一種油乳劑制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于獸用生物制品技術領域，尤其與一種油乳劑制備方法有關。
【背景技術】
[0002] 油乳劑疫苗是目前國內外疫苗市場上產品最多的疫苗，其免疫性能穩定、生物安 全性高、使用較小的免疫劑量和較少的免疫次數就能達到延長免疫刺激時間，使機體獲得 足夠的保護性抗體。傳統油乳劑疫苗在生產過程中將司班-80加入白油中作為油相，吐 溫-80、硬脂酸鋁加入抗原水溶液中作為水相，二者混合乳化獲得的油乳劑疫苗穩定性高， 免疫后可獲得持久的較高水平的免疫抗體，例如專利公開號為CN102579339A公開了一種 肉雞用油乳劑疫苗，包括油相和水相，油相選自白油、司盤-80、硬脂酸鋁，水相選自濃縮的 抗原疫苗、吐溫-80,適用肉雞的油乳劑疫苗的抗原為滅活的病毒，包括雞新城疫病毒和禽 流感病毒的一種或組合。但是該油乳劑粘度大，免疫注射引起的應激反應較大，可形成無菌 性化膿灶，在接種部位出現腫脹、硬結，或形成肉芽腫，影響免疫效果的同時，對動物肉制品 質量也產生了不良的影響。針對該問題，本專利申請人研究開發了一種油乳劑制備方法來 解決該問題。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的旨在克服現有的油乳劑存在的粘度大而導致免疫注射引起的應激 反應較大等問題，提供一種油乳劑制備方法。
[0004] 為此，本發明采用以下技術方案：一種油乳劑制備方法，其特征是，包括以下步 驟：
[0005] (1)、油相的制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯按照一定體積比例加入到經高壓 滅菌的藥用白油中混合，經37°C水浴充分搖勻；
[0006] (2)、水相的制備：將吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯按照一定的體積比 例溶于抗原溶液；
[0007] (3)乳化：按油相：水相=1. 5-2:1的體積比，先將油相放于膠體磨內，開動電 機慢速轉動攪拌，同時緩慢加入水相加完后再以8000r/min攪拌10-15分鐘，在終止攪拌前 加入濃度為1 %的硫柳汞溶液，加入后其最終濃度為萬分之一；
[0008] (4)、半成品檢驗；
[0009](5)、分裝：定量分裝，并粘貼標簽，置2~8°C保存。
[0010] 作為對上述技術方案的補充和完善，本發明還包括以下技術特征。
[0011] 所述的Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯占疫 苗總體積比例分別為 〇?l%-3. 5%、0. 1% -3. 5%、0. 3% -2%、0. 3% -2%和 0? 1% -0? 7%。
[0012] 作為優選，所述的Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻 油和蔗糖酯占疫苗總體積比例分別為〇. 8 % -3. 42 %、0. 8 % -3. 42 %、0. 45 % -1. 85 %、 0? 45% -1. 85%和 0? 2% -0? 5%。
[0013] 抗原為大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌、壞死梭桿菌、巴氏桿菌或新城疫病毒，但不限 于以上病原。
[0014] 使用本發明可以達到以下有益效果：本發明采用甘露醇單油酸酯、司班-80、 TW-80和聚氧乙烯40氫化蓖麻油進行復配，采用蔗糖酯替代硬脂酸鋁作為穩定劑，而且制 備的油乳劑黏度小，從而取得更好的乳化穩定效果，同時降低免疫注射副反應。本發明制備 工藝相對于傳統制備工藝相對沒有增加制備工藝流程，操作簡單，因此值得運用和推廣。
【附圖說明】
[0015] 圖1為本發明的乳化劑復配比例示意圖。
[0016] 圖2為實施例1的水乳劑制備好后用LS-P0P(6)激光粒度分布儀測定粒徑大小示 意圖。
[0017] 圖3為為實施例2的水乳劑制備好后用LS-P0P(6)激光粒度分布儀測定粒徑大小 示意圖。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合附圖對本發明的【具體實施方式】進行詳細描述。
