一種檸檬苦素類化合物及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種新的檸檬苦素類化合物及其制備方法，屬于藥物技術領域。該化合物為首次報道，是一種結構新穎的檸檬苦素類化合物，可以從干燥的陳皮中提取、分離純化得到。體外試驗證明該化合物具有清除自由基和活性氧的抗氧化特性，對H2O2氧化損傷血管內皮細胞具有保護作用，可以用來開發成血管保護的藥物。
【專利說明】
一種檸檬苦素類化合物及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從干燥的陳皮中分離得到的一種檸檬苦素類 化合物，含其的藥物組合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 陳皮是蕓香科植物橘(Citrus reticulata Blaneo)及其栽培變種的干燥成熟果 皮。采摘成熟果實，剝取果皮，曬干或低溫干燥。味苦、辛，性溫，具有理氣健脾、燥濕化痰作 用，用于脘腹脹滿，食少吐瀉，咳嗽痰多。藥材分為"陳皮"和"廣陳皮"。一般來說，陳皮果皮 常剝成數瓣，基部相連或呈不規則碎片。外表面橙黃色或紅棕色，有細皺紋及凹下的點狀油 室；內表面黃白色，粗糙呈海綿狀，附黃白色或黃棕色筋絡狀維管束，質稍硬而脆，氣香，味 辛而微苦。而廣陳皮果皮則多剖成3至4瓣，基部相連，形狀整齊有序，厚度約1毫米。點狀油 室較大，對光照視透明清晰，質較柔軟。但是不管是陳皮還是廣陳皮都以片大、色鮮、油潤、 質軟、香氣濃、味甜苦辛者為佳。主產于廣東、福建、四川、江蘇、浙江、江西、湖南等地。
[0003] 陳皮主要含有揮發油、黃酮類、有機胺類及微量元素等成分。陳皮含揮發油約占 2%~4%，主要成分為梓檬苦素和梓檬醛。
[0004] 現代藥理學表明陳皮在心血管、胃腸道、呼吸道、內分泌、抗癌、抗衰老、養顏美容、 營養補虛方面具有很好作用，這為陳皮深度開發提供廣闊前景。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種從干燥的陳皮中分離得到的一種檸檬苦素類化合物，含 其的藥物組合物及其制備方法。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] -種檸檬苦素類化合物，具有下述結構式的化合物(I):
[0008]
[0009]所述的化合物(I)的制備方法，包含以下操作步驟：
[0010] (a)將干燥的陳皮粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味， 依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物 和正丁醇萃取物；
[0011] (b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個柱體積，再 用70 %乙醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；
[0012] (C)步驟(b)中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、30:1、 15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；
[0013] (d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；
[0014] (e)步驟（d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為 70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物 (1)〇
[0015] 進一步地，步驟(a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0016]進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0017] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載 體。
[0018] 本發明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0019] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0020] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
[0021] 與現有技術相比，本發明的有益效果體現在：
[0022]體外試驗證明該化合物（I)具有清除自由基和活性氧的抗氧化特性，對H202氧化損 傷血管內皮細胞具有保護作用，可以用來開發成血管保護的藥物。
【附圖說明】
[0023] 圖1為化合物(I)結構式；
[0024] 圖2為化合物（I)計算E⑶和實驗E⑶圖。
【具體實施方式】
