五控制開關、第七控制 開關和第八控制開關,由驅動單元將混合容器中的混合物驅動通過磁力分選單元,其中,結 合目標細胞的磁珠被吸附到管壁上,而未結合磁珠的非目標細胞隨著液體的流動進入陰性 樣品收集容器,即為陰性樣品;和
[0140] (3)收集陽性細胞,包括:撤除磁場,關閉其它控制開關而開啟第一控制開關、第七 控制開關和第九控制開關,由驅動單元驅動緩沖液將吸附到管壁上的陽性細胞帶入收集陽 性樣品的容器中。
[0141] 在某些實施方案中,所述方法還包括潤洗管路的步驟,包括:關閉其它控制開關而 開啟第一控制開關、第七控制開關和第十控制開關,由驅動單元驅動緩沖液,將管道內氣體 排入收集廢液的容器,通式潤洗管道。
[0142] 在某些實施方案中,步驟(2)后,所述方法還包括磁珠分離的步驟,包括:關閉其它 控制開關而開啟第五、第七和第九控制開關,并撤除磁場,由驅動單元驅動收集陽性樣品的 容器中預先放置的緩沖液將吸附在管壁上的細胞樣品帶入混合容器中;然后關閉其它控制 單元而開啟第四和第六控制開關,由驅動單元將容納磁珠分離試劑運入混合容器中,進行 磁珠分離。
[0143] 在某些實施方案中,磁珠分離后,啟動磁力分選單元,關閉其它控制開關而開啟第 五、第七和第九控制開關,由驅動單元將混合容器中的液體驅動流過磁力分選單元,磁珠被 吸附到管壁上,而含陽性細胞(即目標細胞)的液體流入容納陽性樣品的容器中。
[0144] 下文結合圖1闡述使用圖1所示裝置進行細胞免疫分選的過程。
[0145] (1)管路潤洗。儀器夾管閥初始均為關閉狀態,此時夾管閥1、7、10開啟,磁鐵處于 分離狀態,蠕動栗逆時針轉動,蠕動栗的轉速可以根據實驗過程及情況自行進行調整,例如 采用2~4ml/min;緩沖液流動將管道內氣體排入到廢液腔內,同時管道內充滿緩沖液,管路 潤洗有助于減少分選過程中對細胞的損傷;
[0146] (2)樣品混合及孵育。往陽性樣品收集腔內注入一定量的緩沖液,體積根據細胞量 等來具體設定,例如,可將其設定為10~30ml,如20ml。陽性樣品收集腔內的緩沖液之后作 為磁珠切除的溶劑。夾管閥3、6開啟,蠕動栗逆時針轉動,驅動樣品緩緩進入混合室;夾管閥 2、6開啟,懦動栗逆時針轉動,驅動磁珠緩緩進入混合室;夾管閥1、6開啟,懦動栗逆時針轉 動,驅動緩沖液進入混合室,緩沖液將管道壁上可能殘留的磁珠以及樣品沖進混合室。夾管 閥5、6開啟,蠕動栗轉動的方向可采用正反雙向,盡可能將樣品和磁珠之間混和均勻,進行 細胞磁珠之間的孵育,栗的轉速應當比較慢,孵育可以在常溫下進行。孵育時間與孵育溫 度、細胞種類等有一定關系,可由技術人員根據本領域常規技術確定。例如,孵育時間可以 為20~60min,如30min左右。
[0147] (3)免疫細胞分選。控制步進電機的運動,將磁鐵閉合,在管道周圍構建磁場;夾管 閥5、7、8開啟,蠕動栗轉動使上述已經孵育完成的磁珠細胞由混合室流入磁力分選單元,此 時蠕動栗設為低轉速(例如1~3ml/min),有利于磁珠在管壁的吸附;結合目標細胞的磁珠 會吸附在管壁上,而未結合磁珠的非目標細胞隨著液體的流動會進入陰性樣品收集腔,即 為陰性樣品。夾管閥1、6開啟,蠕動栗栗入一定量的緩沖液進入混合室,緩沖液的體積量需 要根據樣品總量進行調整,例如,體積可以為5~15ml,目的是將混合室里面殘留的細胞樣 品再一次帶入磁場分選單元;夾管閥5、7、8開啟,蠕動栗逆時針轉動將沖洗的10ml緩沖液栗 入陰性樣品收集腔收集,其經過分選磁場,可進一步富集陽性細胞,這對于珍稀細胞的處理 具有很重要的意義。最后,再用一定量的緩沖液(例如20~40ml)沖洗管道內細胞,夾管閥1、 7、8開啟,蠕動栗逆時針旋轉,將液體栗入到陰性樣品收集腔。
