一種新的檸檬苦素類化合物及其制備方法和醫藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從枳實的干燥幼果中分離得到的一種檸檬苦 素類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 枳實為臨床常用中藥，為蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培變種或 甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果。5~6月收集自落的果實，除去雜質，自中部橫 切為兩半，曬干或低溫干燥，較小者直接曬干或低溫干燥。枳實的產地主要有四川、江西、湖 南、福建等地，以江西產酸橙為道地藥材，且以江西產鵝眼枳實質量最好。枳實具有破氣消 積，化痰散痞等功效。臨床用于積滯內停，痞滿脹痛，瀉痢后重，大便不通，痰滯氣阻，胸痹， 結胸，臟器下垂，《中醫方大辭典》收錄的方劑中超過7%的方劑中含有枳實，足見枳實藥材 在臨床應用之廣。
[0003] 枳實的主要有效成分為揮發油類、生物堿類及其黃酮類成分。其中，揮發油類主要 成分為右旋檸檬烯、枸櫞酸等；生物堿類成分主要為辛弗林、N-甲基酪胺；黃酮類成分主要 為柚皮苷、新橙皮甙及橙皮甙。基原不同的枳實其辛弗林、柚皮苷和橙皮苷的含量差異很 大。酸橙果實未成熟時含新橙皮甙，在果實成熟時新橙皮甙消失。甜橙果實不含新橙皮苷。 不同生長期采摘的枳實藥材、不同粒徑大小的枳實藥材其有效成分的含量也不同。枳實揮 發油中的成分除與品種有關外，還與產地有關。辛弗林的含量隨著采摘期的延長，辛弗林的 含量降低明顯，但其含量差異與品種、產地沒有明顯的相關性。隨著枳實粒徑的增加，枳實 中柚皮苷的含量呈上升趨勢。湘枳實中總生物堿和揮發油的含量最高，但與贛枳實、綠衣枳 實無明顯差異，甜橙枳實含量最低。其中，辛弗林的含量以鵝眼枳實最高，橙皮苷的含量以 綠衣枳實最高，柚皮苷的含量以柚含量最高。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種從枳實的干燥幼果中分離得到的一種檸檬苦素類化合 物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
[0005] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0006] 具有下述結構式的化合物（I ):
[0007]
[0008] 所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將枳實的干燥幼果粉 碎，用65~75 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10 %乙醇洗脫6個柱體積，再用70 %乙醇洗脫 8個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟（b)中70 %乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到4個組分；（d)步驟（c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、 5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2用十八烷基硅 烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0009] 進一步地，步驟（a)中，用70%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0010] 進一步地，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0011] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載體。
[0012] 所述的化合物（I)在制備神經保護的藥物中的應用。
[0013] 所述的藥物組合物在制備神經保護的藥物中的應用。
[0014] 本發明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0015] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0016] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
[0017] 說明書附圖
[0018] 圖1為化合物（I)結構式；
[0019] 圖2為化合物（I)計算E⑶和實驗E⑶圖；
[0020] 圖3MTT代謝率檢測Αβ25 35對PC12細胞的毒性作用；
[0021 ] 圖4Αβ25 35對PC12細胞LDH釋放率的影響；
[0022] 圖5Αβ25 35和/或化合物（I)對PC12細胞LDH釋放率的影響。
【具體實施方式】
[0023] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0024] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0025] 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0026] 實施例1:化合物（I)分離制備及結構確證