[0025] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0026] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0027]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0028]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0029] (a)將干燥的陳皮(8kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(30L X 3次），合并提取液，濃 縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯（6L X 3次)和水飽和的正丁醇(6L X 3 次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（375g)和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個 柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物（129g);(c)步驟(b)中70 %乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、30:1 (8個柱體積）、15:1 (8 個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個組分；（d)步驟(c)中組分 4(27g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1 (8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(15g)用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個 柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)(38mg)。
[0030] 結構確證：白色無定形粉末;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z 553.2402，結合核磁特 征可得分子式為C29H38O9，不飽和度為11。核磁共振氫譜數據δΗ(ρρηι，DMS0_d6，500MHz):H-1 (4.03，t，J = 5.7)，H-2(2.76，dd，J=14.9,5.7)，H-2(2.61，dd，J=14.9,5.7)，H-5(2.54， dd，J = 7.5,3.6)，H-6(2.39，m)，H-9(3.29，d，J = 8.7)，H-ll(4.26，t，J = 8.7)，H-12(5.38， d，J = 8.7)，H-15(3.78，s)，H-16(1.71，m)，H-16(2.15，dd，J=14.0,7.4)，H-17(2.90，dd，J =10.8,7.4)，H-18(0.80，s)，H-19(0.97，s)，H-21(7.03，s)，H-22(6.07，s)，H-23(7.23，s)， H-28(0.91，s)，H-29(1.02，s)，H-30(5.21，s)，H-30(5.22，s)，7-0CH 3(3.63，s)，12-0Ac (1 · 79，s);核磁共振碳譜數據Sc(ppm，DMS〇-d6，125MHz): 82 · 1 (CH，1-C)，39 · 5(CH2，2-C)， 212.8(C，3-C)，48.0(C，4-C)，48.7(CH，5-C)，31.2(CH2,6-C)，174.1(C，7-C)，138.2(C，8-C)，56.0(CH，9-C)，48.1(C，10-C)，80.1(CH，11-C)，76.2(CH，12-C)，44.5(C，13-C)，71.4(C， 14-C)，58.9(CH，15-C)，33.7(CH2，16-C)，37.7(CH，17-C)，14.1(CH 3，18-C)，17.9(CH3，19-C)，122.6(C，20-C)，140.1(CH，21-C)，111.1(CH，22-C)，142.3(CH，23-C)，25.2(CH 3,28-C)， 20.8(CH3,29-C)，119.1(CH2,30-C)，52.2(CH3,7-0CH3)，170.7(C，12-0Ac)，21.1(CH 3，12-〇Ac);碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明該化合物含有羥基(3442CHT1)和羰基（17380^ 1) 基團。13C NMR譜和DEPT譜顯示有29碳信號，其中包括六個甲基，四個亞甲基（一個烯烴亞甲 基），十個次甲基(三個烯烴碳，四個含氧碳），以及九個季碳(兩個烯烴碳，三個羰基碳，一個 含氧季碳）。此外，該化合物含有一個β單取代呋喃環[叱122.6(C-20)，140.1 (C-21)，111. 1 (C-22)和 142.3(023)]，根據 HMBC 譜中 H-17(δH2·90，dd，J=10·8,7·4Hz)與C-20，C-21和C-22的相關性，可推斷呋喃環位于C-17位上。