[0148] (4)磁珠分離。最終的目標細胞上結合的磁珠根據實驗要求可進行分離或者不分 離。若不需要分離磁珠時,該步驟可直接跳過。而對富集的結合磁珠的陽性樣品進行磁珠切 除,可根據不同的抗原/抗體選用其特異性的切除試劑,如特異性的酶,包括內切酶試劑。首 先將磁場撤除,夾管閥5、7、9開啟,蠕動栗順時針轉動,吸附在管道中的陽性目標細胞,經由 蠕動栗由陽性樣品收集腔中先前注入的緩沖液帶入混合室;夾管閥4、6開啟,蠕動栗逆時針 轉動,將磁珠分離試劑(如內切酶)加入混合室;夾管閥5、6開啟,蠕動栗逆時針低速轉動,在 特定溫度下進行磁珠細胞的分離,分離的效果會因為磁珠種類以及大小會有所差異,在混 合室周圍的溫度模塊提供切除所需的溫度條件;切除的時間與切除的溫度、細胞種類、分離 試劑等有一定關系,可由技術人員根據本領域常規技術確定。例如,該時間可以為1~ lOmin,如 5min左右。
[0149] (5)陽性樣品收集。上述的磁珠分離試劑反應后,步進電機轉動,磁鐵閉合,磁場保 持工作狀態,僅夾管閥5、7、9開啟,蠕動栗逆時針轉動,將混合室的液體再次栗入磁場中,磁 珠吸附在管道壁,而已經分離的細胞會經過管路進入陽性樣品收集腔,獲得純度很高的目 標細胞。
[0150] 最后,僅夾管閥1、6開啟,蠕動栗栗入一定量的緩沖液進入混合室,緩沖液的體積 量需要根據實驗情況進行調整,例如5~20ml,目的是對混合室內殘留的細胞進行清洗;僅 夾管閥5、7、9開啟,蠕動栗逆時針旋轉,將液體栗入到陽性樣品收集腔,最后的清洗步驟對 于珍稀細胞的處理或者小體積量的陽性樣品的收集具有重要的意義。
[0151] 本發明的其他方面由于本文的公開內容,對本領域的技術人員而言是顯而易見 的。
[0152] 下面結合具體實施例,進一步闡述本發明。應理解,這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法,通常按照國家標 準測定。若沒有相應的國家標準,則按照通用的國際標準、常規條件、或按照制造廠商所建 議的條件進行。除非另外說明,否則所有的份數為重量份,所有的百分比為重量百分比。
[0153] 如無具體說明,本發明的各種原料均可以通過市售得到;或根據本領域的常規方 法制備得到。
[0154] 除非另有定義或說明,本文中所使用的所有專業與科學用語與本領域技術熟練人 員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明 方法中。
[0155] 實施例
[0156] 本實施例描述CD3細胞分選實驗的實施操作:
[0157] (1)首先進行管路潤洗。儀器中僅夾管閥1、7、10開啟,磁鐵處于分離狀態,蠕動栗 逆時針轉動(轉速4ml/min),確保緩沖液充滿整個管道,這有助于減少分選過程對細胞的損 傷;
