[0007] 本發明通過培育無菌苗、測定長期光照強度對植物選擇性吸收氮源的影響、短期 特定光照強度對植物吸收氮源的影響、短期特定光照強度對植物吸收氮源方式的影響、樣 品處理、結果計算等過程，深入分析光照強度對植物吸收銨態氮、硝態氮、氨基酸的影響，為 研究未來環境變化對植物生長尤其是氮素吸收的影響提供了方法基礎。采用完全無菌的培 養環境，可以深入分析氨基酸對植物的營養貢獻，采用同位素標記技術，可以有效準確的區 分光照強度對植物吸收不同氮源的影響。
【附圖說明】
[0008] 圖1 :光照強度對小白菜地上部和根系鮮重的影響。
[0009] 圖2 :光照強度對小白菜葉片氮量的影響。
[0010] 圖3 :光照強度對小白菜葉片中不同氮源的影響。
[0011] 圖4 :光照強度對各氮源營養貢獻的影響。
[0012] 圖5 :光照強度對甘氨酸吸收的影響。
[0013] 圖6 :光照強度對小白菜地上部甘氨酸態氮量的影響。
[0014] 圖7 :光照強度對小白菜根系甘氨酸態氮量的影響。
[0015] 圖8 :光照強度對甘氨酸轉移效率的影響。
【具體實施方式】
[0016] 本發明結合附圖和實施例作進一步的說明。
[0017] 實施例一：一種測定光照影響植物選擇性吸收氮源的方法 (1)無菌苗的培育：選取飽滿的植物種子，在常溫下浸泡12h，之后依次采用70%酒精 浸泡1分鐘、無菌水沖洗3次、10%過氧化氫浸泡5分鐘、無菌水沖洗3次、0.lmolL1氯 化汞浸泡5分鐘、無菌水沖洗5次的滅菌方法，之后再將滅菌后的種子放置于已高壓滅菌 的培養皿中發芽3-5天，待植物根系生長至約lcm，將一粒種子放置于已滅菌的裝滿0. 5% 瓊脂的50ml離心管中，置于無菌培養臺上培養1-3天，植物通過離心管蓋子中心的直徑 為0. 3cm的小孔長出，采用南大704硅橡膠密封小孔，該硅膠較軟，不會限制植物的生長， 待硅膠定型后（2h左右)，添加含 4mmolLiCaClp〗mmol1^1(2504，、2mmol 1. 4mmolLMgSC^ ? 7H20、0. 1ymolLiNaMoC^ ? 2H20、0. 4ymolLiCuSC^ ? 5H20、1ymol LVnSO^THW'SymolLABOrlOymolI^MnClpSymolL'NafDTA和 18.3ymol L肀以04 ? 7H20的營養液，試驗中所用器具及營養液均采用高溫高壓滅菌，各氮源采用過 0. 22ym濾膜滅菌。
[0018] (2)長期特定光照強度對小白菜選擇性吸收氮源的影響：供試氮源為N03、 順4+、甘氨酸，三種氮源（N03、順4+、甘氨酸）等氮量混合，總濃度為3mM，且每次只標記其 中一種氮源(標記物豐度值為50.22 &七％15勵3、50.17 3七％15順4+、50.16 3七％1%-甘 氨酸)，光照強度設36、162、288、414、54〇11111〇111128 1五個梯度，共15個處理，〇'1: 36ymolm2sISO. 22at. % 15N03 -NH4+-甘氨酸、T2 :36ymolm2s1勵3 -50. 17at. % 15NH4+-甘氨酸、T3 :36ymolm2s-NH/-50. 16at. % 15N-甘氨酸、T4 :162ymolm2 si-SO.〗〗at.% 15N03-NH4+-甘氨酸、T5:162ymolm2si-NOfSO.nat.% 15NH4+-甘氨 酸、T6 :162ymolm2s-NH/-50. 16at. % 15N-甘氨酸、T7 :288ymolm2sISO. 22 at. % 15N03 -NH4+-甘氨酸、T8 :288ymolm2s-50. 17at. % 15NH4+-甘氨酸、T9 : 288ymolm2sLNOfMV-SO.ieat.% 15N-甘氨酸、T10:414ymolm2si-SO.