一種腫瘤靶向聚合物膠束及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種腫瘤靶向聚合物膠束及其制備方法，屬于腫瘤細胞靶向治療載體及其制備方法技術領域。
【背景技術】
[0002]由于腫瘤組織內的腫瘤細胞、腫瘤血管內皮細胞、腫瘤淋巴管內皮細胞等表面會表達一些區別于正常組織的特異性受體，因此利用與受體有親和力的配體修飾的材料會對腫瘤組織產生主動靶向性；采用配體修飾策略的靶向給藥系統，即經受體介導的內吞途徑入胞，是目前癌癥治療過程中能夠有效提高對腫瘤的靶向效率和治療效果的方法。
[0003]膠束是一種新型的給藥方式，兩親性嵌段共聚物膠束指的是兩親性嵌段共聚物在溶液中自組裝形成“核-殼”結構的納米載體，膠束的核能包封疏水性藥物并保護它們不被降解，殼可以起到穩定的作用。疏水性藥物進入疏水核，親水性藥物進入親水殼層，可顯著提高藥物的水溶解性，兼且可具有靶向作用、增溶作用、提高穩定性作用、長循環作用等，是一種極具潛力的新型給藥體系。由不同嵌段聚合物、聚合物/表面活性劑自組裝成的混合膠束或聚離子復合物膠束，相對于單一嵌段聚合物形成的膠束而言，物理穩定性和載藥能力都得到了提高。
[0004]哺乳動物細胞在有絲分裂過程中除了細胞數量發生變化，細胞內的很多成分也會發生變化；比如組成細胞膜的重要組分磷脂，在有絲分裂過程中的組成以及位置會發生改變。其中，磷脂酰乙醇胺是哺乳動物細胞膜磷脂的主要成分之一，大約占20%，磷脂酰乙醇胺主要位于細胞膜內葉。研究表明，在有絲分裂過程中，細胞膜內葉的磷脂酰乙醇胺會外化，暴露于分裂期細胞的卵裂溝處。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種腫瘤靶向聚合物膠束，具有細胞周期特異性靶向載體功能，對于腫瘤治療藥物具有較好的靶向性輸送能力。
[0006]為解決上述問題，本發明所采取的技術方案如下:
一種腫瘤靶向聚合物膠束，包括:對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體修飾的第一聚合物載體。
[0007]作為上述技術方案的具體優選，所述對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體為蘭考韋泰、肉桂霉素和植物大環寡肽kalata BI中的一種，所述第一聚合物載體為包括親水段和疏水段的共聚物，所述親水段為聚乙二醇、聚環氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、殼聚糖中的一種，所述疏水段為外消旋聚乳酸、左旋聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、己內酯、聚氨基酸中的一種。
[0008]其中，蘭考韋泰的CAS編號為1391-36-2 ;肉桂霉素的CAS編號為1405-39-6 ;植物大環寡肽kalata BI為一種結構公知的植物大環寡肽。
[0009]作為上述技術方案的改進，還包括用于包覆所述第一聚合物載體形成核殼結構混合膠束的第二聚合物載體，且所述第二聚合物載體在腫瘤組織的偏酸性環境中不穩定，在pH值為6.0?6.5時解聚合。
[0010]作為上述技術方案的具體優選，所述第二聚合物載體為聚乙二醇和聚組氨酸的共聚物、或聚乙二醇和聚(β_氨基酯)的共聚物、或PH敏感化學鍵鏈接的膠束，所述pH敏感化學鍵為腙鍵、乙縮醛、原酸酯和乙烯醚中的一種。
[0011]本發明與現有技術相比較，本發明的實施效果如下:
本發明所述的一種腫瘤靶向聚合物膠束，基于細胞膜成分磷脂酰乙醇胺在細胞有絲分裂M相時外向化及腫瘤組織偏酸性的基礎上，創造性的采用了與磷脂酰乙醇胺具有特異性結合和高親和力的靶向配體修飾第一聚合物載體并與對酸性環境敏感的第二聚合物載體組成核殼結構的混合膠束。
[0012]靜脈注入體內后通過實體瘤的高通透性和滯留效應迅速主動聚集在腫瘤組織，在腫瘤組織部位第二聚合物載體解聚合，暴露出靶向配體修飾的第一聚合物載體，然后特異性結合至M相腫瘤細胞膜外化的磷脂酰乙醇胺，攜帶膠束聚集于M相腫瘤細胞中，不僅可以增大載藥量而且使載體具有良好的入胞能力。
[0013]本發明所述的一種腫瘤靶向聚合物膠束實現了細胞周期特異性靶向載體的功能，是一種高效、低毒、腫瘤細胞靶向治療的載體。
[0014]本發明同時也提供了上述腫瘤靶向聚合物膠束的制備方法，其包括對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體修飾第一聚合物載體的制備過程:
