液合并，濾液回收至 無醇味，可發現藥材浸膏分為上下兩層，上層蒸干，記為PCl，下層沉淀記為PC2 (黏膠狀，黑 褐色）。
[0060] 杜仲提取物的純化：
[0061] 1)將EUl在水中分散，分別以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取1-6次，優選提取2-5 次，石油醚萃取部分，回收溶劑后得石油醚萃取部位，記為EU2,乙酸乙酯萃部部分回收溶劑 后得乙酸乙酯萃取部位，記為EU3,正丁醇萃取部-位回收溶劑得EU4,水部位回收溶劑得 EU5〇
[0062] 2)乙酸乙酯萃取部位EU3,可以經硅膠柱層析、MCI柱層析、ODS柱層析、凝膠柱層 析中的任意一種或多種分離，優選的采用硅膠柱層析，硅膠柱徑高比為1 : 5-1 : 50,依次 以石油醚，石油醚乙酸乙酯不同配比的混合溶液，乙酸乙酯、甲醇洗脫，收集不同部分，其中 石油醚一乙酸乙酯（10:1-5:1)部分合并，濃縮得總酚酸類成分EU3-1，石油醚一乙酸乙酯 (2:1-1:10)部分合并，濃縮得木脂素類成分EU3-2、乙酸乙酯部分合并，濃縮得環烯醚萜類 成分EU3-3。
[0063] 3)正丁醇萃取部位EU4,可以經硅膠柱層析、MCI柱層析、ODS柱層析、凝膠柱層析 中的任意一種或多種等分離，優選的采用MCI柱層析，MCI徑高比為1 : 5-1 : 20,分別用含 水甲醇洗脫，優選的用80 %甲醇洗脫。收集80 %甲醇洗脫液得苯丙素苷類成分部分EU4-1。
[0064] 杜仲提取物 EU，可以是 EU1，也可以是 EU2, EU3, EU3-1，EU3-2, EU3-3, EU4, EU4-1， EU5,的任一部分或任幾部分的組合。
[0065] 補骨脂提取物的純化：PC1部分用含水溶劑溶解，優選的以10-50%甲醇溶解，可 以經MCI柱層析、凝膠柱層析中的任意一種或多種分離，優選的采用MCI柱層析，MCI徑高 比為1 : 5-1 : 20,分別用含水甲醇洗脫，優選的用80%甲醇洗脫。收集80%甲醇洗脫液 得補骨脂黃酮類成分部分PCl-I。PC2用有機溶劑溶解，優選的用乙酸乙酯溶解，再經硅膠 柱層析分離，硅膠柱高比為1:4-1:10,以石油醚一乙酸乙酯梯度洗脫，合并石油醚洗脫部分 和石油醚-乙酸乙酯（10:1 -一1:10)部分，，回收溶劑得含含有香豆素、黃酮、酚類等化合 物的PC2-1。
[0066] 補骨脂提取物PC，可以是PCl或PC2,以及二者組合，也可以使PCI，PCl-I，PC2， PC2-1的任一部分或任幾部分的組合。
[0067] 大蒜和桃仁分別采用溶劑提取法進行提取，優選的提取溶劑為乙醇，回收溶劑分 別得桃仁提取物，記為TRl，大蒜提取物，記為ASl。
[0068] 青娥方提取物的組分的重量配比：EUl :PC1 :PC2 :TR1 :AS1 = (20-50) : (5-10) : (1 0-30):(1-10):(5-20)
[0069] 將以上所得藥物物質，加入常規輔料，按常規的制劑工藝制成藥劑學可接受的任 意常規劑型，包括片劑、膠囊、粉劑、顆粒、滴丸劑，丸劑及口服液。
[0070] 方法二：原料藥處方配比組合后以120#汽油、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、 乙醇水溶液或甲醇的水溶液及水等提取再通過大孔吸附樹脂或其他色譜方法，或溶劑萃取 法等純化得到。
