for C37H56N3O16，798 · 3661)，確定該化合物的分子式為C37H55N3O16; 13C和1H NMR見表3。
[0084] 式(XIV)化合物:綠色油狀液體；[a]f -25. 5: (c0.50，Me0H) iimMeOiOA^aoge) 205(4.68),279(3.74)nm；IR(KBr)vmax3353,2928,2868,1648,1508,1283,1076,815cm _1； ESIMS(positive)m/z 798.7;ESIMS(negative)m/z 796.7;HRESIMS(positive)m/z 798 · 3632(calcd · for C37H56N3O16，798 · 3661)，確定該化合物的分子式為C37H55N3O16; 13C和1H NMR見表3。
[0085] 表1式(II)-式(VI)化合物的13C NMR及1H NMR數據和歸屬
[0088]
[0089] a Measured in 01^0-(16(? NMR for 600MHz，13C NMR for 150MHz).
[0090] *Assignment may be interchanged.
[0091] 表2式(VII)-式(XI)化合物的13C NMR及1H NMR數據和歸屬
[0092]
[0094]
[0095] a Measured in DMS〇-d6(4 NMR for 600MHz，13C NMR for 150MHz).
[0096] b Measured in CD30D(4 NMR for 300MHz，13C NMR for 75MHz).
[0097] c Measured in DMS〇-d6( 4 NMR for 300MHz，13C NMR for 75MHz).
[0098] *Assignment may be interchanged.
[0099] 表3式(XII)-式(XIV)化合物的13C NMR及1H NMR數據和歸屬
[0100]
[0101]
[0102] a Measured in DMS〇-d6(4 NMR for 600MHz，13C NMR for 150MHz).
[0103] b Measured in DMS〇-d6(4 NMR for 600MHz，13C NMR for 100MHz).
[0104] *Assignment may be interchanged.
[0105]實施例2、二咖啡酰亞精胺衍生物糖苷抗氧化活性結果
[0106] 化合物的抗氧化活性是采用oxygen radical absorbance capacity(ORAC)實驗 來評價的，具體實驗流程如下。將〇.248g AAPH(2,2'_偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽）加入到 50mL磷酸緩沖液體系中配置成18.3mM的AAPH儲備溶液。依次將20mL磷酸緩沖液、20mL待檢 測樣品或標準物質Trolox溶液（濃度為6 · 25mM)和20mL焚光物質disodium f luorescein (FL，濃度為630nM)加入到96孔板板孔中。接下來，迅速將140mL AAPH(濃度為18.3mM)加入 到96孔板板孔中，并即刻將96孔板置于瑞士Tecan公司生產的GENios Luciferase-based微 孔板讀數儀中，設定激發波長為485nm，發射波長為527nm，每2分鐘測定其熒光強度，共記錄 100min〇
[0107] 活性物質的抗氧化能力如下計算&S:RelativeORACvalue = (AUCsampie-AUCblank) / ( AUCtrolox-AUCbl - )。其中，AUCsampie指的是測試樣品的熒光衰退曲線下積分面積， AUCtrolox指的是標準物質Trolox的熒光衰退曲線下積分面積，AUCblank指的是未加入測試樣 品或標準物質Tro lox時的熒光衰退曲線下積分面積。
