a)中，然后將透析袋固定于裝有去離子水的透析容器內，在50KHz的超聲頻率下，透析24h，每隔3h換一次去離子水，以確保未反應的游離的葡萄糖完全透析出去；最后將透析袋中的剩余的共價復合物冷凍干燥，得到EGCG-α-乳白蛋白-葡萄糖共價復合物固體樣品。
[0033]實施例2:表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)-乳清蛋白肽-葡萄糖共價復合物的制備
[0034]將EGCG(4g/L)與乳清蛋白肽(16g/L)溶解于pH8.0的磷酸鹽緩沖液中，形成EGCG溶液與乳清蛋白肽溶液;在60 °C的水浴條件下，將EGCG溶液與乳清蛋白肽溶液等體積混合，形成混合溶液，并調節混合溶液的PH值為8.0;然后向反應容器中緩慢通入氧氣(I毫升/分鐘)，反應48h，反應過程不斷攪拌，使EGCG氧化成醌類化合物并與乳清蛋白肽的側鏈氨基酸基團反應生成EGCG-乳清蛋白肽共價復合物;將反應后的混合溶液置于透析袋(截留分子量3500kDa)中，然后將透析袋固定于裝有去離子水的透析容器內，在50KHz的超聲頻率下，透析24h，每隔3h換一次去離子水，以確保未反應的游離EGCG完全透析出去，最后將透析袋中的剩余的混合物冷凍干燥，得到EGCG-乳清蛋白肽共價復合物固體樣品；
[0035]將葡萄糖和制備的EGCG-乳清蛋白肽共價復合物按1:2的質量比溶于pH7.0磷酸鹽緩沖液中，形成混合溶液，冷凍干燥;將干燥后的樣品磨細，過200目篩，在相對濕度為79%，溫度為60°C，pH值為7的條件下，固相反應24h;反應結束后將共價復合物置于透析袋(截留分子量3500kDa)中，然后將透析袋固定于裝有去離子水的透析容器內，在50KHz的超聲頻率下，透析24h，每隔3h換一次去離子水，以確保未反應的游離的葡萄糖完全透析出去;最后將透析袋中的剩余的共價復合物冷凍干燥，得到EGCG-乳清蛋白肽-葡萄糖共價復合物固體樣品O
[0036]實施例3:綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖共價復合物和綠原酸-乳鐵蛋白-聚葡萄糖共價復合物的制備
[0037]將綠原酸(2g/L)與乳鐵蛋白(10g/L)溶解于pH9.0的磷酸鹽緩沖液中，形成綠原酸溶液與乳鐵蛋白溶液;在室溫條件下，將綠原酸溶液與乳鐵蛋白溶液等體積混合，形成混合溶液，并調節混合溶液PH值為9.0;然后向反應容器中緩慢通入氧氣(I毫升/分鐘)，反應36h，反應過程不斷攪拌，使得綠原酸氧化成醌類化合物并與蛋白質的側鏈氨基酸基團反應生成綠原酸-乳鐵蛋白共價復合物;將反應后的混合溶液置于透析袋(截留分子量3500kDa)中，然后將透析袋固定于裝有去離子水的透析容器內，在106KHz的超聲頻率下，透析36h，每隔6h換一次去離子水，以確保未反應的游離綠原酸完全透析出去，最后將透析袋中剩余的混合物冷凍干燥，得到綠原酸-乳鐵蛋白共價復合物固體樣品；
[0038]將上述樣品與葡萄糖或聚葡聚糖(10g/L)按1:1質量比，分別溶于pH7.0的磷酸鹽緩沖液中，形成混合溶液，冷凍干燥;將干燥后的樣品磨細，過200目篩，在相對濕度為79%，溫度為70°C、pH值為7的條件下，固相反應18h;反應結束后將共價復合物置于透析袋(截留分子量3500kDa)中，然后將透析袋固定于裝有去離子水的透析容器內，在106KHz的超聲頻率下，透析36h，每隔6h換一次去離子水，以確保未反應的游離的葡萄糖或聚葡聚糖完全透析出去;最后將透析袋中剩余的混合物冷凍干燥，得綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖共價復合物或綠原酸-乳鐵蛋白-聚葡萄糖共價復合物。
[0039]與乳鐵蛋白、綠原酸-乳鐵蛋白共價復合物相比，該實施例制備的綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖共價復合物和綠原酸-乳鐵蛋白-聚葡萄糖共價復合物具有更高的平均分子量，如圖2所示。通過鐵還原力分析，與乳鐵蛋白、綠原酸、綠原酸-乳鐵蛋白共價復合物、綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖非共價復合物和綠原酸-乳鐵蛋白-聚葡萄糖非共價復合物相比，該實施例制備的綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖共價復合物和綠原酸-乳鐵蛋白-聚葡萄糖共價復合物具有更強的體外抗氧化活性。如圖3所示。
[0040]將實施例制備的0.7g綠原酸-乳鐵蛋白-葡聚糖共價復合物和綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖共價復合物，分別溶解于10mL去離子水中，溶脹過夜，得到水相;將0.015gi3-胡蘿卜素油懸浮液溶解于5mL的中鏈甘油三酸酯中，得到油相;在高速乳化均質機的攪拌下緩慢將油相添加到水相中，1000rpm剪切1min，形成粗乳狀液;粗乳液通過高壓(閥)均質機采用二級加壓進一步均質；其中一級均質壓力為60Mpa，二級均質壓力為6MPa，均質3次，得到β-胡蘿卜素乳狀液。
[0041]該實施例制備的β-胡蘿卜素乳狀液的粒徑分布如圖4所示。從圖4可知，與乳鐵蛋白、綠原酸、綠原酸-乳鐵蛋白共價復合物、綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖非共價復合物和綠原酸-乳鐵蛋白-聚葡萄糖非共價復合物相比，采用綠原酸-乳鐵蛋白-葡萄糖共價復合物或綠原酸-乳鐵蛋白-聚葡萄糖共價復合物制備的乳液粒徑分布較窄，平均粒徑較小，且呈單峰分布，表明其具有較高的穩定性。
【主權項】
