魏察酸漿苦素y及提取方法及用圖
【專利摘要】本發明公開了魏察酸漿苦素Y及提取方法及用途，魏察酸漿苦素Y具有式(I)的結構：本發明的魏察酸漿苦素Y能有效地抑制一氧化氮(NO)的釋放，提示本發明化合物可作為抗炎的藥物。
【專利說明】
魏察酸漿苦素 Y及提取方法及用途
技術領域
[0001]本發明涉及中藥提取領域，涉及魏察酸漿苦素 Υ及提取方法和其在制備抗炎藥物 的用途。
【背景技術】
[0002]苦藤(Physalis angulata L.)，又稱燈籠草、天泡子、天泡草、樸樸草、打額泡等， 為前科(Solanaceae)酸衆屬(Physalis)-年生草本植物。《陸川本草》和《中華本草》對苦藤 的藥用功效有著詳細的記載，苦藤具有行氣，消脹，利尿，治腹脹，清熱解毒，利尿止血，消腫 散結，可用于治療咽喉腫痛，肺癰，腮腺炎;小便不利，血尿牙齦腫痛，天皰瘡等疾病。民間多 用于治療皰瘡、牙齦腫痛、濕熱黃疸、咽喉紅腫疼痛、肺熱咳嗽等疾病。國內外學者通過體 內、體外實驗證實了苦藤的抗炎（Choi, E.M.;et al.Investigations of antiinflammatory and antinociceptive activities of Piper cubeba,Physalis angulata and Rosa hybrida. Journal of Ethnopharmacology 2003,89,171-175.)、抗腫瘤（He,H·; et al.Physalin A induces apoptotic cell death and protective autophagy in HT1080human fibrosarcoma cells.Journal of Natural Products,2013,76,880-888.)n 抗菌（Si lva，M · T · G · ; et al. Studies on antimicrobial activity , in vitro , of Physalis angulata L.(Solanaceae)fraction and physalin B bringing out the importance of assay determination.Memorias do Instituto Oswaldo Cruz 2005, 100,779-782·)、抗氧化（Choi,E.M.;et al.Effect of some medicinal plants on plasma antioxidant system and lipid levels in rats.Phytotherapy research · 2005，19，382-386 ·)等作用。
[0003] 但從苦藤中提取魏察酸漿苦素 Y及提取方法和用途尚未見報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供魏察酸漿苦素 Υ。
[0005] 本發明的第二個目的是提供魏察酸漿苦素 Υ的提取方法。
[0006] 本發明的第三個目的是提供魏察酸漿苦素 Υ的用途。
[0007] 本發明的第四個目的是提供含魏察酸漿苦素 Υ的藥物組合物；
[0008] 本發明的第五個目的是提供含魏察酸漿苦素 Υ的藥物組合物的用途。
[0009] 本發明的技術方案概述如下：
[0010] 魏察酸漿苦素 Υ，具有式(I)的結構：
[0012] 魏察酸漿苦素 Y的提取方法，包括如下步驟：
[0013] (1)以苦藤的干燥莖葉為原料，加入原料8-10質量倍的體積分數為60-80 %乙醇水 溶液，回流提取2-3次，每次提取2-3小時，合并得到提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得到總浸 膏；
[0014] (2)將總浸膏分散到5-10質量倍的水中，依次用石油醚和乙酸乙酯進行萃取，乙酸 乙酯萃取液減壓回收溶劑，得到乙酸乙酯層浸膏；
[0015] (3)乙酸乙酯層浸膏經硅膠柱色譜分離，以體積比分別為100:1、50:1和30:1的二 氯甲烷一甲醇為洗脫劑梯度洗脫，得到餾分Fr. 1、Fr. 2和Fr. 3;
