模板2μl，去離子水2μl混合均勻，配制成20μlpcr反應體系。
四、pcr反應
將配制好的pcr反應體系置于pcr儀中進行擴增，其中擴增條件如下所示：
第1步，94℃變性5分鐘；第2步，94℃變性10秒；第3步，60.5℃退火1分鐘；第4步，72℃延伸30秒；第5步，重復2-4步30次；第6步，60℃延伸10分鐘，4℃持續保溫。
五、電泳
將liz500橙色內標及去離子甲酰胺按1:9比例進行混合，配制成上樣混合物，取2μl樣品或等位基因階梯，與上樣混合液進行混勻，經95℃變性3min，立即放在冰上冷卻3min，然后上機進行毛細管電泳分離。
六、檢測結果分析
采用genemaker軟件分析處理檢測結果，見圖1，其中通道a為標記fam熒光分子的峰，通道b為標記hex熒光分子的峰，通道c為標記tmera熒光分子的峰，通道d為標記rox熒光分子的峰。
圖1所示毛細管電泳圖譜無雜峰，只出現目的產物峰且峰值較高，在1000～2000之間，同一通道內目的產物峰的峰值一致。圖1所示檢測結果表明，首先，在復合擴增體系中，所述16對上下游引物的特異性好，pcr擴增過程不會形成引物二聚體、非特異性擴增或交叉反應，避免非目的產物的出現影響分型結果而出現誤判；其次，通過合理的分組和引物設計，避免同一組str位點的擴增產物在分子量大小上重疊，是擴增結果簡單明確、一目了然，從而可以快速、準確地根據檢測結果進行str分型；再者，通過調整各引物對的比例，使同一通道內的目的峰峰值基本一致，避免同一通道內目的產物峰的峰值高低差距過大而給分型帶來阻礙。
實施例2以血液采集卡為待測樣品復合擴增16個短串聯重復序列
一、樣品處理
帶有血樣的血液采集卡，利用打孔器取1.5mm卡片作為模板dna直接進行擴增。
二、引物混合
將序列如seqidno：1-32所示的引物混合在一起，配置引物混合物，其中，所述引物混合物中各引物的濃度如表2所示。
表2引物混合物中序列如seqidno：1-32所示引物的濃度
三、pcr反應體系的配制
配制20μlpcr反應體系，所述反應體系包括含dna聚合酶的pcr反應緩沖液10μl、引物混合物6μl，去離子水2μl和作為模板dna的1.5mm采血卡卡片。
四、pcr反應
將配制好的pcr反應體系置于pcr儀中進行擴增，其中擴增條件如下所示：
第1步，94℃變性5分鐘；第2步，94℃變性10秒；第3步，60.5℃退火1分鐘；第4步，72℃延伸30秒；第5步，重復2-4步28次；第6步，60℃延伸10分鐘，4℃持續保溫。
五、電泳
將liz500橙色內標及去離子甲酰胺按1:9比例進行混合，配制成上樣混合物，取2μl樣品或等位基因階梯，與上樣混合液進行混勻，經95℃變性3min，立即放在冰上冷卻3min，然后上機進行毛細管電泳分離。
六、檢測結果分析
采用genemaker軟件分析處理檢測結果，見圖2，其中通道a為標記fam熒光分子的峰，通道b為標記hex熒光分子的峰，通道c為標記tmera熒光分子的峰，通道d為標記rox熒光分子的峰。
圖2所示毛細管電泳圖譜中無雜峰，只出現目的產物峰且峰值較高，在500～2000之間，表明即使直接以采血卡卡片為dna模板，本發明仍可以特異性、高效率地擴增得到目的產物，從而簡單、快速地對str進行分型，縮短整個實驗過程所需時間。
最后應說明的是：以上各實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述各實施例對本發明進行了詳細的說明，但本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明各實施例技術方案的范圍。
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<110>北京普利斯康醫藥技術有限公司
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<211>16
<212>dna
<213>
<222>擴增th01的上游引物序列
<400>3
gaggcagccccaaggc
<210>4
<211>20
<212>dna
<213>
<222>擴增th01的下游引物序列
<400>4
aggtcacagggaacacagac
<210>5
<211>29
<212>dna
<213>
<222>擴增d8s1179的上游引物序列
<400>5
gcaacttatatgtatttttgtatttcatg
<210>6
<211>22
<212>dna
<213>
<222>擴增d8s1179的下游引物序列
<400>6
ccgtatgtattcttgtttccag
<210>7
<211>19
<212>dna
<213>
<222>擴增tpox的上游引物序列
<400>7
ccctcccagctctcacaac
<210>8
<211>21
<212>dna
<213>
<222>擴增tpox的下游引物序列
