~4 ;黃化、白化等不良變異率低于1 %，直至繁殖 出所需的種苗數量，可轉入壯苗生根培養。其中，所述的繼代增殖培養基組成為：6_芐氨基 噪呤 1.Omg/L+ 萘乙酸 0? 5mg/L+ 土豆汁 60g/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 6g/L+ 活性炭 0? 5g/L+MS 培養基+PH5.8 ;此配方種苗增殖率高，增殖速度快，且變異率較低，通常低于1%。
[0032] (4)將步驟（3)得到的三葉青小苗剪成帶1個腋芽的小段并轉移到壯苗生根培養 基中，在25~28°C、光照1500勒克斯左右、光照時間12h/d的條件下培養50~60d，當三 葉青小苗長成4~5cm高，有2~3條根時，即可進行馴化移栽，其中，所述的壯苗生根培養 基組成為：萘乙酸0. 2mg/L+蔗糖30g/L+香蕉汁60g/L+瓊脂6g/L+活性炭0. 5g/L+White 培養基+pH5.8。
[0033] (5)將步驟（4)得到的成苗從瓶內取出用清水沖洗去除培養基后放入溫室，移置 鋪有營養土的苗床上，并遮陰保濕，待小苗長到15cm高時，即可進行大田移栽，移栽成活率 達90%以上；其中，溫室內溫度為28~33°C，光照強度為6000~8000勒克斯。
[0034] 實施例2:
[0035] 與實施例1基本相同，步驟（2)、步驟（3)、步驟（4)中腋芽萌發，繼代增殖培養、壯 苗培養三個階段分別以表1所列培養基組合進行篩選，以優選最適培養基組合配方。表1 說明如下：
[0036] ①培養基配方優化主要是設計不同的基礎培養基、激素濃度等對培養基進行了優 化設計，本實例中均設計成固體培養基，每種配方中瓊脂濃度均為6g/L，蔗糖為30g/L，培 養環境為溫度25°C、光照度1000~2000勒克斯、光照時間12h/d培養室內。②針對生產， 不同的培養階段設計了培養基配方，三葉青腋芽萌發階段主要觀察腋芽萌發的快慢、長勢、 顏色（翠綠為佳）等指標判斷配方是否合理；繼代增殖階段主要觀察小苗分枝情況（越多 越好）、玻璃化程度（越低越好），發生黃化、白化等變異的程度（越低越好）等指標判斷配 方是否合理；壯苗生根培養階段，主要通關觀察苗的生長勢、生根情況、玻璃化程度（越低 越好）、顏色等指標來判斷配方的好壞。通過觀察和各項指標的測定，并用"★"和"☆"的 多少代表配方的好壞，★越多表示越好，☆比★要低一個等次。
[0037] 表1培養基配方篩選
[0038]
[0039]
[0040]
[0041]
[0042] 試驗表明，腋芽萌發階段（步驟2) 18種配方組合中，基礎培養基和激素組合范圍 為6-節氨基噪呤0~1. 0mg/L+鹿糖25~30g/L+瓊脂4. 5~6g/L+ 土豆汁60~80g/L+ 活性炭〇. 5g/L+MS培養基+pH5. 6~5. 8 ;在此培養基范圍內，腋芽萌發速度快，生長旺盛， 是較適宜的組合配方組合，帶腋芽的莖段接種培養基后40~50d，腋芽萌發，并長至1~ 2cm;繼代增殖階段（步驟3) 32種配方組合中，基礎培養基、激素及天然添加物組合范圍為 6-節氨基噪呤0~1. 〇mg/L+萘乙酸0~0? 5mg/L+ 土豆汁60~80g/L+鹿糖25~30g/L+ 瓊脂4. 5~6g/L+活性炭0. 5g/L+MS培養基+pH5. 6~5. 8 ;在此培養基范圍內，苗的生長 勢良好、增殖速度快、玻璃化程度低，50~60d可繼代轉接一次，增殖系數可達3~4 ;壯苗 階段（步驟4)，結果表明，萘乙酸0? 2~0? 5mg/L+蔗糖25~30g/L+香蕉汁60~80g/L+ 瓊脂4. 5~6g/L+活性炭0. 5g/L+White培養基+pH5. 6~5. 8為優選培養基配方組合。在 試驗中還發現土豆對三葉青腋芽萌芽及小苗的增殖發有較好的促進作用，香蕉汁有利于三 葉青小苗的壯苗生根。
【主權項】