通過核磁數據分析可知該化合物是一個B環開環 的檸檬苦素類化合物。C-1(SC82.1)和C-11(SC80.1)之間通過氧原子相連組成一個五元環。 HMBC 譜中Me-19(SH0.97，s)與〇1，!1-1(5!14.03，^ = 5.7!^)與(：-11的相關性，以及1!1-1!1 COSY 譜中 H-1 與 H2-2(SH2.76，dd，J=14.9,5.7Hz;2.61，dd，J=14.9,5.7Hz)，H-ll(SH4.26， ^ = 8.7抱）與!1-120!15.38，(1，1 = 8.7抱）的交叉峰表明1，11-環氧環的存在。腿8(：譜中，!1-1，]^-28〇!10.91，8)和]\^-29(5!11.02,8)與(：-3(50212.8)的相關性表明(：-3為酮羰基。腿8〇 譜中，!1-120!15.38，(1，1 = 8.7抱）與乙酰羰基0(：17〇.7)的相關性，表明(：-120〇76.2)位連 有一個乙酰氧基。R0ESY譜中，Me-19與Me-29和H-12,以及H-12與H-17相關性表明它們為β-構型。此外，Η-9與Η-11，Η-9與Η-5，Η-5與Me-28以及Η-ll與Me-18的交叉峰表明它們均為的 α_構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定 該化合物如圖1所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致(圖2)。
[0031]實施例2:化合物(I)藥理作用試驗 [0032] -、材料和儀器
[0033]血管內皮細胞(ECV-304)由山東大學醫學院免疫教研室饋贈。化合物（I)自制，制 備方法見實施例1，HPLC歸一化純度大于98 %。RPMI-1640干粉培養基、胰蛋白酶購于美國 Gibeo公司。胎牛血清購于天津TBD公司。MTT、瓊脂糖、AnnexinV-FITC購于美國Sigma公司。 0)!1、10^、500、65!?^測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所。0150購于中國醫藥(集團） 上海化學試劑有限公司。蘇木素購于福州邁新生物技術有限公司。Rhodamine 123購于美國 Solarbic公司。陽性藥川考嗪購自上海源葉生物科技有限公司。
[0034] 倒置光學顯微鏡（日本OlymPus公司），二氧化碳培養箱(美國Forma Scientific公 司），電子分析天平(ER-182A型）（日本A&D公司），超凈工作臺（ZHJH-1209型）（上海智城分析 儀器制造有限公司），流式細胞儀(FACS Vantage型）（美國Beeton Diehnson公司），恒溫振 蕩器（江蘇太倉市實驗設備廠），1420Vietor3多標記分析儀（美國PerkinElmer Lifescience公司），721型可見紫外光柵分光光度計(上海精密科學有限公司），電熱恒溫水 浴箱(上海醫療儀器三廠生產），酶聯免疫檢測儀(MK3Multiskan)(上海Thermo Labsystem 分析儀器公司）。
[0035]二、試驗方法 [0036] 1、細胞培養
[0037] ECV-304細胞以RPMI-1640培養基于37°C，5%⑶2培養箱中傳代培養。鏡下觀察，待 細胞匯合率達到70%以上時用胰蛋白酶消化傳代，以生長穩定的第3-5代細胞制備細胞懸 液。
[0038] 2、細胞分組及處理
[0039]取生長良好的ECV-304細胞制成細胞懸液，接種于96孔、24孔、6孔細胞培養板或培 養皿中，37°C，5%C02培養24h。隨機分為六組:①正常組;②H2〇2模型組（150ymol/L);③川芎 嗪（TMP)(50ymol/L)+H 2〇2 組；④化合物（I)(10ymol/L)+H2〇2 組；⑤化合物（I)(50ymol/L) + 出02組；?化合物（I) (1 〇〇μπιο 1 /L) +H2〇2 組。
[0040] 3、實驗項目及檢測指標
[0041 ] 3 · 1MTT法檢測細胞活力
[0042] 將生長良好的ECV-304細胞制備成5X104/mL的細胞懸液，按每孔100yL接種于96 孔板，置37°C，5%C02孵育24h。細胞分組及處理上。繼續培養6h和12h后，每孔加入10yL MTT 溶液(終濃度0.5mg/L)置37 °C，5 % C02培養箱孵育4h后，每孔加入100yL DMS0，靜置10min后 振蕩60s，30min內置酶聯免疫檢測儀上檢測570nm處吸光度值(OD57 〇)。
[0043] 按公式：細胞損傷抑制率=(用藥組0D57Q-模型組0D57Q)A正常組0D 57Q-模型組 OD570) X 100%，計算細胞損傷抑制率。
[0044] 3.2LDR釋放率測定
[0045] 取生長良好的ECV-304細胞制成1 X 105/mL的細胞懸液接種于24孔板，置37°C，5% C〇2孵育24h。細胞分組及處理同上。繼續培養6h和12h，收集培養上清液。PBS洗滌2次后，每 孔加入0·5mL細胞裂解液（150mm。l/LNaCl，150mm。l/LTris-HCI，lmm。l/LEDTA，l% TritonX-100)，于4°C靜置15min后振蕩數分鐘，10000rpm，4°C離心10min收集細胞裂解液， 參照LDH試劑盒說明書分別測定上清液和細胞裂解液中的LDH活性。
