測定配制劑的清洗性能的方法
【專利說明】測定配制劑的清洗性能的方法
[0001] 本發明設及測定配制劑對含蛋白質污染物的清洗性能的方法。
[0002] 按照現有技術，評價配制劑在去除含蛋白質污染物過程中的性能的方法已廣為人 知（參見包括DElO 2006 006 765 A1)。此外，W097/27482A1公開了一種用于測試機洗效果 的方法的合成測試污染物。
[0003] W097/27482A1的測試污染物包含血纖維蛋白和/或血纖維蛋白前體。測試污染物 凝聚并且可W用于測試與血液雜質有關的清洗方法的清洗效果。測試體一旦采用進行測試 的清洗方法處理，根據W097/27482A1的教導，測試體上的測試污染物的殘留物就會被檢測 出，例如通過光學檢測法。光學檢測法通常包括通過檢測反應對殘留在測試體上的蛋白質 殘留物進行著色。或者，W097/27482A1建議對粘附于測試體上的蛋白質進行水解，并分析最 終的作為水解產物的氨基酸。對于定量檢測，其建議在測試污染物的蛋白質中使用放射性 示蹤物，例如""Tc,然后測量測試體中釋放出的伽馬福射。
[0004] W097/27482的方法費用高，并且伴隨著潛在性健康風險(放射性），也不足夠可靠。
[0005] 因而，目的在于提供一種方法，通過該方法，W簡單易行、無任何潛在健康風險的 方式，不同配制劑的清洗性能可W被評價，無論是定性還是定量的，并且通過運種可靠的方 式，通過可重復的方式將非常有效的清洗配制劑進行區分也變為可能。
[0006] 現驚奇地發現，上述問題通過下述方法得到解決，其中：
[0007] a)提供配制劑；
[0008] b)將測試體與配制劑接觸，該測試體被含有蛋白質的污染物污染；
[0009] C)使污染的測試體與配制劑接觸，W清洗污染的測試體；
[0010] d)漂洗清洗過的測試體；
[0011] e)根據需要，干燥漂洗過的測試體；
[0012] f)根據需要，對殘留在測試體上的測試污染物進行定性分析，和
[0013] g)對殘留在測試體上的測試污染物進行定量分析，殘留測試污染物的定量分析包 括從測試體上去除殘留的測試污染物。
[0014] 根據本發明的方法解決了前述問題，并且其特征特別在于可通過可重復的方式將 非常有效、但其去除蛋白質的性能在細節上存在不同的清洗配制劑進行區分。
[0015] 根據本發明的方法，在步驟a)中提供配制劑，通常為濃縮物的水溶液。
[0016] 在步驟b)中，將測試體與配制劑接觸，該測試體被含有蛋白質的污染物污染。所述 被含有蛋白質的污染物污染的測試體是已知的。優選地，測試污染物是合成測試污染物，優 選地測試污染物包括一種或者多種組分，其選自包括血纖維蛋白、血纖維蛋白前體，血紅蛋 白和白蛋白的組。
[0017] 優選地，含蛋白質測試污染物是合成測試污染物，優選地，合成測試污染物包括至 少兩種不同蛋白質組分，優選地至少=種不同蛋白質組分。
[0018] 正如上面提及的，合成測試污染物的蛋白質組分優選選自包括血纖維蛋白，血纖 維蛋白前體，血清蛋白和白蛋白的組。
[0019] 術語"合成"是指測試污染物不是由單一的全血組成。
[0020] 因此一種可能的【具體實施方式】是混合至少兩種不同的哺乳動物的全血W獲得合 成測試污染物。或者，使用通過混合至少兩種不同血液成份（即事先分離)得到的合成測試 污染物，所述血液無需來自不同的哺乳動物。
[0021] 通常，測試體由金屬制成，即非玻璃，其特別使得可W獲得定量分析g)結果的可重 復性。
[0022] 步驟C)中使污染的測試體與配制劑接觸的目的是清洗污染的測試體。接觸C)例如 可W是配制劑和污染的測試體之間的靜態或者動態的接觸，即配制劑或者被留置于與污染 的測試體接觸或者被移動到與測試體接觸。
[0023] 污染的測試體一旦被留置于與配制劑接觸并因此至少部分被清洗，被清洗的測試 體在步驟d)中被漂洗，漂洗優選包括用水漂洗，特別優選地用水漂洗。
[0024] 在漂洗d)后，被漂洗的測試體根據需要干燥(并且優選干燥），干燥e)優選在溫度 范圍為10-40°C下進行，優選范圍在15-30°C下，特別是在約25°C下。特別優選地，干燥在室 溫下在空氣中進行。
[0025] 任選的干燥e)后，根據需要對殘留在測試體上的測試污染物進行定性評價。評價 優選是在至少10級的范圍進行光學評價，優選至少12級，特別是至少16級。