〗〗 at. % 15N03 -NH4+-甘氨酸、Til:414ymolm2s-50. 17at. % 15NH4+-甘氨酸、T12 : 414ymolm2sLNOfNHZ-SO.ieat.% 15N-甘氨酸、T13:540ymolm2at.% 15N03 -NH4+-甘氨酸、T14 :540ymolm2s-50. 17at. % 15NH4+-甘氨酸、T15 :540ymol m2si-NOs-NH/-50. 16at. % 15N-甘氨酸，未加at. %表明氮源為普通14N)，采用離光源距離 的遠近來控制光照強度，每種光照強度處理設置一空白，以檢測自然豐度，每三天更換一次 營養液，培養25天后，測定小白菜地上部及根系的生物量及 15N豐度。
[0019] (3)短期特定光照強度對小白菜吸收氮源的影響 以3mM硝酸鈉+0. 5mM硫酸銨+0. 5mM甘氨酸為氮源，采用步驟（1)方法無菌培養小白 菜25天，該氮源配比下小白菜根系生長旺盛，以達到儀器檢測對樣品質量的要求，取長勢 基本一致的小白菜幼苗，采用無菌水將離心管及小白菜根系多次沖洗，放置在無菌水中"饑 餓"培養一整夜(約l〇h)，將小白菜放置于含3mM98. 10at. % 15N-甘氨酸的溶液中，設90、 360、540iimolm2s1三個光照強度處理，之后進行標記氮源的短期吸收試驗，每個處理設 6個重復，完全隨機排列，培養環境同預備苗的培養環境一致，吸收4h后破壞性采樣。
[0020] (4)短期特定光照強度對小白菜吸收氮源方式的影響 以3mM硝酸鈉+0. 5mM硫酸銨+0. 5mM甘氨酸為氮源，采用步驟（1)方法無菌培養小白菜 25天，該氮源配比下小白菜根系生長旺盛，以達到檢測對樣品質量的要求，取長勢基本一致 的小白菜幼苗，采用無菌水將離心管及小白菜根系多次沖洗，放置在無菌水中"饑餓"培養 一整夜(約l〇h)，選取6株長勢一致的小白菜幼苗，將其根系預先放置于50ymolL1CCCP 溶液中1小時，使其根系失活，然后以不用CCCP處理的幼苗做對照，將小白菜放置于含3mM 98. 10at.% 15N-甘氨酸的溶液中，設90、360、540ymolNL1三個光照強度處理，進行標記 氮源的短期吸收方式試驗，吸收4h后破壞性采樣，CCCP處理根系后，限制了根系的主動運 輸，其吸收的氮源均為被動吸收而來，而未經CCCP處理則為主動吸收與被動吸收的總和。
[0021] (5)樣品處理 經過長期吸收和短期吸收的小白菜樣品采收后，將地上部和地下部分開，小白菜根系 先用超聲波清洗，然后用0.5molL1CaCl2清除吸附在根系表面的氮素，最后用無菌水沖 洗干凈，并用吸水紙吸干，小白菜根系和地上部樣品用凍干機冷凍干燥后，稱重，用球磨儀 粉碎，樣品高溫消煮氧化，全氮含量用半微量凱氏定氮儀蒸餾，最后用0.01molL1硫酸滴 定，采用同位素質譜儀測定植株不同部位的15N豐度值。
[0022] (6)測定氮源 小白菜對某一氮源的吸收是根據小白菜體內的15N含量來確定的，采用以下公式計算：
指的是植物根系或者地上部吸收某一氮源的量；4是植物根系或者地上部的 15n豐度值；4指的是未添加標記氮源的15n空白豐度值；為是混合氮源中某一標記氮 源的豐度值，在長期光照對植物吸收氮源的影響中，為50. 16% (甘氨酸）、50. 22% (N03)、 50. 17% (NH4+)，在短期吸收中，為98. 10% (甘氨酸）指的是植物地上部或根系 的總氮量。
[0023] 采用無菌培養結合同位素標記的方法，可以深入的研究光照強度對小白菜吸收不 同氮源的影響，為未來自然環境的變化可能帶來的氮素吸收方面的影響提供了理論基礎。
[0024] 從圖1可以看出，光照強度對小白菜生長具有顯著的效應，小白菜地上部與根系 鮮重在90-540ymolm2s1范圍內呈現先升高后降低的趨勢，在414molm2s1約到達最