br>[0052] 選取誘導冬棗葉片愈傷組織的培養基為MS+2, 4-D2mg/L+麥芽糖2% +瓊脂1 %; pH為5. 8。分別設置葉齡為10d、20d、30d的，葉片位置為自芽基部向上第1-2葉、第3-4葉、 芽尖的9個處理。每個含有誘導冬棗葉片愈傷組織的培養基的錐形瓶中接種4-5個消毒處 理好的冬棗葉片，用牛皮紙封口，每個組合做6瓶，置于溫度28土 1°C的溫室培養箱中進行 暗培養，14d后觀察愈傷組織的增殖情況，從而探究外植體特性對誘導冬棗葉片愈傷組織增 殖的影響。
[0053] 1. 2. 2. 2基本培養基對愈傷組織誘導的影響
[0054] 培養基設置MS、WPM、3/4MS三個對照，均加入lmg/L的TDZ，2 %的麥芽糖，瓊脂 1%，pH為5. 8。每個含有培養基的錐形瓶中接種4-5個消毒處理好的冬棗葉片，用牛皮紙 封口，每個組合做10瓶，置于溫度28 土 1°C的溫室培養箱中進行暗培養，14d后觀察愈傷組 織的增殖情況，從而探究培養基對誘導冬棗花藥愈傷組織增殖的影響。
[0055] 1. 2. 2. 3不同激素對愈傷組織誘導的影響
[0056] 選取誘導冬棗葉片愈傷組織的培養基為3/4MS+麥芽糖2% +瓊脂1 % ;pH為5. 8。 添加到培養基中的植物激素設置2mg/L2,4-D和lmg/LTDZ兩組對照。每個含有培養基的 錐形瓶中接種4-5個消毒處理好的冬棗葉片，用牛皮紙封口，每個組合做10瓶，置于溫度 28 ± 1°C的溫室培養箱中進行暗培養，14d后觀察愈傷組織的增殖情況，從而探究激素對誘 導冬棗花藥愈傷組織增殖的影響。
[0057] 1. 2. 2. 4不同碳源對愈傷組織誘導的影響
[0058] 選取誘導冬棗葉片愈傷組織的培養基為3/4MS+TDZlmg/L+瓊脂1 % ;pH為5. 8,設 置葡萄糖2% (質量分數）、蔗糖3% (質量分數）、麥芽糖2% (質量分數）三組對照，即按 照此濃度添加葡萄糖、蔗糖和麥芽糖到培養基中。每個含有培養基的錐形瓶中接種4-5個 消毒處理好的冬棗葉片，用牛皮紙封口，每個組合做10瓶，置于溫度28 ± 1 °C的溫室培養箱 中進行暗培養，14天后觀察愈傷組織的增殖情況，從而探究碳源對誘導冬棗花藥愈傷組織 增殖的影響。
[0059] 1. 2. 2. 5不同光照對愈傷組織誘導的影響
[0060] 選取誘導冬棗葉片愈傷組織的培養基為3/4MS+TDZlmg/L+麥芽糖2 % +瓊脂 1%。設置強光40001UX、弱光5001ux、黑暗三組對照。每個含有培養基的錐形瓶中接種4-5 個處理好的冬棗葉片，用牛皮紙封口，每個組合做10瓶，置于溫度28 ± 1 °C的溫室培養箱中 進行強光、弱光、黑暗培養，14d后觀察愈傷組織的增殖情況，從而探究光照條件對誘導冬棗 花藥愈傷組織增殖的影響。
[0061 ] 1. 2. 3愈傷組織誘導條件的優化
[0062] 通過實驗找到影響冬棗葉片愈傷組織誘導的外植體因素和外部因素。選取外部 因素，即培養基種類、激素種類及其濃度、碳源種類及其濃度、光照條件等四種因素，設計 L9(43)四因素三水平正交實驗并分析得出其中的最適因素組合。以上處理均將pH調到 5. 8-6. 0之間，每個錐形瓶中接種4-5個消毒處理好的冬棗葉片，用牛皮紙封口，每個組合 做10瓶，置于溫度28± 1°C的溫室培養箱中進行培養，14d后觀察愈傷組織的增殖情況，從 而探究誘導冬棗花藥愈傷組織增殖的最適條件。
[0063] 設計方案見表1.1。
[0064] 表1. 1篩選冬棗葉片愈傷組織誘導因素的正交組合L9(43)
[0065]
[0066]
[0067] 1. 2. 4外植體的接種
[0068] 在超凈工作臺上進行外植體的接種。用鑷子夾取消毒處理好的冬棗葉片，放到事 先準備好的平板內（鋪濾紙，濾紙上需加適量無菌水）。用經高壓蒸汽滅菌的手術刀將材料 進行切割，將切割好的材料轉接到錐形瓶，輕輕插入或放在培養基的表面。每個錐形瓶中接 種4-5個，保證其有充分的空間生長。接種完畢后，放到光照培養箱中進行培養。