[00%] 步驟e)和f)任選彼此獨立。
[0027] 在一種特別優選的實施方式中，實施例中會結合方法I對其進行更加詳細解釋，建 立一種清洗標準系列，然后按照運樣的方法進行光學評價，其中與與清洗標準系列和/或與 該標準系列的照片進行直接比較。
[0028] 特別地，對殘留在測試體上的測試污染物進行的光學評價是4粗級評價，其中4粗 級的每一級包括4細級，其中未清洗的具有含蛋白質測試污染物的測試體表示一個附加級， 沒有含蛋白質測試污染物的測試體同樣表示一個附加級（即運種標準系列18共包括18級）。
[0029] 優選地，在定性分析f)期間，對殘留在測試體上的測試污染物光學評價和照相。
[0030] 需要指出的是，本發明所述方法的所有實施方式中任選的定性評價f)優選不包括 化學檢測反應，即含蛋白質測試污染物W其與配制劑接觸清洗后、經過漂洗和干燥后仍然 殘留在測試體上的狀態直接進行評價和拍照。
[0031] 根據本發明的方法，在任選進行定性評價f)后，進行殘留測試污染物的定量分析 g)，其中殘留測試污染物的定量分析包括從測試體上去除殘留的測試污染物。
[0032] 優選地，在定量分析g)中，在從測試污染物去除后對殘留測試污染物進行光度法 定量分析。特別優選地，根據本發明所述的方法，對測試污染物中的和從測試污染物去除 (作為測試污染物的一部分)的蛋白質進行光度法定量分析。
[0033] 或者，定量分析g)包括凝膠電泳，例如SDS-Page。
[0034] 在本發明的所有實施方式中，如果對測試污染物中的和從中去除的蛋白質進行光 度法分析話，優選在pH為5-9的緩沖溶液，特別優選pH為6-8的緩沖溶液中進行。
[0035] 在描述的殘留在測試體上的測試污染物的去除中，所述去除優選包括通過一種或 者多種水溶液從測試體漂洗殘留的測試污染物。
[0036] 優選地，用于漂洗的水溶液包括堿性和酸性水溶液。優選地，步驟g)中的殘留在測 試體上的測試污染物首先用堿性水溶液漂洗，然后用酸性水溶液進行漂洗，W便最后得到 基本抑呈中性的殘留在測試體上的測試污染物的溶液。
[0037] 本發明的所有實施方式中，步驟g)中的殘留在測試體上的測試污染物的去除包括 機械清洗。例如，可使殘留有測試污染物的測試體與玻璃珠(優選搖動)接觸，特別地，殘留 有測試污染物的測試體在去除的過程中與一種或者多種水溶液接觸。
[0038] 如果對含有殘留在測試污染物中的和由其去除的蛋白質進行光度法定量分析的 話，優選使用S苯基甲燒染料。Coomassie Brilliant Blue G-250是優選的S苯基甲燒染 料。光度法定量分析最優選是化a壯ord定量分析。運種定量分析測試是已商業化的的（如 Carl Roth GmbH+Co.KG,Karlsruhe,Germany的Roti-Nanoquant測試）。
[0039] 本發明還設及本發明所述方法的套件，其包括：
[0040] (i) 一套介紹所述方法的使用說明，
[0041] (ii) -種或者多種用于去除殘留污染物的溶液，
[0042] (iii)-種或者多種用于去除殘留污染物的機械裝置，優選手段是玻璃珠，和
[0043] (iv)如果需要，一套用于定性評價f)的清洗后的測試體的標準系列，或者標準系 列的圖像。
[0044] 本發明的優點，特別是不同清洗配制劑間具有改進的可重復性的區分，下面的實 施例會進行特別介紹。除非另有說明，量是指重量。 實施例
[0045] 方法 I
[0046] 通過TOSI測試體和定量化a壯ord蛋白質測定進行清洗性能測定
[0047] 本方法用于測定用于準備醫療器械（IDM =器械消毒劑）的清洗溶液的清洗性能， TOSKTest Object Surgical Instruments,測試對象外科器械)被用作測試體，測試污染 物為人血液。
[0048] 測試可W采用靜態測試方式，W便模仿儀器的手工準備的行為，或者采用動態測 試，W便說明機器準備中的清洗能力。
[0049] 在本方法中，在對殘留在具有試劑Ro t i -Nanoquant的測試體上的蛋白質膜進行定 量測定后進行清洗后進行可視評價。基于化adford蛋白質分析[Bradford，M.，