[0019] 本發明包括包括以下步驟：油相的制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯按照一定的 體積比例加入到經高壓滅菌的藥用白油中混合，經37°C水浴充分搖勻；水相的制備：將吐 溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯按照一定的體積比例溶于抗原溶液；乳化：按油 相：水相=1.5-2 : 1的體積比，先將油相放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時緩 慢加入水相加完后再以8000r/min攪拌10-15分鐘，在終止攪拌前加入濃度為1 %的硫柳汞 溶液，加入后其最終濃度為萬分之一；半成品檢驗；
[0020] 分裝：定量分裝，并粘貼標簽，置2~8°C保存。
[0021] 進一步地，如圖1所示，Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻 油和蔗糖酯占疫苗總體積比例分別為〇. 1% -3. 5%、0. 1% -3. 5%、0. 3% -2%、0. 3% -2% 和 0? 1% -0? 7%〇
[0022] 作為優選，如圖1所示，所述的Span-80、甘露醇單油酸酯、吐溫80、聚氧乙 烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯占疫苗總體積比例分別為0. 8 % -3. 42 %、0. 8 % -3. 42 %、 0? 45% -1. 85%、0. 45% -1. 85%和 0? 2% -0? 5%。
[0023] 抗原為大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌、壞死梭桿菌、巴氏桿菌或新城疫病毒，但不限 于以上病原。
[0024] 成品檢驗物理性狀：外觀：乳白色乳劑。劑型：油包水型；取一只清潔的吸管，吸取 少量疫苗滴入冷水中，除第1滴外，其余均不擴散。穩定性：吸取疫苗l〇ml加入尖底離心管 中，以4000r/min分鐘離心15分鐘，管底析出的水相應彡0. 5ml。在4°C、室溫、37°C環境觀 察其破乳情況，其中2~8°C保存12個月后無破乳，穩定性良好。黏度：用lml吸管（下 口內徑為1. 2mm，上口內徑為2. 7mm)，吸取25 °C左右疫苗lml，令其垂直自然流出，0. 4ml所 需要時間不超過8秒；粒徑測試：將油乳劑制備好后用LS-P0P(6)激光粒度分布儀測定粒 徑大小，粒徑小于500um，符合油乳劑粒徑要求。
[0025] 蔗糖酯是蔗糖脂肪酸酯的簡稱，是由蔗糖與C8~C22等食用脂肪酸合成的一類的 非離子表面活性劑，蔗糖酯的乳化作用是由具有高親水性的蔗糖分子和具有親油性的脂肪 酸基團所致。作為蔗糖酯親水基的蔗糖部分，兼備出色的親水性及高疏油性，可以在油水界 面形成強固穩定的乳化效果，另外，蔗糖酯還有抑制耐熱性芽孢菌的作用，這對產品的貯存 也是很有利的。聚氧乙烯蓖麻油衍生物是由不同量環氧乙烷和蓖麻油或氫化蓖麻油反應得 到的一系列物質。兩種主要衍生物為聚氧乙烯35蓖麻油（EL-35)和聚氧乙烯40氫化蓖麻 油（RH-40)，主要應用于水不溶性藥物或其他脂溶性藥物的增溶劑和乳化劑，可防止溶血， 并能很快通過尿液排泄，中國藥典未收載，收錄于歐洲藥典和美國藥典。TW-80作為增溶 劑、乳化劑和穩定劑已收入多國藥典。在相近的生產成本的條件下，本發明采用甘露醇單油 酸酯、司班-80、TW-80和聚氧乙烯40氫化蓖麻油進行復配，采用蔗糖酯替代硬脂酸鋁作為 穩定劑，取得更好的乳化穩定效果，同時降低免疫注射副反應。
[0026] 實施例1:
[0027] 抗原制備：用雞新城疫病毒弱毒LaSota株接種9-10日齡易感雞胚培養，收獲感染 雞胚液，要求病毒胚液HA效價3 1:160,每羽份疫苗中含滅活的雞新城疫病毒LaSota株 彡l(f5EID50,經甲醛溶液滅活后4°C保存備用。
[0028] 油相制備：將Span-80、甘露醇單油酸酯加入高壓滅菌的藥用白油混合，使其終濃 度分別為2. 9%和2. 5%，37°C水浴片刻，充分搖勻。
[0029] 水相制備：將一定比例的吐溫80、聚氧乙烯40氫化蓖麻油和蔗糖酯溶于抗原溶 液，使其占水相比例分別為2. 4 %、2 %和1. 25 %。
[0030] 乳化：取油相1. 5份放于膠體磨內，開動電機慢速轉動攪拌，同時徐徐加入水相1