胎pG2細胞（被LA阻斷）的實驗組相比，乳糖酸 修飾的化3〇4納米顆粒使得ASGPRs高表達的化pG2細胞或腫瘤部位（未被LA阻斷）信號 更低，表明本發明制備的納米顆粒對ASGPRs高表達細胞具有更好祀向性。從而說明該方法 制備的乳糖酸修飾的化3〇4納米顆粒在MR分子影像診斷領域有著潛在的應用。
[0026] 紫外可見吸收光譜扣V-Vis)、核磁共振分析ChNMR)、熱重分析燈GA)、電感禪合 等離子體原子發射光譜法（ICP-0E巧、Zeta電勢及動態光散射值L巧和透射電子顯微鏡 燈EM)等方法表征制備的磁性納米顆粒，并通過磁共振成像儀測定納米顆粒的Tz弛豫性能， 然后利用CCK-8法評價納米顆粒的細胞毒性，再利用ICP-0ES、流式細胞儀W及體外和體內 核磁共振成像實驗檢測乳糖酸修飾的納米材料對腫瘤細胞的祀向診斷效果。 陽〇八]有益效果
[00測（1)本發明采用簡單的還原法制備水溶性良好的陽I包覆的化304納米顆粒，然后 在納米顆粒表面先后連接巧光素FI分子和C00H-PEG-LA，最后對納米顆粒的表面氨基進行 乙酷化處理，即得到用于MR成像的多功能化304納米顆粒；
[0029] (2)本發明的方法操作工藝簡單，反應條件溫和，易于操作分離，所用均為廉價的 和環境友好的材料，具有實施商業化的前景；
[0030] 做本發明制備的化化納米顆粒能夠長時間地穩定分散于水溶液中，沒有出現團 聚現象，PEI的包覆增加了化化納米顆粒的穩定性，COOH-陽G-LA的表面修飾增加了化化 納米顆粒的生物相容性和親水性，而且COOH-PEG-LA的表面修飾賦予納米顆粒對腫瘤細胞 或者腫瘤部位的特異性祀向能力；運些優點使制備的乳糖酸修飾的化3〇4納米顆粒可W有 效地用作體內祀向MR成像的陰性造影劑。
[0031] (4)本發明制備的超小型超順磁氧化鐵納米顆粒粒徑較小、弛豫率很高，并且具有 良好的膠體穩定性、生物相容性和特定的去唾液酸糖蛋白受體（ASGPRs)高表達腫瘤細胞 的祀向性，在體內腫瘤祀向ffi?成像診斷領域具有潛在的應用價值。
【附圖說明】 陽0巧圖1為實施例2中FesCV陽I.畑2(1)和化化/PEI.NHz-FI似的紫外吸收圖譜； 陽03引圖2為實施例3中COOH-陽G-LA核磁共振分析ChNMR)圖；
[0034] 圖3為實施例4中FesCV陽I.畑2斗1(a)和化化/PEI. NHz-FI-PEG-LA化）的熱重分 析圖； 陽03引 圖4為實施例5中化3O4/PEI.NHAc-FI-PEG-LA的透射電鏡圖片（a)和尺寸分布直 方圖化）；
[0036] 圖5為實施例6中化化/PEI.NHAc-FI-PEG-LA納米顆粒的Tz加權MR成像圖片和 Tz弛豫時間倒數與Fe濃度的線性關系圖；
[0037] 圖6為實施例7中CCK-8法測試的胎pG2細胞經過PBS緩沖液（對照）和本發明 制備的FesCV陽I.NHAc-FI-PEG-LA納米顆粒的MEM培養基（Fe的濃度范圍在0. 25~2.OmM) 處理24小時后的細胞活力；
[0038] 圖7為實施例8中ASGPRs高低表達的化pG2細胞分別經過PBS緩沖液和本發明制 備的化化/PEI.NHAc-FI-PEG-LA納米顆粒的MEM培養基（Fe的濃度為0. 15、0. 3和0.6mM) 共培養4小時后用ICP-OES測定的細胞鐵元素的吞隧量；
[0039] 圖8為實施例9中ASGPRs高低表達的胎pG2細胞分別與PBS緩沖液和本發明制 備的化化/PEI.NHAc-FI-PEG-LA納米顆粒的MEM培養基（Fe的濃度為0. 3mM)共培養4小 時后的流式分析圖（曰，其中1，2分別代表ASGPRs低表達和高表達的化pG2細胞分別與PBS 緩沖液共培養后的流式巧光強度分析；3和4分別代表ASGPRs低表達和高表達的化pG2細 胞分別與本發明制備的化3O4/PEI.NHAc-FI-PEG-LA納米顆粒共培養后的流式巧光強度分 析）和細胞的平均巧光強度化）；
