一種心肌保護作用的檸檬苦素類化合物及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體設及從陳皮的干燥成熟果實中分離得到的一種巧 樣苦素類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 陳皮是蕓香科植物橘（CitrusreticulataBlaneo)及其栽培變種的干燥成熟果 皮。采摘成熟果實，剝取果皮，曬干或低溫干燥。味苦、辛，性溫，具有理氣健脾、燥濕化疲作 用，用于腕腹脹滿，食少吐瀉，咳嗽疲多。藥材分為"陳皮"和"廣陳皮"。一般來說，陳皮果 皮常剝成數瓣，基部相連或呈不規則碎片。外表面澄黃色或紅棟色，有細皺紋及凹下的點狀 油室；內表面黃白色，粗糖呈海綿狀，附黃白色或黃棟色筋絡狀維管束，質稍硬而脆，氣香， 味辛而微苦。而廣陳皮果皮則多剖成3至4瓣，基部相連，形狀整齊有序，厚度約1毫米。點 狀油室較大，對光照視透明清晰，質較柔軟。但是不管是陳皮還是廣陳皮都W片大、色鮮、油 潤、質軟、香氣濃、味甜苦辛者為佳。主產于廣東、福建、四川、江蘇、浙江、江西、湖南等地。
[0003] 陳皮主要含有揮發油、黃酬類、有機胺類及微量元素等成分。陳皮含揮發油約占 2 %~4 %，主要成分為巧樣苦素和巧樣醒。
[0004] 現代藥理學表明陳皮在屯、血管、胃腸道、呼吸道、內分泌、抗癌、抗衰老、養顏美容、 營養補虛方面具有很好作用，運為陳皮深度開發提供廣闊前景。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種從陳皮的干燥成熟果實中分離得到的一種巧樣苦素類 化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得W實現的：
[0007] 具有下述結構式的化合物（I ):
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將陳皮的干燥成熟果實 粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步 驟（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗 脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；(C)步驟化）中70% 乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲 醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 8:1、5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2用十八燒 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12 個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進一步地，步驟（a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備屯、肌保護的藥物中的應用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備屯、肌保護的藥物中的應用。
[0015] 本發明化合物用作藥物時，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
【附圖說明】
[001引圖1為化合物（I)結構式；
[0019] 圖2為化合物（I)計算ECD和實驗ECD圖。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不W此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可W對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0021] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0022] 乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[002引實施例1 :化合物（I)分離制備及結構確證
[0024] (a)將陳皮的干燥成熟果實（8kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取（3化X3次），合 并提取液，濃縮至無醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3次）和水飽和 的正下醇化LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（375g)和正下醇萃取 物；化）步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用5 %乙醇洗脫6個柱體積，再 用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（129g); (C)步驟（b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、 30:1 (8個柱體積）、15:1 (8個柱體積）和5:1 (10個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫 得到4個組分；（d)步驟（C)中組分4(27g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8 個柱體積）、5:1 (10個柱體積）和2:1 (8個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個 組分；（e)步驟（d)中組分2 (15g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度 為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化 合物（I) (38mg)。