[0016] (4)餾分Fr. 3經硅膠柱色譜分離，以體積比分別為10:1、8:1和6:1的石油醚一丙酮 為洗脫劑梯度洗脫，得到餾分Fr. 3-1、Fr. 3-2和Fr. 3-3;
[0017] (5)餾分Fr.3-3經Sephadex LH-20柱色譜分離，以體積比為1:1的二氯甲烷-甲醇 為洗脫劑等度洗脫，得到餾分Fr. 3-3-1和Fr. 3-3-2;
[0018] (6)餾分Fr. 3-3-2經0DS柱色譜分離，以體積比為1:9、3 :7、5:5和8: 2的甲醇-水為 洗脫劑梯度洗脫，得到饋分Fr · 3H-1、Fr · 3m、Fr · 3H-3和Fr · 3-3H;
[0019] (7)餾分Fr.3-3-2-4經硅膠制備薄層色譜分離，以體積比為1:1的二氯甲烷一丙酮 為展開劑進行制備，得到餾分Fr. 3-3-2-4-1和Fr. 3-3-2-4-2;
[0020] (8)餾分Fr.3-3-2-4-2經制備HPLC色譜，以體積比為1:1的甲醇-水為流動相，進行 純化，得到式I所示魏察酸漿苦素 Y。
[0021 ]魏察酸漿苦素 Y在制備抑制細胞釋放N0藥物中的應用。
[0022]包含魏察酸漿苦素 Y的苦藤提取物。
[0023]苦藤提取物在制備抑制細胞釋放N0藥物中的應用。
[0024] -種藥物組合物，包含魏察酸漿苦素 Y或其藥學上可接受的鹽，和藥學上可接受的 載體和/或賦形劑。
[0025]藥物組合物在制備抑制細胞釋放N0藥物中的應用。
[0026] 本發明的優點：
[0027] 本發明的魏察酸漿苦素 Y能有效地抑制一氧化氮(N0)的釋放，提示本發明化合物 可作為抗炎的藥物。
【具體實施方式】
[0028] 下面將結合具體實施例對本發明的技術方案進行描述，所描述的實施例僅僅是本 發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在 沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0029] 實施例1
[0030] 魏察酸漿苦素 Y的提取方法，包括如下步驟：
[0031] (1)以苦藤(Physalis angulata L.)的干燥莖葉（9.5kg)為原料，加入原料9質量 倍的體積分數為75%乙醇水溶液，回流提取2次，每次提取2小時，合并得到提取液，減壓回 收溶劑，濃縮后得到總浸膏（1370g);
[0032] (2)將總浸膏分散到5質量倍的水中，依次用等體積石油醚和乙酸乙酯進行萃取， 乙酸乙酯萃取液減壓回收溶劑，得到乙酸乙酯層浸膏116g;
[0033] (3)乙酸乙酯層浸膏經硅膠柱色譜分離，以體積比分別為100:1、50:1和30:1的二 氯甲烷一甲醇為洗脫劑梯度洗脫，得到餾分Fr.l、F r.2、Fr.3(35g);
[0034] (4)餾分Fr. 3經硅膠柱色譜分離，以體積比分別為10:1、8:1和6:1的石油醚一丙酮 為洗脫劑梯度洗脫，得到餾分Fr. 3-1、Fr. 3-2、Fr. 3-3(4.2g);
[0035] (5)餾分Fr.3-3經Sephadex LH-20柱色譜分離，以體積比為1:1的二氯甲烷-甲醇 為洗脫劑等度洗脫，得到餾分Fr. 3-3-1和Fr. 3-3-2 (600mg);
[0036] (6)餾分Fr. 3-3-2經0DS柱色譜分離，以體積比為1: 9、3 : 7、5:5和8: 2的甲醇-水為 洗脫劑梯度洗脫，得到餾分Fr · 3-3-2-1、Fr · 3-3-2-2、Fr · 3-3-2-3和Fr · 3-3-2-4( 500mg);
[0037] (7)餾分Fr.3-3-2-4經硅膠制備薄層色譜分離，以體積比為1:1的二氯甲烷一丙酮 為展開劑進行制備，得到餾分Fr. 3-3-2-4-1和Fr. 3-3-2-4-2( 100mg)
[0038] (8)餾分Fr.3-3-2-4-2經制備HPLC色譜，以體積比為1:1的甲醇-水為流動相，進行 純化，得到化合物1 (1 〇mg)。
[0039] 化合物1的物理化學和常數如下：