[0158] (2)進行樣品混合及孵育。往陽性樣品收集腔內注入一定量的緩沖液,作為后面磁 珠切除的溶劑。僅夾管閥3、6開啟,蠕動栗逆時針轉動(轉速2ml/min),向混合室中加入樣 品;僅夾管閥2、6開啟,懦動栗逆時針轉動(轉速2ml/min),向混合室中緩緩加入磁珠;僅夾 管閥1、6開啟,蠕動栗逆時針轉動(轉速6ml/min),向混合室中加入緩沖液,將管道壁上殘留 的少量磁珠和樣品沖進混合室。之后夾管閥5、6開啟,蠕動栗、進行正反雙向間隔轉動(轉速 2ml/min),盡可能將樣品與磁珠混和均勻,進行細胞磁珠之間的孵育。孵育在常溫下進行, 時間為30min。
[0159] (3)陰性樣品收集。控制分離的磁鐵閉合,在管道周圍形成磁場;夾管閥5、7、8開 啟,蠕動栗逆時針轉動(轉速2ml/min),使混合室內已經完成孵育的混合液由混合室流經分 選磁場,其中結合目標細胞的磁珠會吸附在管壁上,其余液體通過磁場后直接進入陰性樣 品收集腔;僅夾管閥1、6開啟,懦動栗逆時針轉動(轉速4ml/min),加入緩沖液體積10ml至混 合室中進行洗滌,充分保證混合室內殘留的細胞樣品可使用充分;再次進行磁場分離,僅夾 管閥5、7、8開啟,蠕動栗逆時針轉動(轉速2ml/min),混合室中的液體流經分離磁場至陰性 樣品收集腔;用20ml的緩沖液沖洗管道內細胞,夾管閥1、7、8開啟,蠕動栗逆時針旋轉(轉速 6ml/min),待所有的液體均流入到陰性樣品收集腔中。
[0160] (4)磁珠分離。控制閉合的磁鐵分離,撤除磁場,僅夾管閥5、7、9開啟,蠕動栗順時 針轉動(轉速4ml/min),陽性樣品收集腔內的緩沖液沖洗分選磁場管壁上的陽性目標細胞 后流入至混合室內;僅夾管閥4、6開啟,蠕動栗逆時針轉動(轉速2ml/min),向混合室中加入 內切酶;僅夾管閥5、6開啟,蠕動栗逆時針轉動(轉速2ml/min),在室溫下進行磁珠細胞的分 離(約3~5min ),在混合室周圍的溫度模塊保證室溫即可;
[0161] (5)陽性樣品收集。最后,控制分離的磁鐵閉合,形成分離磁場;夾管閥5、7、9開啟, 蠕動栗逆時針轉動(轉速2ml/min),混合室的液體流經分選磁場,磁珠吸附在管道壁,而已 經分離的細胞會進入陽性樣品收集腔。最后,僅夾管閥1、6開啟,蠕動栗栗入10ml緩沖液進 入混合室,對混合室內殘留的細胞進行清洗;僅夾管閥5、7、9開啟,蠕動栗逆時針旋轉,將液 體栗入到陽性樣品收集腔,陽性樣品收集完成。
[0162] (6)分選結果檢測。用流式細胞儀對收集到的陰性以及陽性樣品進行檢測,檢測結 果見圖2、圖3和圖4;分選實驗結果見表1,陽性樣品中CD3細胞比例均達到90%以上,目標細 胞純度較高,且細胞均勻無聚團的情況發生,相比于其他同類產品只能達到70%_80%的純 度。
[0163] 表1免疫磁珠分選儀⑶3細胞分選實驗(磁珠直徑:Ιμπι)
【主權項】
1. 一種用于細胞免疫磁珠分選的裝置,所述裝置包括: 驅動單元,用于驅動流體在管道中流動,所述驅動單元具有第一接口和第二接口,分別 與用于混合樣品和磁珠的混合容器的第一接口和第二接口連通; 磁力分選單元,用于產生磁力以分選出與磁珠結合的細胞; 控制開關,包括: 第一控制開關,用于控制容納緩沖液的容器與所述驅動單元的第一接口之間的連通; 第二控制開關,用于控制容納磁珠的容器與所述驅動單元的第一接口之間的連通; 第三控制開關,用于控制容納樣品的容器與所述驅動單元的第一接口之間的連通; 第五控制開關,用于控制混合容器第一接口與