當對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體的分子結構中具有活性的氨基時，其包括以下步驟:
步驟Al.1、通過1-(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺活化所述第一聚合物載體末端的羧基；
步驟Al.2、使步驟一中活化的羧基與對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體中的氨基縮合；
步驟Al.3、對步驟二的反應產物進行透析和濾膜過濾操作，干燥濾液即得能夠與細胞膜成分磷脂酰乙醇胺特異性結合的靶向載體；
當對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體的分子結構中不具有活性的氨基時，其包括以下步驟:
步驟B1.1、通過1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺活化對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體末端的羧基；
步驟B1.2、使步驟一中活化的羧基與所述第一聚合物載體中的氨基縮合；
步驟B1.3、對步驟二的反應產物進行透析和濾膜過濾操作，干燥濾液即得能夠與細胞膜成分磷脂酰乙醇胺特異性結合的靶向載體。
[0015]作為上述技術方案的具體優選，所述的一種腫瘤靶向聚合物膠束的制備方法包括蘭考韋泰修飾第一聚合物載體的制備過程，且所述第一聚合物載體為聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物，其包括以下步驟:
步驟1.1、將H00C-PEG-PDLLA溶于N，N-二甲基甲酰胺中，先加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽反應一段時間后，再加入交聯劑N-羥基琥珀酰亞胺，室溫攪拌48 ?72 小時，得到 PDLLA-PEG-CONHS ； 步驟1.2、將步驟一的最終反應液過濾后，向其中滴加洛解有蘭考韋泰的一■甲基亞諷洛液，之后加入三乙胺調節pH值至7以上，室溫攪拌至溶液澄清；
步驟1.3、將步驟二最終獲得的溶液經透析袋透析后過濾，得澄清透明溶液，冷凍干燥后得蘭考韋泰修飾的聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物。
[0016]作為上述技術方案的改進，所述的一種腫瘤靶向聚合物膠束的制備方法還包括在腫瘤組織的偏酸性環境中不穩定，在PH值為6.0?6.5時解聚合，且用于包覆所述第一聚合物載體形成核殼結構混合膠束的第二聚合物載體的制備過程，所述第二聚合物載體為聚乙二醇和聚組氨酸的共聚物，其包括以下步驟:
步驟2.1:將Boc-His(Dnp)-OH ■ isopropanol即溶于異丙醇的N-(叔丁氧羰基)-1-(2，4- 二硝基苯基)-L-組氨酸溶解于1，4- 二氧六環中，加入氯化亞砜反應I小時，生成沉淀過濾，用1，4- 二氧六環及乙醚洗滌沉淀，將沉淀用硝基甲烷完全溶解后，加入足量無水乙醚重結晶，得Dnp-NCA ■ Hcl ；
步驟2.2:將步驟2.1制得的Dnp-NCA ■ Hcl用N，N- 二甲基甲酰胺溶解后加入碳酸鈉中和鹽酸，室溫攪拌I小時后，加入mPEG-NH2 ■ Hcl的N，N- 二甲基甲酰胺溶液減壓反應72小時后，離心后用微孔濾膜過濾得醬油色溶液，向其中加入乙醚后，靜置使其沉淀，抽濾后真空干燥，得到的棕色固體PEG-b-poly (Nim-Dnp-His);
步驟2.3:將步驟2.2制得的PEG-b-poly (Nim-Dnp-His)加入N，N- 二甲基甲酰胺溶解后，加入巰基乙醇反應過夜，脫去2，4-二硝基苯基將所得淡黃色溶液裝入透析袋中透析，透析后先離心再過濾，濾液冷凍干燥后即得聚乙二醇和聚組氨酸的共聚物。
[0017]作為上述技術方案的改進，所述的一種腫瘤靶向聚合物膠束的制備方法還包括對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向配體修飾第一聚合物載體和第二聚合物載體制備成核殼結構混合膠束的過程，其包括以下步驟:
將所制得的對細胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有親和力的靶向