[0040] 圖9為實施例10中ASGPRs高低表達的胎pG2細胞分別與本發明制備的化3〇4/ 陽I.NHAc-FI-PEG-LA納米顆粒的MEM培養基（化濃度范圍在0. 1~0. 4mM)共培養6小時 后的細胞Tz加權MR成像圖片（a)和相應的MR圖像信號值變化化）；
[00川圖10為實施例11中兩組患有肝癌的裸鼠分別尾靜脈注射本發明制備的化化/ 陽I.NHAc-FI-陽G-LA納米顆粒和混有游離LA(ImM)的化3<V陽LNHAc-FI-陽G-LA納米顆 粒PBS溶液（化：500yg，0.ImL)后不同時間點腫瘤（*)的Tz加權MR成像圖片（a)和相應 的MR圖像信號值變化化）。
【具體實施方式】
[0042] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，運些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人 員可W對本發明作各種改動或修改，運些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。 陽043] 實施例1
[0044] 將1.30gFeCls.6&0溶解于20血超純水中，移入250血S口瓶中攬拌；氮氣鼓吹 15分鐘后，將0. 2g亞硫酸鋼溶于IOmL超純水后加入到S口瓶中，持續攬拌反應30分鐘；然 后依次將0. 5g超支化聚乙締亞胺PEI的水溶液和2血的畑3巧2〇也加入到S口瓶中，60~ 70°C下恒溫攬拌反應30分鐘；接著在室溫下反應1. 5小時；反應結束后，將所得到的黑色 產物磁分離，除去上清液，再加適量超純水超聲分散，再磁分離，如此重復超純水洗涂=次， W除去雜質，然后重新分散于20mL超純水中，即得PEI包覆的化304(F6304/PEI.N&)納米顆 粒水溶液。 W45] 實施例2
[0046] 取10血FesCV陽I.畑2(77mg)水溶液（實施例I)用DMSO洗涂后，重新分散于10血 DMSO溶液中。接著，將2血DMSO溶解的FI溶液（1. 79mg)加入到FesCV陽I.畑2的DMSO溶 液中，攬拌反應1天，產物化3O4/PEI.N&-FI磁分離并用超純水洗涂，然后分散到水中。分 別取25yLFesCV陽I.畑2(實施例1)、Fe3〇4/陽I.NHz-FI的水溶液于2血離屯、管中，再向其 中加700iiL超純水，超聲均勻，測紫外吸收（見圖1)。從圖中可W看出，Fe3〇4/PEI.NH2(曲 線1)在400到600皿處沒有明顯的紫外吸收峰，而FesCV陽I.NHz-FI(曲線。在500皿處 有一個明顯的紫外吸收峰，從而說明FI成功修飾到化3O4/PEI.NHz納米顆粒表面。 W47] 實施例3
[0048] 將5. 4mgLA與2. 9mg邸C、1. 7mgN服混合溶于憐酸鹽緩沖液PBS(抑=6. 0)中， 攬拌活化2~地，活化LA的簇基。然后，將上述混合溶液加入到20mgC00H-PEG-NH2的 PBS(抑=6.0)溶液中，繼續攬拌反應3天，用截留分子量1000的透析袋透析3天，然后真 空冷凍干燥，即得COOH-陽G-LA。取3mg合成的COOH-陽G-LA于気代〇2〇中進行核磁共振分 析ChNMR)(見圖2)。從圖中可W看出，在3. 8和4.化pm處出現的譜峰證明乳糖酸成功連 接到陽G上，并通過峰面積積分可知，每一個陽G上連接0. 7個乳糖酸。 W例實施例4
[0050] 將實施例3中制備的15mgCOOH-陽G-LA與12. 4mg邸C、7. 4mgN服混合溶解于 5血水后，攬拌活化化；然后將活化的COOH-陽G-LA溶液逐滴加入到化3O4/PEI.畑2斗1納米 顆粒水溶液（實施例2)中，攬拌反應3天，再磁分離洗涂，即得化3O4/PEI.NHz-FI-PEG-LA納 米顆粒，并分散于IOmL水中。取ImL化3O4/PEI.NHz-FI-PEG-LA納米顆粒水溶液（實施例 4)冷凍干燥，然后進行熱重分析（見圖3)。從圖中可W看出，修飾COOH-PEG-LA后，化3〇4/ 陽I.NHz-FI-PEG-LA納米顆粒