[0108] ②將菌株接種于上述平板后放置于4°C、10 °C、20 °C、28 °C、37 °C、45 °C、60 °C培養 2-3天后觀察實驗結果見下表3。
[0109] 表3不同培養溫度實驗結果
[0111] 注："+〃為可以生長，為不能生長。
[0112] 實施例7菌株的鹽耐受性（NaCl)研究
[0113] ①基礎培養基：胰蛋白胨17g，大豆胨3g，NaCl 5g，葡萄糖2. 5g，K2HP04 2. 5g，將以 上成分加熱溶解，蒸餾水補充至lOOOmL，調pH為7. 0,121°C滅菌20min，倒平板備用；
[0114] ②配制培養基時，將基礎培養基中NaCl的濃度調整為2%、5%、7%、10%、12%、 15% ；
[0115] ③劃線接種培養2-3天后觀察實驗結果見下表4。
[0116] 表4鹽耐受性（NaCl)實驗結果
[0117]
[0118] 注："+〃為可以生長，為不能生長。
[0119] 實施例8糖的利用
[0120] ①基礎培養基：胰蛋白胨17g，大豆胨3g，NaCl 5g，葡萄糖2. 5g，K2HP04 2. 5g，將以 上成分加熱溶解，蒸餾水補充至lOOOmL，調pH為7. 0,121°C滅菌20min，倒平板備用；
[0121] ②配制培養基時，將基礎培養基中葡萄糖替換為乳糖、蔗糖、D-甘露醇、葡萄糖；
[0122] ③劃線接種培養2-3天后觀察實驗結果見下表5。
[0123] 表5糖的利用實驗結果
[0125] 注："+〃為可以生長，為不能生長。
[0126] 實施例9菌株HBRM-16對橡膠苗生長的促進作用
[0127] 1、材料
[0128] 供試幼苗材料：選取在沙床煉化、生長均一的巴西橡膠樹CATAS7-33-97體胚組培 苗（文中簡稱橡膠苗）為試驗對象。供試幼苗材料由中國熱帶農業科學院橡膠研究所育種 中心提供。
[0129] 供試基質：磚紅壤，采自海南省儋州市，過6_篩，去除雜草、殘根等雜物后與椰糠 按體積比2:1混合均勻。
[0130] 2、試驗設計
[0131] 試驗采用溫室盆栽法，地點設在中國熱帶農業科學院橡膠研究所試驗場B點溫室 大棚，采用上口徑15cm，下口徑10cm，高40cm的黑色塑料盆為容器，每盆裝土重2. 7kg，每個 處理和對照各10盆，三次重復，共60盆。
[0132] 將橡膠苗種下以后管理一個月，待每株苗都正常生長再開始處理，處理時用菌懸 液灌根，每株澆灌200ml菌懸液，每IOd澆灌1次，共3次（30d)，以強化細菌在根際的定殖。 對照（CK)澆灌相同體積的無菌水，處理方法相同。
[0133] 菌懸液制備：配制基礎培養基（胰蛋白胨17g，大豆胨3g，NaCl 5g，葡萄糖2. 5g， K2HPO4 2. 5g，將以上成分加熱溶解，蒸餾水補充至lOOOmL，調pH為7. 0,121°C滅菌20min)， 取菌株HBRM-16接種，28°C培養36h，制得菌懸液。
[0134] 時間安排：處理后第0、20、70天測定株高，測試結果見附圖3所示，其中，左側柱狀 圖為CK，右側柱狀圖為菌株HBRM-16測試結果。
[0135] 可見，本發明所篩選得到的粘質沙雷氏菌HBRM-16 (Serratia marcescens subsp. Marcescens HBRM-16)能夠有效的作為根際促生菌株有助于橡膠樹幼苗的成長，有助于提 高天然橡膠的產量。
[0136] 實施例10菌株的促生潛力測定
[0137] 1、產IAA能力測定
[0138] 按照常規方法進行菌株產IAA能力的定性測試，結果如圖4所示，結果表明菌株 HBRM-16能夠顯色且顯色顏色較深。
[0139] 按照常規方法對菌株產IAA能力進行定量測定，如圖5所示，測得菌株HBRM-16產 IAA能力為3. 883ug/ml。有此可知，菌株HBRM-16具有產IAA能力。
[0140] 2、嗜鐵能力測定