[0071] 將以上所得藥物物質，加入常規輔料，按常規的制劑工藝制成藥劑學可接受的任 意常規劑型，包括片劑、膠囊、粉劑、顆粒、滴丸劑，丸劑及口服液。
[0072] 本發明中的藥物物質包括青娥方提取物，青娥方提取物是按青娥方原料藥物組成 配比，經過溶劑提取、進一步通過分離純化得到；富集了杜仲木質素類、杜仲環烯醚萜類、 杜仲苯丙酸類、補骨脂香豆素類、補骨脂黃酮類成分。
[0073] 本發明中的青娥方提取物可使嗅球切除抑郁模型小鼠行為學得到改善，并能增加 腦中5-ΗΤ，ΝΕ，γ -GABA的含量，降低Glu的含量，從而起到治療和改善抑郁及焦慮疾病的作 用。
[0074] 有益效果
[0075] 本發明的優點和積極效果在于，通過生物學研究表明，青娥方提取物對實驗性抑 郁小鼠具有一定的保護作用，主要體現在對行為學評價的改善作用。青娥方提取物一方面 能顯著增加嗅球切除小鼠海馬去甲腎上腺素ΝΕ，5-ΗΤ/5-ΗΙΑΑ的比值，提示青娥方提取物 可通過抑制單胺氧化酶的活性發揮抗抑郁及抗焦慮作用。另一方面青娥方提取物通過增加 腦內γ -GABA，減少Glu含量的含量，發揮調節中樞神經系統神經遞質Glu和γ -GABA代謝 的作用，從而調控受體對兒茶酚胺的反應性，發揮抗抑郁及抗焦慮作用。因此青娥方提取物 具有對抑郁的治療和緩解作用。提示其具有開發新的抗抑郁及抗焦慮藥物的前景。
【附圖說明】
[0076] 附圖1:松脂醇二葡萄糖苷（A)、京尼平苷（B)、京尼平苷酸（C)、桃葉珊瑚苷（D)、 綠原酸（E)和內標柳胺酚（F)的結構圖及子離子掃描模式下的母離子和子離子質譜圖
【具體實施方式】
[0077] 以下通過實施例來進一步描述本發明，應該理解的是，這些實施例僅用于例證的 目的，決不限制本發明的保護范圍。
[0078] 實驗例1本發明青娥丸致大鼠嗅球損毀模型的改善作用
[0079] (一）實驗藥物和儀器
[0080] 藥物：鹽酸氟西汀（又稱百憂解），批號2076Α，法國Fatheon France生產。文拉法 辛，批號 1308025, Pfizer Iretand Pharmaceuticals 生產。異氣燒，r_ 氨基丁酸（GABA)， 谷氨酸扣111)，5-羥色胺（5-!11')5-!11'，腎上腺素伍?1)，多巴胺（04)04，去甲腎上腺素（呢） NE，5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA)，3,4-二羥基芐胺（內標）以上幾種均為Sigma公司產品。
[0081] 儀器："鼠博士 "動物行為學分析：高架十字迷宮（RD1108-EPM-M)，強迫游泳實驗 分析系統型號（RD1119-FST-M)，懸尾實驗分析系統型號（RD1118-TST-M)，曠場實驗分析系 統（RD1112-0FT-M)。麻醉機：（SN MSSN 5374. UK)，電動骨鉆（BJ1102SA0)，" 鼠博士"動物 行為學視頻分析系統（R. D)
[0082] (二）實驗方法與結果
[0083] 動物分組及給藥
[0084] 1雙側嗅球切除模型（OB)的抑郁模型的建立
[0085] C57BL/6J雄性小鼠，SPF級，四周周齡，由上海中醫藥大學實驗動物中心提供。所 有的動物年齡和體重相當的，實驗動物的初始體重為25 - 30g，實驗動物飼養在一個裝有墊 料塑料盒內（45cmX 25cmX 20cm)，保持室溫20 ± 2 °C，濕度40 - 60 %，保持12小時光照和 12小時熄燈循環，光照時間從7:00-19:00。水和食物可以自由獲得。實驗操作程序完全按 照上海中醫藥大學實驗動物中心動物福利委員會的相關指導方案進行。
