均SAP。用碳酸 氨鋼或THAM輸注（在高碳酸血的情況中，PaC〇2〉45mmHg)糾正代謝性酸中毒（pH<7. 25和 BE<8mmol/L)。至少在產后盡早、W及在表面活性物質給藥后的1化）、2化）、4燈4)和6燈6) 小時記錄每個動物的抑、p〇2和pCO2。
[0092] 肺機械學監控。使用新生兒呼吸監視器（Florian化onatalRespiration Monitor,A州tronic，Hirzel，Switzerland)測量平均氣道壓力（MAP)、動態肺順應性 (Cdyn)、呼出潮氣量燈V)和呼氣阻力（Raw)并記錄它們在基線、Ti、T2、Ta和Te時的數值。
[0093] 肺氧化應激試驗。通過W下技術得到每組的各動物的支氣管吸出物樣品：使用 IOml注射器通過8F號送料導管（所述送料導管被放入氣管內導管中使得送料導管末端延 伸超過氣管內導管遠端2cm)滴注Iml/kg的0.9%無菌鹽水。滴注鹽水并立即吸回注射器 中。
[0094] 返回的鹽水的平均體積是1. 5ml。通過離屯、作用（1000巧mX5min)將所有樣品澄 清化并將上層清液立即在-70°C凍結并儲存用于后續分析。在表面活性物質給藥之前、胎頭 暴露之后、W及在表面活性物質給藥后的1燈1)、2燈2)、4燈4)和6燈6)小時從每個動物收集 支氣管吸出物樣品。
[0095] 在每個支氣管吸出物樣品中，測量總的氨過氧化物（TH)濃度、晚期氧化蛋白產物 (A0P巧和該非蛋白結合鐵（NPBI)。使用d-ROMsKit值iacronsrl，Italy)用分光光度法 測量TH產生。
[0096]W常規的單位表示結果（Carr單位JCarr單位數值等于0. 08mg/dl過氧化氨濃 度）。通過Witko-Sarsat等化i化巧Int. 1996,49巧）：1304-13)報告的方法使用分光光 度測定法在微板讀板器上測量A0PP。AOPP濃度表示為ymoVl氯胺T當量。使用Kime等 (ClinSci(Lond) 1996,91巧）：633-8)描述的方法通過HPLC測定NPBI水平。結果Wnmol/ ml表不。
[0097] 組織取出和病理學檢查。在實驗最后，用過量的戊己比妥殺死動物。小屯、地開胸 檢查氣胸的跡象并采集組織。取出氣管和肺并置于經過緩沖的10%福爾馬林浴中。從兩 個肺葉的上部和下部葉取得兩個隨機的肺試樣。使用常規技術處理組織用于石蠟包埋。將 五微米厚的部分用蘇木精-曙紅染色并由兩名病理學家進行盲性的顯微鏡檢驗。對末端氣 道膨脹進行分級：〇,發現與對照肺的氣道相似；1，膨脹為對照氣道口徑的1-1. 5倍；和2， 非常膨脹，大于對照氣道口徑的1. 5倍）。另外，分析W下組織學特征：肺膨脹不全區域、肺 間質水腫和/或肺泡水腫、炎性浸潤、小葉間隔破裂和支氣管上皮的脫落。每種病理學特征 在存在時評價為1，在不存在時評價為0。通過將各得分相加得到肺損傷的得分，分別為：陰 性，0 ;輕微，0-1 ;中等，2-3 ;和嚴重，> 4。
[0098] 統計分析。使用重復測量的單因素方差分析來分析隨時間變化。使用重復的測量 和一組因素（即，"時間"和"治療"）的二因素方差分析比較不同組之間的時程演變。使用 成對學生t檢驗來考查不同治療條件之間的不同組的組內比較。結果表示為平均值+標 準差，且<0. 05的P值被認為是顯著的。
[0099] 結果
[0100] 有18只動物被隨機化為接受200mg/kg的天然表面活性物質（n=6)、200mg/kg 的表面活性物質加上400yg/kg的丙酸倍氯米松（n=6)和200mg/kg的表面活性物質加 上800Jig/kg的丙酸倍氯米松（n=6)。
[01(n] 氣體交換。表1報告了個研究組的抑和血氣分析的變化。在所有組中，觀察到Ti、 了2、T4和Te的抑與基線值相比有顯著的提高；在表面活性物質組pCO2沒有變化，而表面活 性物質加上丙酸倍氯米松組pC〇2在T1、了2、了4和Te顯著降低；每一時間各組的PO2相似；每 個組中BE表現出減少的傾向，但是統計學變化是短暫的且相關性差。
[0102]MAP和肺機械學。表2顯示MAP、TV、Cdyn和Raw的變化。MAP在用表面活性物質 加上800yg/kg丙酸倍氯米松治療的組中在Ta和Te時顯著降低，并且低于其它組；TV和Raw在所有組中都從基線有所降低，而Cdyn沒有變化。
[0103] 氧化應激試驗。表3詳述了TH、AOPP和NPBI的變化。對于TH,在Te時表面活性 物質加上400yg/kg丙酸倍氯米松治療組低于表面活性物質組，在Ta和Te時表面活性物質 加上800yg/kg丙酸倍氯米松治療組低于其它組；對于A0PP，在所有組中都是在Tl時增加 然后在Tz、Ta和Te下降，但是在Te時在表面活性物質加上800yg/kg丙酸倍氯米松治療組 的數值低于其它組。發現所有組的NPBI及其濃度沒有變化且各組之間沒有不同。