[0027] (a)枳實的干燥幼果（10kg)粉碎，用70%乙醇熱回流提取（30LX3次），合并提 取液，濃縮至無醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水飽和的正 丁醇（6LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（375g)和正丁醇萃取物； (b) 步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再 用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（125g); (c) 步驟（b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、 20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱體積）和5:1 (10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 得到4個組分；（d)步驟（c)中組分4(25g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8 個柱體積）、5:1 (8個柱體積）和2:U6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組 分；（e)步驟（d)中組分2 (12g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為 65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I) (35mg)。
[0028] 結構確證：HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z739. 2914,結合核磁特征可得分子式 為C37H4S014，不飽和度為 14。核磁共振氫譜數據δH (ppm，DMS0-d6, 400MHz) :H-1 (4. 72， dd，J= 3. 0,2. 4)，H-2(2. 11，ddd，J= 16. 8,3. 0,3. 0)，H-2(2. 21，ddd，J= 16. 8,2. 4， 2. 4)，H-3(4. 87,dd，J= 3. 0,2. 4)，H-5(2. 48,d，J= 12. 7)，H-6(4. 01，dd，J= 12. 7， 3. 1)，H-7(4.96, d，J = 3. 1)，H-9(2.84, d，J = 3.5)，H-ll(5.00, ddd，J = 9·6,3·9， 3. 5)，Η-12(2· 02, dd，J = 15. 1，9· 6)，H-12(L 39, dd，J = 15. 1，3· 9)，Η-15(3· 67, s)， H-17 (5.46, s)，H-18 (1. 17, s)，H-19 (1.13, s)，H-21 (7.27, br，s)，H-22 (6.19, br，s)， H-23 (7. 29, dd，J = 1. 7,1. 7)，H-28 (3. 45, br，d，J = 7. 7)，H-28 (3. 42, d，J = 7. 7)， H-29(l. 09，s)，H-30(1. 22，s)，H-3'（6. 78，dq，J = 7. 1，1. 3)，H-4'（1. 66，br，d，J = 7. 1)， H-5'（1.73, br，s)，l-〇Ac (1.81，s)，7-0Ac (1.98, s)，ll-〇Ac (1.98, s);核磁共振碳譜數 據δ c (ppm, DMS0-d6,125Hz) :72. 0 (CH，1-C)，26. 2 (CH2, 2-C)，70. 1 (CH，3-C)，41. 7 (C，4-C)， 41. 1 (CH，5-C)，71. 3 (CH，6-C)，72. 9 (CH，7-C)，43. 1 (C，8-C)，38. 6 (CH，9-C)，39. 1 (C，10-C)， 65. 4 (CH2,11-C)，37. 4 (CH，12-C)，36. 9 (C，13-C)，67. 6 (C，14-C)，53. 4 (CH，15-C)，165. 7 (C， 16-C)，77. 2(CH，17-C)，17. 5(CH3, 18-C)，16. 3(CH3,19-C)，119. 0(C，20-C)，140. 3(CH， 21-C)，108. 8 (CH，22-C)，142. 4 (CH，23-C)，77. 3 (CH2, 28-C)，18. 4 (CH3, 29-C)，19. 4 (CH3， 30-C)，165.5(C，l' -C)，127.7(C，2' -C)，136.7(CH，3' -C)，ll. 1(CH3,4' -C)，13.4(CH3， 5' -C)，168. 1 (C，l-〇Ac)，20. 3 (CH3, l-〇Ac)，168. 0 (C，7-0Ac)，20. 7 (CH3, 7-0Ac)，168. 7 (C， ll-0Ac)，19. 9(CH3，ll-0Ac);碳原子標記參見圖1。NMR數據表明該化合物含有一個3-取 代呋喃環（δ Η7·29,7· 27和6. 19)，三個甲基（δ H1. 22,1.27,1. 13,1.09)，一個巴豆酰氧 基（SC165· 5,136. 7,127. 7,13.4,和11. 1)，三個乙酰氧基（δ Η1.98,1.98和1.81)和內酯 羰基（δC165. 7)。HMBC數據顯示該化合物還含有6, 28-醚橋。HMBC譜中，H-l(δ4. 72)、Η-7 (δΗ4. 96)和H-l1 (δΗ5. 00)與相應的酯羰基碳δC168. 1、168. 0和168. 7的相關性說 明三個乙酰氧基分別與C-l、C-7和C-11相連。此外，HMBC譜中Η-3(δΗ4. 87)與相應酯羰 基碳（δC165. 5)的相關性表明巴豆酰氧基位于C-3位上。ROESY譜中Η-6與Η3-29,Η3-29 與Η-2β，Η-2β與Η3-19 以及Η3-19 與Η3-30 的相關性表明Η-2β，H-6,Me-19,Me-29 和 Me-30為β構型；J5』（12. 7Ηζ)的耦合常數以及ROESY譜中Η-5/Η-9，Η-9/Η3-18的相關性確 定了Η-5,Η-9和Me-18為α構型。此外，C-l，C-3,C-7和C-11的構型是建立在較小的耦 合常數基礎上的[1,^/^(3.0/2.4^),J2a/{S，3(3.0/2.4Hz)，J6,7(3. 1Hz)和J9,n(3.5Hz)]。 ROESY譜中Η-12β與H-17為交叉峰，說明了H-17為β構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和 R0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如圖1所示，立體