[0040] 化合物 1:無定型粉末;[?]f +12 0(c 0.1，Me0H);UV(Me0H)Amax(l〇ge)226(3.7)nm; IR(KBr)vmax 3395,2921,2850,1769,1714,1646,1469,1384,1247,113901^40)((:0.1， Me0H)245(+37.3);HRES頂E m/z 521.2162[M+Na] + (calcd for C28H34〇8Na，521.2151)，確定 化合物 1 的分子式為 CsoitoOsjHHOOMHzAyridine-ds)和 13C-NMR(100MHz，pyridine-d5)數 據見表1。
[0041] 表1化合物1的碳譜和氫譜數據
[0043] 注 ^H-NMRJOOMHz，pyridine_d5; 13C-NMR，100MHz，pyridine_d5 ·
[0044] 通過理化常數和現代波譜學手段(MS和NMR)，結合文獻相關數據，鑒定它的結構， 化合物1為未見文獻報道的新化合物，如下所示：
[0046] 實施例2
[0047] 魏察酸漿苦素 Y的提取方法，包括如下步驟：
[0048] (1)以苦藤的干燥莖葉為原料，加入原料8質量倍的體積分數為80 %乙醇水溶液， 回流提取3次，每次提取2小時，合并得到提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得到總浸膏；
[0049] (2)將總浸膏分散到5質量倍的水中，依次用等體積石油醚和乙酸乙酯進行萃取， 乙酸乙酯萃取液減壓回收溶劑，得到乙酸乙酯層浸膏；
[0050] (3)-(7)同實施例1(3)_(7)。
[0051 ] 實施例3
[0052]魏察酸漿苦素 Y的提取方法，包括如下步驟：
[0053] (1)以苦藤的干燥莖葉為原料，加入原料10質量倍的體積分數為60 %乙醇水溶液， 回流提取3次，每次提取2小時，合并得到提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得到總浸膏；
[0054] (2)將總浸膏分散到10質量倍的水中，依次用等體積石油醚和乙酸乙酯進行萃取， 乙酸乙酯萃取液減壓回收溶劑，得到乙酸乙酯層浸膏；
[0055] (3)-(7)同實施例1(3)_(7)。
[0056] 實施例4
[0057]魏察酸漿苦素 Y抑制小鼠巨噬細胞RAW 264.7釋放一氧化氮(N0)的活性測試 [0058] 小鼠巨噬細胞RAW 264.7(ATCC)培養于含10%熱滅活（56°C，30min)胎牛血清 (FBS)、100U/mL 青霉素鈉(Gibco)、100yg/mL 鏈霉素(Gibco)的 RPMI 1640(Gibco)培養液中， 37°C，5%C02的恒溫培養箱中孵育生長。由于N0極不穩定，在細胞培養上清液內很快代謝成 亞硝酸基(N0 2-)，故采用Griess法測定樣品中N02-的濃度作為衡量N0水平的指標。Griess試 劑A:0· 1 %N_萘乙二胺鹽酸鹽（naphthylethylene diamine dihydrochloride)溶于水中； Griess試劑B: 1%對氨基苯磺酰胺(sulphanilamide)溶于5%H3P〇4中。使用前等體積混合試 劑八和8。用1^]\〇 1640培養液將1^1 264.7細胞稀釋至5\105〇6118/1^濃度，接種于96孔細 胞培養板中，每孔加入1〇〇μL細胞懸浮液。C0 2培養箱中培養lh后，每孔加入脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS) (Sigma)(終濃度lyg/mL)和DMS0溶解的不同濃度的測試樣品 0.4yL，同時設LPS組(加入LPS，但不加入測試樣品，對N0釋放的抑制率為0% )和空白對照組 (不加入LPS和測試樣品，僅加入0.4yL DMS0，對N0釋放的抑制率為100 % )，每個樣品設4個 平行孔。在37°C，5%C02的恒溫培養箱中培養24h，吸取100yL培養液上清至酶標板中，離心 (1000 Xg，4°C，3min)，加入100yL Griess試劑，室溫避光反應10min，于酶標儀測定其540nm 處吸光值。用濃度分別為1、5、10、50ym〇VL的NaN02繪制標準曲線，根據NaN02標準曲線細胞 培養上清液中NOf的濃度進而計算測試樣品對N0釋放的抑制率。
[0059]表2化合物的抑制N0釋放結果 [0060]