[0104] 肉眼檢查一顯微檢查特征。肉眼檢查時，用表面活性物質加上SOOyg/kg丙酸倍 氯米松治療的動物的肺表現出比其它組有更好換氣的傾向。在顯微檢驗時，表面活性物質 組的遠端氣道似乎比表面活性物質加上400或800yg/kg丙酸倍氯米松組有更多的塌陷。 此外，觀察到肺膨脹不全的區域、一些包含巨隧細胞的肺泡和一些小葉間隔滲漏。表面活性 物質加上400yg/kg丙酸倍氯米松組的總體肺損傷得分（1. 8 + 0. 7)W及表面活性物質加 上800yg/kg丙酸倍氯米松組的總體肺損傷得分（1. 8 + 0. 3)低于表面活性物質組的總體 肺損傷得分（2. 4 + 0. 6)，但是差異沒有統計學顯著性。
[0105] 討論
[0106] 結果證明，用與丙酸倍氯米松組合的豬肺憐脂進行的治療對于在患有呼吸衰竭的 早產黑羊中降低肺氧化應激是有效的。實際上，已經觀察到氣管內滴注表面活性物質加上 800yg/kg丙酸倍氯米松引起支氣管吸出物樣品在Ta和Te的THW及在Te時的AOPP的水 平與其它組相比降低；氣管內滴注表面活性物質加上400yg/kg丙酸倍氯米松引起Te時的 TH與表面活性物質組相比降低，而滴注單獨的表面活性物質對于氧化應激標志物的濃度沒 有影響。運些結果是相關的，因為TH代表了總體氧化應激的量度，考慮到它是脂質、膚和氨 基酸的中間氧化產物，而AOPP的同時測定提供了參與自由基反應的蛋白質（即，喪失了氧 化性能的被氧化的蛋白質）的另一個方面的信息。
[0107] 不同地，在各研究組中NPBI的濃度沒有變化。然而，如W前報告的，NPBI值可能 與氧化應激的其它標志物的濃度變化無關，可能是因為它們還可W從其它來源形成。
[010引此外，就肺順應性而言，已經觀察到表面活性物質治療引起TV和Raw的持續改善， 而Cdyn無變化。然而，令人驚訝的是，與用表面活性物質加上400yg/kg劑量的丙酸倍氯 米松和單獨的表面活性物質治療的組相比，800yg/kg劑量的丙酸倍氯米松協同降低獲得 相同TV值所需的平均氣道壓力（MAP)。
[0109]因此，氣管內給藥的800yg/kg劑量的丙酸倍氯米松的效果不限于降低肺氧化應 激，而且還與動物的肺機械學的改善W及由此設及呼吸機能的改善保持一致。
[0110] 與其它發現一致，組織學檢查顯示，接受表面活性物質加上丙酸倍氯米松的組的 形態學肺損傷有減少的傾向。
[0111] 表1.用表面活性物質加上400yg/kg丙酸倍氯米松度D巧或表面活性物質加上 800yg/kg丙酸倍氯米松度D巧治療的早產黑羊的血氣分析變化。平均±SD。
[0112]
【主權項】
1. 劑量為100到200mg/kg的豬肺磷脂與劑量為0. 8mg/kg的丙酸倍氯米松的組合在生 產用于預防支氣管肺發育不良的藥物中的應用，所述藥物降低選自總的氫過氧化物、晚期 氧化蛋白產物和非蛋白結合鐵的肺氧化應激標志物。2. 權利要求1的應用，其中所述豬肺磷脂的劑量為100mg/kg。3. 權利要求1的應用，其中所述豬肺磷脂的劑量為200mg/kg。4. 用于預防支氣管肺發育不良的藥物，所述藥物作為固定組合包含： 劑量為1〇〇到200mg/kg的豬肺磷脂，和 劑量為〇. 8mg/kg的丙酸倍氯米松。5. 權利要求4的藥物，其中所述豬肺磷脂的劑量為100mg/kg。6. 權利要求4的藥物，其中所述豬肺磷脂的劑量為200mg/kg。7. 權利要求4-6中任一項的藥物，所述藥物是用于吸入給藥或氣管內給藥的藥物組合 物形式。8. 權利要求4的藥物，所述藥物是在經過緩沖的生理鹽水的水溶液中的無菌懸浮液的 形式。9. 用于預防支氣管肺發育不良的試劑盒，包括：a)在第一單元劑型中的劑量為100到 200mg/kg的豬肺磷脂和可藥用的載體或稀釋劑；b)在第二單元劑型中的劑量為0. 8mg/kg 的丙酸倍氯米松和可藥用的載體或稀釋劑；和c)用于包含所述第一和第二劑型的容器裝 置。10. 權利要求9的試劑盒，其中所述豬肺磷脂的劑量為100mg/kg。11. 權利要求9的試劑盒，其中所述豬肺磷脂的劑量為200mg/kg。
【專利摘要】本發明涉及改性的天然表面活性物質與皮質類固醇組合用于預防支氣管肺發育不良(BPD)的應用，通過所述應用降低肺氧化應激標志物的水平。
【IPC分類】A61K47/24, A61P11/00, A61K31/573
【公開號】CN105169399
【申請號】
【發明人】M·喬斯, R·拉澤緹, P·奇斯
【申請人】奇斯藥制品公司
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2010年5月21日