[0046] 按公式:LDH釋放率=上清液中LDH活性/ (上清液中LDH活性+細胞裂解液中LDH活 性）' X 100 %，計算LDH釋放率。
[0047] 3 · 3酶生化法測定MDA含量、S0D活力、GSH-Px活力
[0048] 取生長良好的ECV-304細胞制成1 X 105/mL的細胞懸液接種于24孔板，置37°C，5% C〇2孵育24h。細胞分組及處理同上。繼續培養12h，收集培養上清液。按MDA、SOD、GSH-Px檢測 試劑盒說明書測定細胞MDA含量、SOD活力、GSH-Px活力。
[0049] 4、數據處理
[0050] Microsoft Excel自帶的統計軟件進行處理，實驗數據以表示，組間差異用t 檢驗。
[0051 ]三、結果及結論
[0052] 1、化合物（I)對H20^iECV-304細胞生存率的影響
[0053]正常活細胞線粒體能量代謝過程中產生琥珀酸脫氫酶，可將淡黃色MTT還原成不 溶于水的藍紫色的甲臘結晶，結晶數量與活細胞數成正比。本實驗結果顯示:ECV-304細胞 經H2〇 2(15〇ym〇l/L)氧化損傷6h和12h后，細胞0D值明顯降低且與正常組相比具有統計學意 義(P〈0.01)，表明細胞活力下降。而化合物（I)對細胞具有保護作用，能顯著抑制H 2〇2對細胞 的氧化損傷，提高存活率。作用6h，50、100μ mol/L化合物（I)對細胞損傷抑制率分別為 16.67%(?〈0.05)和28.21%(?〈0.01)。作用1211，10、50、10(^111〇1/1化合物（1)對細胞損傷抑 制率提高為24 · 85% (P〈0 · 05)，29 · 64% (P〈0 · 01)和38 · 47 % (P〈0 · 01)。見表 1 (**P〈0 · Olvs Normal;#P〈0.05，#P〈0.01vs 出02區『〇即；~〈0.05，^^〈0.01丫8 TMP group，下同）〇
[0054] 2、化合物（I)對H2〇2損傷ECV-304細胞LDH釋放率的影響
[0055] 乳酸脫氫酶能催化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸與2,4-二硝基苯肼反應生成丙酮酸二 硝基苯腙，在堿性溶液中呈棕紅色，通過比色測定反應產物可間接求出乳酸脫氫酶活力。結 果表明：與正常組相比，模型組ECV-304細胞LDH釋放率顯著增高(P〈0.01)。與模型組比，化 合物（I)各組細胞LDH釋放率均減少：10、50、100μπιο 1/L化合物（I)作用6h，細胞的LDH釋放率 降為 20.54%(?〈0.01)和21.22%(卩〈0.01);50、10(^111〇1/1化合物（1)作用1211，細胞的0)!1釋 放率降為33.64% (P〈0.01)和29.53% (P〈0.01)。化合物（I)隨濃度的增加，對氧化損傷ECV-304細胞的保護作用也逐漸增強，呈現出一定的量效關系。結果見表2。
[0056] 3、化合物（I)對H2〇2損傷ECV-304細胞MDA含量、SOD、GSH-Px活力的影響 [0057] 實驗結果表明：與正常組比模型組ECV-304細胞培養液中MDA含量顯著增高（P〈 〇. 〇1)。與模型組相比，10、50、100μ mol/L化合物（I)組細胞MDA生成量均明顯減少，分別為 3.00±0.79nmol/mL(P〈0.05)，2.86±0.75nmol/mL(P〈0.05WP2.69±0.45nmol/mL(P〈 〇. 01)。化合物（I)各濃度組組間對照顯示，隨濃度的增加，化合物（I)對ECV-304細胞脂質過 氧化損傷的保護作用也逐漸增強，呈現一定的量效關系。結果見表3。
[0058] 實驗結果表明：與正常組相比，模型組ECV-304細胞S0D活性顯著降低(P〈0.01)。與 模型組相比，50、100μ mol/L化合物（I)均可增強ECV-304細胞的S0D活性，S0D活性分別提高 為 17.9±1.341]/111以？〈0.05)和19.25±0.811]/111以？〈0.01)。且隨濃度的增加，細胞的500活 性也逐漸提高，表明化合物（I)可增強ECV-304細胞的抗氧自由作用，具一定量效關系；10μ mol/L化合物（I)雖也可提高SOD活性，但不具有顯著統計學意義。見表3。
[0059] 實驗結果表明：與正常組相比，模型組ECV-304細胞培養液中GSH-Px活性顯著降低 (P〈0.01)。與模型組相比，10、50、100μ mol/L化合物（I)組細胞GSH-Px活性均顯著提高，分別 為 73.8±10.31]/111以？〈0.05)，92.2±8.51]/111以？〈0.01)和102.5±10.31]/111以？〈0.01)。且隨 化合物（I)濃度的增加，ECV-304細胞的GSH-Px活性也逐漸提高，表明細胞抗氧化作用的能 力也逐漸增強，呈現一定的量效關系。結果見表3。
[0060] 總結:本實驗采用H2〇2作為外源性自由基生成系統，能夠誘導血管內皮細胞(ECV-304)氧化應激損傷，促進細胞凋亡。通過MTT法和LDH活性檢測證實化合物（I )對出02氧化損 傷細胞具有保護作用；通過細胞上清液MDA含量、S0D活性、GSH-Px活性的測定，證實化合物 (I)有清除自由基和活性氧的抗氧化特性。