[0086] 雙側嗅球切除手術
[0087] C57BL/6J 小鼠用 7. 5 % (w/v)水合氯醛腹腔注射（375mg/kg i. P. :Merck， Germany)或用異氟燒吸入麻醉（0.5% in lml/min 02)，操作過程遵照文獻報道.簡單的 說，用剃毛刀剔去頭部毛發后，沿徑向中線切口，從前囪前Icm至后Icm正中線處，暴露顱 骨。用鉆頭在距離前囪前8mm，正中線兩側各Imm分別開一骨窗，直徑約1.5mm。將電熱探 頭垂直插入顱內約2s，損傷雙側嗅球。并用5mm吸頭插入骨窗內，用水栗溫和吸出損毀的嗅 球，保證不損傷前額葉皮質，鉆孔中塞入止血海綿以免出血。于創面撒上滅菌磺胺結晶以防 止感染，縫合皮膚。假手術組合嗅球切除手術過程完全相同，只是不損毀和吸出嗅球。所有 的動物每天都給予監護，并通過隨后的實驗證實OB模型是成功的，如果OB動物被證實嗅球 切除不完全或前額葉皮質受到損傷的應剔除。假手術動物如果嗅球或前額葉皮質受損的也 應剔除。隨后實驗程序附圖1所示。術后恢復14天，第十五天進行曠場實驗（OFT)，然后連 續給藥28d。實驗末次給藥后依次進行曠場實驗，強迫游泳，懸尾，高架十字迷宮。兩實驗之 間間隔〈2d ;每只動物實驗結束后清除糞便，用70%乙醇噴灑箱底并用潔凈紗布抹干，以免 前1只動物的殘留氣味造成對本次實驗的影響；全部實驗結束后由不熟悉實驗設計人員進 行數據提取錄入。
[0088] 2動物分組和給藥
[0089] 造模成功的C57BL/6mice，80只，隨機分為10組：模型組（0B組，給予等體積蒸餾 水）；陽性藥I組（Fluoxetine);陽性藥I組（venlafaxine)，青娥方提取1，提取物2,提取 物3,提取物4,假手術組10只（sham，給予等體積蒸餾水）；
[0090] 灌胃藥物的配制：C57BL小鼠劑量是人劑量的10倍。給藥時平均體重25g，按每公 斤體重20ml/kg/d，每天灌胃兩次，相當于25g小鼠每次灌胃0. 25ml.
[0091 ] 灌胃方案：實驗c57BL小鼠分組：
[0092] 假手術組，每日兩次，每次灌胃0. 25ml生理鹽水或0. 5% CMC-Na ;模型組，每日兩 次，每次灌胃〇. 25ml生理鹽水或0. 5% CMC-Na ;
[0093] 氟西叮組，每日兩次，每次灌胃給予0. 25ml藥液，相當于10mg/kg/d ;
[0094] 文拉法辛組，每日兩次，每次灌胃給予0· 25ml藥液，相當于10mg/kg/d ;
[0095] 青娥方提取1，每日兩次，每25g體重每次灌胃0.25ml濃度為0· 18g/ml，隨著體重 的增加，相應的給藥體積隨體重而變化，相當于0. 78g/kg/d ;
[0096] 青娥方提取物2,每日兩次，每25g體重每次灌胃0. 25ml濃度為0. 18g/ml，隨著體 重的增加，相應的給藥體積隨體重而變化，相當于0. 80g/kg/d ;
[0097] 青娥方提取物3,每日兩次，每25g體重每次灌胃0· 25ml濃度為0· 18g/ml，隨著體 重的增加，相應的給藥體積隨體重而變化，相當于0. 56g/kg/d ;
[0098] 青娥方提取物4,每日兩次，每25g體重每次灌胃0. 25ml濃度