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黃綠蜜環菌中染料木素單體化合物的提取方法及其應用_3

文檔序號:9837240閱讀:來源:國知局
· 37(1H,d,J = 2. 1Hz,H-8),7· 38(2H,d,J = 5. 1Hz, H-2',6'),6. 84(2H,d,J = 5. lHz,H-3',5'),10. 85(1H,s,OH-11),9. 6(1H,s, OH-12) 12. 96 (1H,s,OH-13),
[0061] ID 13CNMR 譜中(DMS0-d6, 400MHz)的數據結果如下:180.66(04),164.71(07), 162.48 (C-4,),157. 89 ((C-5),154. 28 (C-2),130. 6(C-2,,6,),122.77 (C-l'), 121. 73(C-3),115. 54(C-3',5'),104. 95(C-10),99. 43(C-6),94. 12(C-8)。
[0062] 根據EI-MS、NMR鑒定結果,經結構解析,確定其為染料木素,染料木素的分子式為 C15H1()05,分子量為270,分子結構式如下:
[0063]
[0064] 實施例3 :黃綠蜜環菌中染料木素單體化合物的提取
[0065] 本實施例所用原料、材料、試劑、儀器設備同實施例1。
[0066] 本實施例黃綠蜜環菌中染料木素單體化合物的提取,包括以下步驟:
[0067] (1)以黃綠蜜環菌子實體為原料,室溫陰干處理后,在70°C烘干脫水,然后 在-20°C超微粉碎lmin,即得黃綠蜜環菌超微粉。
[0068] (2)取上述黃綠蜜環菌超微粉3kg,經過三次乙酸乙酯浸泡,第一次浸泡:3kg黃綠 蜜環菌超微粉加入21L乙酸乙酯,25°C浸泡48h,浸泡結束后,20°C、4, OOOrpm離心30min, 分別收集上清液和殘渣,上清液通過旋轉蒸發濃縮后轉移至60°C恒溫鼓風干燥箱中干燥至 恒重。第二次乙酸乙酯浸泡:第一次的殘渣加入21L乙酸乙酯,25°C浸泡36h。(浸泡結束, 按第一次浸泡方法進行處理,其中水體乙酸乙酯上清可與第一次提取上清混合,烘干至恒 重)。第三次浸泡:第二次浸泡殘渣加入21L乙酸乙酯,25°C浸泡24h,浸泡結束,按第一次 浸泡處理方法進行處理,將三次浸泡上清合并,旋蒸濃縮后烘干至恒重。
[0069] (3)將干燥至恒重的乙酸乙酯上清用乙醇體積分數為16%的正己烷-乙醇二元混 合溶劑溶解配制成102mg/mL的溶液,溶解后過0. 45 μ m的有機濾膜,得到黃綠蜜環菌子實 體小分子提取物的一維上樣溶液。
[0070] (4)對一維上樣溶液進行一維液相色譜分離:采用的色譜柱為Silica正相硅膠色 譜柱(150mmX 250mm,硅膠粒徑10 μ m),采用的流動相為二元混合有機相,其中A相為正己 烷,B相為乙醇,進樣量為85mL/針,流動相流速為560mL/min,檢測器為紫外檢測器,檢測波 長210nm ;乙醇活化色譜柱3~10倍柱體積,正己烷平衡3倍柱體積,一維上樣溶液上樣, 采用B相濃度由0%至75%進行梯度洗脫50min。得到的一維液相色譜圖如圖10所示,收 集27-29min洗脫液(圖中7. 5號峰)作為目的組分,減壓濃縮至膏狀,得到一維液相組分, 稱重為2. 73克。
[0071 ] (5)用乙醇體積分數為12 %的乙醇-正己烷二元混合溶劑溶解一維液相組分,溶 解至濃度為83mg/mL,溶解后過0. 45 μ m的有機濾膜,得到二維上樣溶液。