[0141] 將菌株HBRM-16在CAS培養基上培養測試其嗜鐵能力，如圖6所示，具有明顯的螯 合圈，測定菌株HBRM-16螯合圈直徑（D)與菌落直徑（d)分別是27. 8mm和9. 59mm，其比值 (D/d)為2. 90。說明菌株HBRM-16有一定的嗜鐵能力。
[0142] 3、溶磷能力測定
[0143] 如圖7所示，通過平板接種實驗發現菌株HBRM-16的溶磷圈比較明顯，測定菌 株HBRM-16菌株的溶磷圈直徑（HD)與菌落直徑（⑶），計算HD/⑶為0. 17,實驗表明菌株 HBRM-16具有解磷能力。
[0144] 4、固氮能力測定
[0145] 如圖8所示，將菌株HBRM-16在無氮培養基上經過5次轉接后，能夠生長，但菌落 直徑較小，而且HBRM-16在無氮培養基上生長時產色素能力也有所減弱。
[0146] 可見，本發明篩選的到的粘質沙雷氏菌HBRM_16(Serratia marcescens subsp. Marcescens HBRM-16)有較強的嗜鐵能力、具有一定的產IAA能力、具有一定的解磷能力、 具有一定的固氮能力。
[0147] 顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對 于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或 變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或 變動仍處于本發明創造的保護范圍之中。
【主權項】
1. 一株粘質沙雷氏菌株，其分類命名為粘質沙雷氏菌HBRM-16,保存于中國典型培養 物保藏中心，其保藏編號為CCTCCΜ2015670。2. -種培養權利要求1所述粘質沙雷氏菌株的方法，其特征在于，在含有適宜碳源的 TSB培養基中培養所述菌株。3. 根據權利要求2所述的培養所述粘質沙雷氏菌株的方法，其特征在于，所述碳源包 括乳糖、蔗糖、D-甘露醇或葡萄糖。4. 根據權利要求2或3所述的培養所述粘質沙雷氏菌株的方法，其特征在于，所述TSB 培養基中的氯化鈉濃度為2-10%。5. 根據權利要求2-4任一所述的培養所述粘質沙雷氏菌株的方法，其特征在于，所述 培養基的pH值為4-13。6. 根據權利要求2-5任一所述的培養所述粘質沙雷氏菌株的方法，其特征在于，所述 培養步驟的培養溫度為l〇_37°C。7. 權利要求1所述粘質沙雷氏菌株在促進橡膠樹幼苗生長中的應用。8. 權利要求1所述粘質沙雷氏菌株用于制備促進橡膠樹幼苗生長的微生物菌肥的應 用。9. 一種促進橡膠樹幼苗生長的方法，其特征在于，包括按照權利要求2-7任一所述方 法進行培養權利要求1所述菌株，并制得菌懸液的步驟。10. 根據權利要求9所述促進橡膠樹幼苗生長的方法，其特征在于，所述菌株的施用方 式為菌懸液灌根處理。
【專利摘要】本發明屬于植物微生物技術領域，具體涉及一種粘質沙雷氏菌HBRM-16及其作為橡膠樹根際促生菌株的應用。本發明以ACC脫氨酶為主要指標，通過精心篩選得到一株粘質沙雷氏菌HBRM-16，并保存于中國典型培養物保藏中心，并且實驗證明，本發明篩選菌株粘質沙雷氏菌HBRM-16能夠有效的作為根際促生菌株有助于橡膠樹幼苗的成長，有助于提高天然橡膠的產量。CCTCC NO: M201567020151109
【IPC分類】A01P21/00, C12R1/43, C05F11/08, C12N1/20
【公開號】CN105400717
【申請號】CN201510880477
【發明人】孫亮, 胡義鈺, 廉法欽, 王真輝, 袁坤, 謝貴水, 安鋒
【申請人】中國熱帶農業科學院橡膠研究所
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年12月6日