1. 一種高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，包括如下步驟： ⑴選取三葉青的枝條，去除葉片后剪成5~IOcm的莖段，用去污劑清洗IOmin后，再 用流水沖洗IOmin;將剪切沖洗后的三葉青莖段于體積分數為75%體積分數的乙醇水溶液 中浸泡30~60s，再于氯化萊水溶液中浸泡5~8min;最后用無菌水沖洗3~5次后備用； (2) 將經步驟（1)處理后的三葉青莖段剪成帶1~2個腋芽的小段，接種于固體培養基 中；培養40~50天后腋芽萌發，摘取芽長1~2cm的腋芽備用； (3) 將步驟（2)中所得的腋芽置于增殖繼代培養基中培養50~60d;培養完成后，三葉 青腋芽生長成無根小苗且在莖節處產生側芽； (4) 將步驟（3)中所得三葉青無根小苗剪成帶1個腋芽的小段并移至壯苗生根培養基 中培養50~60天，得到三葉青成苗； (5) 選取步驟（4)中得到的4~5cm高，有2~3條根的三葉青成苗移到溫室中，馴化 培養10~15天后，用水沖洗去除培養基后，將三葉青成苗移栽到鋪有營養土的苗床上；待 三葉青成苗的苗高達到15cm后，即可進行大田移栽。2. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（1) 中，所述的三葉青枝條為當年生半木質化莖段。3. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（1) 中，所述的去污劑為家用洗衣粉。4. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（1) 中，所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的質量分數為〇. 1 %~〇. 15%。5. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（2) 中，培養條件為22~25°C，光照強度為300~1000勒克斯，光照時間為11~13h/d;其中， 所述的固體培養基的配方包括：6_芐氨基嘌呤0~I.Omg/L+蔗糖25~30g/L+瓊脂4. 5~ 6g/L+ 土豆汁 60 ~80g/L+ 活性炭 0? 5g/L+MS培養基+pH5. 6 ~5. 8。6. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（3) 中，培養條件為25~28°C，光照強度為1000~2000勒克斯，光照時間為11~13h/d;其中， 所述的增殖繼代培養基的配方包括：6_節氨基噪呤0~I.Omg/L+萘乙酸0~0. 5mg/L+ 土 豆汁60~80g/L+蔗糖25~30g/L+瓊脂4. 5~6g/L+活性炭0? 5g/L+MS培養基+pH5. 6~ 5. 8〇7. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（4) 中，培養條件為25~28°C，光照強度為1000~2000勒克斯，光照時間為11~13h/d;其 中，所述的壯苗生根培養基的配方包括：萘乙酸〇. 2~0. 5mg/L+蔗糖25~30g/L+香蕉汁 60 ~80g/L+ 瓊脂 4. 5 ~6g/L+ 活性炭 0? 5g/L+White培養基+pH5. 6 ~5. 8。8. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（5) 中，溫室內溫度為28~33°C，光照強度為6000~8000勒克斯。9. 根據權利要求1所述的高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，其特征在于，步驟（5) 中，所述的營養土為由泥碳土和蛭石以3 :1的體積比混合而成。
【專利摘要】本發明公開了一種高效快速繁殖三葉青試管苗的方法，它將三葉青當年生半木質化莖段經過消毒，漂洗后，剪成帶1～2個腋芽的小段接種于固體培養基中培養；待腋芽萌發后將其接種到增殖培養基上進行培養，每過50～60天轉接一次，直到達到需要的種苗量，再將其接種到生根培養基上進行生根培養，50～60天后，當三葉青小苗生長出2～3條根，即可進行馴化移栽。與現有技術相比，本發明可直接用于工廠化規模化的種苗生產，具有污染少，增殖速度快，變異率低，種苗整齊健壯，生產成本低，運輸方便，移栽成活率高等優勢。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165616
【申請號】
【發明人】史俊, 賈君, 席剛俊, 汪善鋒, 徐超, 楊鶴同
【申請人】江蘇農林職業技術學院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年9月30日