[0061] 含有本發明所述化合物的組合物的抗炎藥物可以為適用于口服或注射等應用形 式，例如，按常規技術，加入藥物可接受的載體和/或賦形劑制成片劑、膠囊劑、粉劑、糖漿 劑、針劑等。
[0062] 化合物具有藥理活性，因此，含有該化合物的組合物也具有藥理活性。
[0063] 以上實施例的說明只是用于幫助理解本發明的方法及其中心思想。應當指出，對 于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行若干 改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護。
[0064] 本發明的魏察酸漿苦素 Y、含魏察酸漿苦素 Y的提取物、含魏察酸漿苦素 Y的組合物 能制備治療一氧化氮代謝異常相關聯疾病的藥物。
[0065] 其相關聯的疾病包括:全身炎癥反應綜合癥、高血壓、腦血栓、心力衰竭、肝硬化、 類風濕性關節炎、骨關節炎、脊柱關節炎、炎性腸病、急性胰腺炎、腹膜炎、膽囊炎、闌尾炎、 糖尿病、系統性紅斑狼瘡、皮炎肌、銀肩病、急性髓性白血病、帕金森癥、早老性癡呆、抑郁 癥、敗血癥、慢性阻塞性肺炎、哮喘、急性胰腺炎、中樞神經損傷等。其次，N0代謝異常還與癌 變及癌組織的增生有關，高濃度的N0也會誘發基因突變和腫瘤，上述化合物可以抑制N0釋 放，從而發揮抗腫瘤的作用。適用的腫瘤例子包括但不限于:各種實體腫瘤和白血病，如肺 癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、前列腺癌、結腸癌、卵巢癌、膀胱癌、子宮頸癌、黑色素 瘤、睪丸癌、支氣管癌、腎細胞癌、膽管癌、絨毛膜癌、膠質細胞瘤、神經纖維瘤、纖維肉瘤、淋 巴管瘤等。
【主權項】
1. 魏察酸漿苦素 Y，其特征是具有式(I)的結構：2. 權利要求1所述魏察酸漿苦素 Y的提取方法，其特征在于包括如下步驟： (1) 以苦藤的干燥莖葉為原料，加入原料8-10質量倍的體積分數為60-80%乙醇水溶 液，回流提取2-3次，每次提取2-3小時，合并得到提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得到總浸 膏； (2) 將總浸膏分散到5-10質量倍的水中，依次用石油醚和乙酸乙酯進行萃取，乙酸乙酯 萃取液減壓回收溶劑，得到乙酸乙酯層浸膏； (3) 乙酸乙酯層浸膏經硅膠柱色譜分離，以體積比分別為100:1、50:1和30:1的二氯甲 烷一甲醇為洗脫劑梯度洗脫，得到餾分Fr. 1、Fr. 2和Fr. 3; (4) 餾分Fr. 3經硅膠柱色譜分離，以體積比分別為10:1、8:1和6:1的石油醚一丙酮為洗 脫劑梯度洗脫，得到餾分Fr. 3-1、Fr. 3-2和Fr. 3-3; (5) 餾分Fr.3-3經Sephadex LH-20柱色譜分離，以體積比為1:1的二氯甲烷-甲醇為洗 脫劑等度洗脫，得到餾分Fr. 3-3-1和Fr. 3-3-2; (6) 餾分Fr. 3-3-2經ODS柱色譜分離，以體積比為1:9、3: 7、5: 5和8: 2的甲醇-水為洗脫 劑梯度洗脫，得到饋分Fr · 3H-1、Fr · 3m、Fr · 3-3?和Fr · 3-3H; (7) 餾分Fr.3-3-2-4經硅膠制備薄層色譜分離，以體積比為1:1的二氯甲烷一丙酮為展 開劑進行制備，得到餾分Fr. 3-3-2-4-1和Fr. 3-3-2-4-2; (8) 餾分Fr. 3-3-2-4-2經制備HPLC色譜，以體積比為1:1的甲醇-水為流動相，進行純 化，得到式I所示魏察酸漿苦素 Y。3. 權利要求1的魏察酸漿苦素 Y在制備抑制細胞釋放NO藥物中的應用。4. 包含魏察酸漿苦素 Y的苦藤提取物。5. 權利要求4的苦藤提取物在制備抑制細胞釋放NO藥物中的應用。6. -種藥物組合物，其特征是包含魏察酸漿苦素 Y或其藥學上可接受的鹽，和藥學上可 接受的載體和/或賦形劑。7. 權利要求6的藥物組合物在制備抑制細胞釋放NO藥物中的應用。
【文檔編號】A61K31/585GK105949272SQ201610339179
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月20日
【發明人】邱峰, 孫成鵬, 趙烽, 陳麗霞, 康寧, 丁麗琴
【申請人】天津中醫藥大學