<400>8
cttactcctgttcccttcccg
<210>9
<211>20
<212>dna
<213>
<222>擴增csf1po的上游引物序列
<400>9
tgttccaacctgagtctgcc
<210>10
<211>20
<212>dna
<213>
<222>擴增csf1po的下游引物序列
<400>10
accatagccagagacctgga
<210>11
<211>20
<212>dna
<213>
<222>擴增d13s317的上游引物序列
<400>11
ctctggactctgacccatct
<210>12
<211>25
<212>dna
<213>
<222>擴增d13s317的下游引物序列
<400>12
cccaaaaagacagacagaaagatag
<210>13
<211>24
<212>dna
<213>
<222>擴增d7s820的上游引物序列
<400>13
agggtatgatagaacacttgtcat
<210>14
<211>24
<212>dna
<213>
<222>擴增d7s820的下游引物序列
<400>14
gattccacatttatcctcattgac
<210>15
<211>25
<212>dna
<213>
<222>擴增d21s11的上游引物序列
<400>15
ccagcttccctgattcttcagcttg
<210>16
<211>26
<212>dna
<213>
<222>擴增d21s11的下游引物序列
<400>16
attactagccataaacactgagaagg
<210>17
<211>25
<212>dna
<213>
<222>擴增pentae的上游引物序列
<400>17
atacaaaaaattagctgggtgtggt
<210>18
<211>33
<212>dna
<213>
<222>擴增pentae的下游引物序列
<400>18
tgggttattaattgagaaaactccttacaattt
<210>19
<211>19
<212>dna
<213>
<222>擴增d3s1358的上游引物序列
<400>19
gcagtccaatctgggtgac
<210>20
<211>20
<212>dna
<213>
<222>擴增d3s1358的下游引物序列
<400>20
tgaaatcaacagaggcttgc
<210>21
<211>20
<212>dna
<213>
<222>擴增d16s539的上游引物序列
<400>21
caagtgccagatgctcgttg
<210>22
<211>23
<212>dna
<213>
<222>擴增d16s539的下游引物序列
<400>22
cgtttgtgtgtgcatctgtaagc
<210>23
<211>27
<212>dna
<213>
<222>擴增vwa的上游引物序列
<400>23
gccctagtggatgataagaataatcag
<210>24
<211>33
<212>dna
<213>
<222>擴增vwa的下游引物序列
<400>24
ggatagatgataaatagatacatagg
<210>25
<211>21
<212>dna
<213>
<222>擴增d18s51的上游引物序列
<400>25
gaggcaggaggagttcttgag
<210>26
<211>21
<212>dna
<213>
<222>擴增d18s51的下游引物序列
<400>26
ctaccagcaacaacacaaataaac
<210>27
<211>19
<212>dna
<213>
<222>擴增amelogenin的上游引物序列
<400>27
ccctgggctctgtaaagaa
<210>28
<211>24
<212>dna
<213>
<222>擴增amelogenin的下游引物序列
<400>28
atcagagcttaaactgggaagctg
<210>29
<211>20
<212>dna
<213>
<222>擴增pentad的上游引物序列
<400>29
agcaagacaccatctcaaga
<210>30
<211>22
<212>dna
<213>
<222>擴增pentad的下游引物序列
<400>30
tatttgcctaacctatggtcat
<210>31
<211>23
<212>dna
<213>
<222>擴增fga的上游引物序列
<400>31
aatgccccataggttttgaactc
<210>32
<211>21
<212>dna
<213>
<222>擴增fga的下游引物序列
<400>32
tcagatcctctgacactcggt
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