[0069] 1. 2. 5愈傷組織誘導率的統計
[0070] 外植體接種14d后，根據設計方案對愈傷組織進行處理并統計愈傷組織誘導率。 參照劉曉光等有關計算公式如下：出愈率=(產生愈傷組織的外植體數/接種的外植體 數）X100%〇
[0071] 第二章結果與分析
[0072] 2. 1外植體特性對愈傷組織誘導的影響
[0073] 將選取的外植體材料接種于MS+2,4-D2mg/L+麥芽糖2 %+瓊脂1 %，pH為5. 8的 培養基上，誘導冬棗葉片愈傷組織。暗培養14d后統計愈傷組織的增殖情況見表2. 1。
[0074] 表2. 1外植體特性對愈傷組織誘導的影響
[0075]
[0076] 注：? ++++表示愈傷組織增殖量很多，+++表示愈傷組織增殖量較多，++表示愈 傷組織增殖較少，+表示愈傷組織增殖量很少。下同。
[0077] ?出愈率=(產生愈傷組織的外植體數/接種的外植體數）X100%。
[0078]由表2. 1可知每個組合均接入30組對照。當探究葉片來源對愈傷組織誘導的影 響時，第3-4葉的出愈率和愈傷組織生長量均高于第1-2葉和頂芽。其中最高的一組達到 83. 33%。取頂芽作為誘導愈傷組織材料時，出愈率明顯降低，可能是因為芽尖全能性過高， 分化不完全，誘導的不確定因素過多造成的。而第1-2葉愈傷組織生長量相對較好，但其出 愈率低于第3-4葉，可能是因為第1-2葉已經趨向成熟，全能性較低。當探究葉齡對愈傷 組織誘導的影響時，20d葉齡的葉片出愈率最高，愈傷組織量最大，相比10d和30d葉齡的 葉片，20d葉齡的葉片不論是第1-2葉，第3-4葉還是頂芽，誘導愈傷組織均具有一定的優 勢。故綜合考慮表2.1中的因素，可得出外植體特性對冬棗葉片愈傷組織誘導具有一定的 影響。最佳外植體為：20d葉齡，取自葉基部向上第3-4葉。
[0079] 2. 2外部因素對愈傷組織誘導的影響
[0080] 表2.2. 1不同培養基、激素、碳源對愈傷組織誘導的影響
[0081]
[0082] 注：?以上處理均加入瓊脂1 %，培養基pH調為5. 8。暗培養14d后統計愈傷組織 的增殖情況。
[0083] 表2. 2. 2不同光照對愈傷組織誘導的影響
[0084]
[0085] 注：?以上外植體材料均接種于3/4MS培養基+TDZlmg/L+麥芽糖2% +瓊脂1%， pH調為5. 8的培養基上，
[0086] 培養14d后統計愈傷組織的增殖。
[0087] 由表2. 2. 1可知，在碳源，激素、光照條件均相同的情況下，單獨探究培養基對冬 棗葉片愈傷組織誘導的影響時，MS培養基、WPM培養基和3/4MS培養基的出愈率和愈傷組 織生長量均較高。當其它因素相同時，探究激素種類對冬棗葉片愈傷組織誘導情況時，采 用同3/4MS培養基，麥芽糖2%，lmg/LTDZ對愈傷組織的誘導作用更明顯，誘導率可達到 88. 89%。研究碳源對冬棗葉片愈傷組織誘導情況時，葡萄糖對誘導愈傷組織效果最差，2% 的麥芽糖對誘導愈傷組織效果較3%的蔗糖更好一些。分析表2. 2. 2可知，光照對冬棗葉 片愈傷組織的誘導具有一定的作用，強光、弱光、黑暗的誘導效果也是不相同的，強光下誘 導愈傷組織效果最差，經過培養后愈傷組織深綠色，致密；弱光條件下得到愈傷組織為淺綠 色；而黑暗條件下愈傷組織為淡綠色（圖1)。
[0088] 2. 3愈傷組織誘導條件的組合分析
[0089] 表2. 3. 1L9 (43)正交實驗設計
[0090]
[0091] 表2. 3. 2L9 (43)正交實驗統計
[0092]
[0093] 注：?以上外植體材料均加入瓊脂1 %，pH調為5. 8,培養14天后統計愈傷組織的 增殖
[0094] 由表2. 3. 2可知，正交實驗9組對照中，第8組愈傷組織誘導率