1.一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法，其特征在于，所述方法為:以多酚、蛋白質/多肽為原料，利用堿法誘導反應，制備多酚-蛋白質/多肽共價復合物；然后再以碳水化合物和制備的多酚-蛋白質/多肽共價復合物為原料，利用美拉德反應，制備多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物。2.根據權利要求1所述的一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法，其特征在于，所述方法的具體步驟為: (1)將多酚化合物與蛋白質/多肽分別溶解于磷酸鹽緩沖液中，形成多酚溶液與蛋白質/多肽溶液;在室溫或50-60°C的水浴加熱條件下，將多酚溶液與蛋白質/多肽溶液等體積混合，形成混合溶液，并調節混合溶液的PH值為8.0-10.0;然后向反應容器中緩慢通入氧氣，反應24-48h，反應過程不斷攪拌;采用超聲透析法，除去未反應的游離多酚，最后將透析袋中剩余的混合溶液冷凍干燥，得到多酚-蛋白質/多肽共價復合物固體樣品； (2)將碳水化合物和制備的多酚-蛋白質/多肽共價復合物溶于磷酸鹽緩沖液中，形成混合溶液，冷凍干燥;將干燥后的樣品磨細，過篩后，進行美拉德反應，反應結束后采用超聲透析法除去未反應的碳水化合物，得到多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物。3.根據權利要求1所述的一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法，其特征在于，所述的多酚為:茶多酚、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、綠原酸、沒食子酸、單寧、槲皮素、阿魏酸或姜黃素； 所述的蛋白質/多肽為:乳蛋白、血清蛋白、卵蛋白、魚糜蛋白、明膠、膠原蛋白、大豆蛋白、花生蛋白、乳清蛋白肽、大豆肽、玉米肽、小麥肽、膠原肽或谷胱甘肽;所述的乳蛋白為α-乳白蛋白、乳球蛋白、乳鐵蛋白或酪蛋白； 所述的碳水化合物為葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖、聚葡萄糖、燕麥葡聚糖、菊粉或麥芽糊精。4.根據權利要求1所述的一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法，其特征在于，所述多酚化合物的用量為0.5g/L-50g/L，蛋白質/多肽的用量為10g/L-200g/L，碳水化合物的用量為10g/L-200g/L。5.根據權利要求1所述的一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法，其特征在于，所述美拉德反應的條件為:反應在固相中進行，反應的相對濕度為79%，溫度為50-100 0C，pH值為4-11，反應時間為18h_24h。6.根據權利要求2所述的一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法，其特征在于，所述超聲透析法的方式為:將透析袋固定于裝有去離子水的透析容器內，在20-106KHZ的超聲頻率下，透析24-72h，每隔3-6h換一次去離子水。7.權利要求1-6任一項所述的一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法制備的多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物。8.權利要求7所述的多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物在制備β-胡蘿卜素乳狀液中的應用。9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述應用采取的方式為:將多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物溶解于水中，形成濃度為5g/L-50g/L的水相;將β-胡蘿卜素溶解于植物油中，形成濃度為0.5g/L-10g/L的油相;然后將水相與油相按(20:1)_(10:1)的體積比混合后，在8000-12000r/min的條件下剪切乳化6-10min，再進行高壓均質，得到β-胡蘿卜素乳狀液。10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的高壓均質方式為:在溫度為45-75°(:的條件下，采用二級加壓，均質1-5次;其中，一級均質壓力為30-60Mpa，二級均質壓力為3_6Mpa0
【專利摘要】本發明公開了屬于食品配料和食品加工技術領域的一種多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物的制備方法和應用。所述方法為：以多酚、蛋白質/多肽為原料，利用堿法誘導反應，制備多酚-蛋白質/多肽共價復合物；然后再以碳水化合物和制備的多酚-蛋白質/多肽共價復合物為原料，利用美拉德反應，制備多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物。所述制備方法使用天然來源的原料，不使用任何有機試劑，通過兩個步驟即可獲得性能良好的多酚-蛋白質/多肽-碳水化合物共價復合物，制備方法簡單、高效、安全，易于生產。所得產品具有較高的抗氧化性和乳化性，利用該產品穩定的β-胡蘿卜素乳狀液具有良好的理化穩定性。
【IPC分類】A23L33/18, A23L33/19, A23L33/125, A23L33/185, A23L33/10
【公開號】CN105639651
【申請號】
【發明人】高彥祥, 劉夫國, 馬翠翠
【申請人】中國農業大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月21日