[0072] (6)對二維上樣溶液進行二維液相色譜分離:采用的色譜柱為Silica正相硅膠色 譜柱(20mmX250mm,硅膠粒徑10 μπι),采用的流動相為二元混合有機相,其中A相為正己 烷,B相為乙醇,進樣量為1400 μ L/針,流動相流速為12mL/min,檢測器為紫外檢測器,檢測 波長210nm,采用的洗脫方式為等度洗脫方式:B相濃度2%進行等度洗脫20min。得到的 二維液相色譜圖如圖11所示,有一個主峰(右邊峰)為目的峰,收集8. 5-10. 5min洗脫液 (右邊峰)作為目的組分,旋轉蒸發濃縮至干,得到淺黃色針晶,稱重為0. 059克,即為本發 明目的組分。
[0073] 對目的組分進行EI-MS、NMR鑒定,結果同實施例1,即得到目的組分為染料木素。
[0074] 實施例4 :黃綠蜜環菌中染料木素單體化合物的提取
[0075] 本實施例所用原料、材料、試劑、儀器設備同實施例1。
[0076] 本實施例黃綠蜜環菌中染料木素單體化合物的提取,包括以下步驟:
[0077] (1)以黃綠蜜環菌子實體為原料,室溫陰干處理后,在70°C烘干脫水,然后 在-20°C超微粉碎lmin,即得黃綠蜜環菌超微粉。
[0078] (2)取上述黃綠蜜環菌超微粉3kg,經過三次乙酸乙酯浸泡,第一次浸泡:3kg黃綠 蜜環菌超微粉加入28L乙酸乙酯,25°C浸泡48h,浸泡結束后,20°C、4, OOOrpm離心30min, 分別收集上清液和殘渣,上清液通過旋轉蒸發濃縮后轉移至60°C恒溫鼓風干燥箱中干燥至 恒重。第二次乙酸乙酯浸泡:第一次的殘渣加入28L乙酸乙酯,25°C浸泡36h。(浸泡結束, 按第一次浸泡方法進行處理,其中水體乙酸乙酯上清可與第一次提取上清混合,烘干至恒 重)。第三次浸泡:第二次浸泡殘渣加入28L乙酸乙酯,25°C浸泡24h,浸泡結束,按第一次 浸泡處理方法進行處理,將三次浸泡上清合并,旋蒸濃縮后烘干至恒重。
[0079] (3)將干燥至恒重的乙酸乙酯上清用乙醇體積分數為30%的正己烷-乙醇二元混 合溶劑溶解配制成132mg/mL的溶液,溶解后過0. 45 μ m的有機濾膜,得到黃綠蜜環菌子實 體小分子提取物的一維上樣溶液。
[0080] (4)對一維上樣溶液進行一維液相色譜分離:采用的色譜柱為Silica正相硅膠色 譜柱(150mmX 250mm,硅膠粒徑10 μ m),采用的流動相為二元混合有機相,其中A相為正己 烷,B相為乙醇,進樣量為120mL/針,流動相流速為600mL/min,檢測器為紫外檢測器,檢測 波長210nm ;乙醇活化色譜柱3~10倍柱體積,正己烷平衡3倍柱體積,一維上樣溶液上樣, 采用B相濃度由0%至75%進行梯度洗脫45min。得到的一維液相色譜圖如圖12所示,收 集26. 5-27. 5min洗脫液(圖中7. 5號峰)作為目的組分,減壓濃縮至膏狀,得到一維液相 組分,稱重為3. 19克。
[0081 ] (5)用乙醇體積分數為10 %的乙醇-正己烷二元混合溶劑溶解一維液相組分,溶 解至濃度為75mg/mL,溶解后過0. 45 μ m的有機濾膜,得到二維上樣溶液。
[0082] (6)對二維上樣溶液進行二維液相色譜分離:采用的色譜柱為Silica正相硅膠色 譜柱(20mmX250mm,硅膠粒徑10 μπι),采用的流動相為二元混合有機相,其中A相為正己 烷,B相為乙醇,進樣量為1000 μ L/針,流動相流速為20mL/min,檢測器為紫外檢測器,檢測 波長210nm,采用的洗脫方式為等度洗脫方式:B相濃度2%進行等度洗脫15min。得到的 二維液相色譜圖如圖13所示,有一個主峰(右邊峰)為目的峰,收集8. 5-10. 5min洗脫液 (右邊峰)作為目的組分,旋轉蒸發濃縮至干,得到淺黃色針晶,稱重為0. 067克,即為本發 明目的組分。
[0083] 對目的組分進行EI-MS、NMR鑒定,結果同實施例1,即得到目的組分為染料木素。
[0084] 實施例5 :抑制人肺腫瘤A549細胞生長的試驗
[0085] 主要材料與試劑:
[0086] 人肺癌A549細胞由
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