[00巧]結構確證：HR-ESIMS顯示[M+NaiT為m/z681. 3316,結合核磁特征可得分子式為 〔36馬。011，不飽和度為 12。核磁共振氨譜數據 (卵m，DMS0-de，400MHz) 49,ddd，J =8. 7,3. 2,2. 4)，H-2(2. 27,m)，H-2(l. 91，ddd，J= 16. 3,2. 8,2. 4)，H-3(5. 03,dd，J= 2. 8, 2. 8)，H-5 (2. 24,d，J= 12. 5)，H-6 (4. 15,dd，J= 12. 5, 3. 2)，H-7 (5. 74,d，J= 3.。， H-9 (2. 99,dd，J= 11. 8, 7. 3)，H-11 (1. 69,m)，H-11 (1. 73,m)，H-12 (1. 49,ddd，J= 13. 2， 9. 8, 2. 9)，H-12 (2. 37,m)，H-15 (5. 81，s)，H-18 (1. 03,s)，H-19 0). 97,s)，H-21 (7. 45,dd，J= 1. 7,0. 8)，H-22 化.28,dd，J= 1. 7,0. 8)，H-23 (7. 32,dd，J= 1. 7,1. 7)，H-28 (3. 29,br，d，J =7. 6)，H-28(3. 45，d，J= 7. 6)，H-29(1. 18，s)，H-30(l. 22，s)，H-2,（2. 23，m)，H-4,（2. 31， s)，H-5'（1. 08,d，J= 7. 0)，H-2" (2. 14,m)，H-3" (1. 29,m)，H-3" (1. 56,m)，H-4" (0. 80， t，J= 7. 4)，H-5" (1. 04,d，J= 7. 0)，1-0H(4. 77,s)，6-0H巧.37,s)，17-OH化.08,s)， 28-0H(4. 24,s);核磁共振碳譜數據δc(卵m，DMSO-de，125MHz) :71. 1 (CH，1-C)，29. 7(邸2， 2-C)，72. 6 (CH，3-C)，41. 5 (C，4-C)，40. 1 (CH，5-C)，71. 8 (CH，6-C)，72. 0 (CH，7-C)，45. 9 (C， 8-C)，34. 1 (CH，9-C)，39. 7 (C，10-C)，13. 7 (細2,11-C)，21. 0 (邸2, 12-C)，50. 1 (C，13-C)， 192. 4 (C，14-C)，120. 5 (CH，15-C)，205. 2 (C，16-C)，80. 0 (C，17-C)，29. 6 (畑3, 18-C)， 15. 1 (細3, 19-C)，122. 2 (C，20-C)，140. 9 (CH，21-C)，109. 1 (CH，22-C)，142. 3 (CH，23-C)， 77. 2(細2,28-0，18. 7(邸3,29-0，24. 3(邸3,30-0，174. 5(C，Γ-C)，51. 1 (CH，2, -C)， 203.2(C，3' -C)，27. 1佩，4' -0，16.2佩，5' -C)，174.6(C，1"-C)，41. 1(CH，2"-C)， 26. 0(邸2,3"-0，11.2(邸3,4"-0，17. 1(邸3,5"-0 ;碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明 該化合物含有徑基（3433cm1)和幾基（1746和1714cm1)基團。古和"CNMR數據表明該化 合物含有的一個α，β-不飽和幾基，一個β-取代的巧喃基，一個2-甲基下酷氧基，一個 2-甲基-3-酬-下酷氧基，四個含氧次甲基，1個含氧亞甲基W及四個叔甲基碳。上述數據 表明該化合物為巧樣苦素類化合物。2-甲基下酷氧基基團和2-甲基-3-酬-下酷氧基分別 位于C-7 和C-3 位上。HMBC譜中，Η-3(δ冊.03，dd，J= 2. 8,2. 8)和Η-7(δ冊.74，d，J= 3. 。與相應醋幾基碳（δC174. 5 ;174.6)的相關性驗證了上述結論。此外，C-1 (δC71. 1)、 C-6(δC71.8)、C-17 (δC80. 0)和C-28 (δC77. 2)的化學位移表明了 1-0Η、6-0Η、17-0Η和 28-0Η的存在。R犯SY譜中，&-29 與Η-2β，Η-6和 &-19 訊-19 與Η-2β，Η-6和 &-30 ;W 及&-30與Η-6Ν犯信號增強，表明Η-2β，Η-6,Me-19,Me-29和Me-30是β構型，因而C-6 位的徑基α構型。此外，J5,e(12. 5化）的大小表明Η-5是α構型，從而確定了Η-9和Me-18 為曰構型，R犯SY譜中H-9與H-5和H3-I8相關性驗證了上述推論。另外，Ji,2e化4Hz)， J2e,3(2.細z)和Je,7(3.2Hz)較小的禪合常數表明和H-7為β構型，從而使得C-1，C-3，C-7位的取代基團均為α構型。最后，通過與其他具有相同C，D環的巧樣苦素類化合 物比較核磁數據，確定17-0H為β構型。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和R犯SY譜，W及文獻關 于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構型進一步通過ECD試驗確 定，理論值與實驗值基本一致（圖2)。
[002引實施例2 :化合物（I)藥理作用試驗[0027]一、材料和儀器
[002引新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF級），雌雄不拘，由廣西醫科大學實驗動物中屯、提 供（試驗動物生產許可證：SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(純度> 98% )為自制。胎 牛血清購于曲010116公司，016]\1培養基購于0180)公司，二甲