[0061 ]表1化合物（I)對H20；^iECV-304細胞生存率的影響(?土s，n = 8)
[0062]
[0063] 表2化合物（I)對H202損傷ECV-304細胞LDH釋放率的影響(X 土 s，η = 8)
[00641
[0065] 表3化合物（I)對Η2〇2損傷ECV-304細胞MDA含量、S0D、GSH-Px活力的影響（又土 s，n = 8)
[0066]
[0067] 實施例3
[0068] 片劑的制備:按實施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機酸如酒石酸、或檸檬 酸或甲酸或乙二酸等、無機酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦形劑重量比為1:7的 比例加入賦形劑，制粒壓片。
[0069] 實施例4
[0070] 口服液的制備:按實施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機酸如酒石酸、或檸 檬酸或甲酸或乙二酸等、無機酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按常規口服液制法制成口 服液。
[0071] 實施例5
[0072] 膠囊劑或顆粒劑的制備：按實施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機酸如酒 石酸、或檸檬酸或甲酸或乙二酸等、無機酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦形劑重 量比為1:9的比例加入賦形劑，制成膠囊或顆粒劑。
[0073] 實施例6
[0074] 注射液的制備:按實施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機酸如酒石酸、或檸 檬酸或甲酸或乙二酸等、無機酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按常規加注射用水，精濾， 灌封滅菌制成注射液。
[0075] 實施例7
[0076] 無菌粉針的制備:按實施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機酸如酒石酸、或 檸檬酸或甲酸或乙二酸等、無機酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，將其溶于無菌注射用水 中，攪拌使溶，用無菌抽濾漏斗過濾，再無菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后無菌熔封 得粉針劑。
[0077] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種巧樣苦素類化合物.其特佈在于.具有下沐結構式的化合物（I):2. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于包含W下操作步驟： (a) 將干燥的陳皮粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次 用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正 下醇萃取物； (b) 步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙 醇洗脫8個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物； (C)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、30:1、15:1 和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分； (d) 步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分； (e) 步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的 甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。3. 根據權利要求2所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于：步驟(a)中，用75%乙醇 熱回流提取，合并提取液。4. 根據權利要求2所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。5. -種藥物組合物，其特征在于：其中含有治療有效量的權利要求1所述的化合物（I) 和藥學上可接受的載體。
【文檔編號】A61K31/343GK105906594SQ201610392062
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月3日
【發明人】吳芊葭
【申請人】吳芊葭