[0108] 具體結果如表4:
[0109] 表4二咖啡酰亞精胺衍生物糖苷抗氧化活性結果
[0110]
[0111]
[0112] EGCG(epigallocatechin gallate)代表陽性對照藥治療組。
[0113] 表4的實驗結果顯示了本發明的二咖啡酰亞精胺衍生物糖苷具有明顯的抗氧化活 性。其中大部分化合物的抗氧化能力強于陽性對照藥EGCG。因此，本發明的化合物可用作抗 氧化劑用于相應疾病的預防和治療。
[0114] 實施例3、化合物提高老年癡呆果蠅學習記憶活性測試方法
[0115] (1)老年癡呆果蠅的培育
[0116] w1118(iS〇CJl)作為實驗的對照組背景果蠅，簡記為"2U"。成功轉入致病性Αβ 42蛋白 的果蠅為(UAS-Ai342;簡記為"Η29.3"）。該品系果蠅通過與全腦表達Gal4啟動子果蠅進行雜 交，獲得攜帶elav-GAL4 Gl55(P35)與Αβ42的果蠅品系。
[0117] (2)老年癡呆果蠅的給藥
[0118] 試驗設置健康果蠅無藥對照、疾病果蠅無藥對照和疾病果蠅給藥的三種組別。
[0119] 所有測試果繩的親本均在恒溫24°C，恒濕42%RH(Relative humidity)的繩房飼 養和繁殖。果蠅羽化后的第一天將對照組果蠅及疾病組果蠅和待喂藥組果蠅通過二氧化碳 麻醉之后，挑選正確性狀的果蠅在含有食物的玻璃管中。在給藥階段，所有測試果蠅在28°C 恒溫和42%恒濕的保溫箱內飼養，以保證果蠅吃藥的效率。每日果蠅喂藥4小時，從挑出果 蠅的第二天一直喂藥到第8天。
[0120] 所喂藥物在挑蠅第二天配制并與配制當天給果蠅喂藥。100%DMS0溶解使其濃度 為10mM。在配制工作液時，利用含有4%的蔗糖將10mM母液稀釋至100μΜ。另外，對照組果蠅 喂含有1%DMS0的糖水。對于每個行為指數(Performance Index)，需要有2管果繩組，每管 中含有約100只果蠅。
[0121] 實驗在恒溫25°C、恒濕70%，避光的行為房中進行，方法可見參考文獻[1_3]。
[0122] 1)在訓練階段，將100只左右的果蠅裝入安置有銅網交叉電極的訓練管，先后通入 辛醇(0CT)和甲基環己醇(MCH)兩種氣味各60s，中間間隔45s的新鮮空氣。在通入第一種氣 味(CS+)的同時給予果蠅60V的脈沖電擊刺激(US，脈沖時長1.5s，間隔3.5s)。通入第二種氣 味(CS-)時不給予電擊。如此完成一個訓練周期。
[0123] 2)在瞬時記憶(學習）能力測試中，完成一個訓練周期的果蠅被立即轉移到T-Maze 的選擇點，同時從相對的兩個方向通入CS+和CS-。經過2min的選擇后兩側的果蠅被分別收 集，麻醉或處死后進行計數。行為指數(Performance index，PI)的計算公式如下：PI = [(CS-)-(CS+)]/[(CS-)+(CS+)]XIOOo
[0124] 分別使用0CT和MCH作為CS+進行訓練和測試，得到的兩個PI的平均值作為一次實 驗的PI使用。PI = 〇表示測試中果蠅對于兩種氣味的選擇為50: 50,即沒有形成記憶;PI = 100表示測試中果蠅全部逃避伴隨電擊的氣味，即完美記憶。進行活性測試時，同時進行不 喂藥的同遺傳背景健康蠅(2U*H29.3)、不喂藥的老年癡呆疾病蠅(P35*H29.3)、喂測試藥的 老年癡呆疾病蠅的嗅覺短期記憶缺陷測試，分別計算它們的總學習記憶行為指數(PI)。將 喂測試藥的老年癡呆疾病蠅學習記憶行為指數與不喂藥的同遺傳背景健康蠅（2U*H29.3) 行為指數、不喂藥的老年癡呆疾病蠅(P35*H29.3)行為指數相比較，評價測試藥物抗老年癡 呆的作用。喂食測試物的老年癡呆疾病蠅學習記憶行為指數相對越高則說明測試物抗老年 癡呆作用越強。采用One-way analysis of variance(ANOVA)比較，喂食測試物的老年癡呆 疾病蠅學習記憶行為指數和不喂藥(僅給不含藥樣品的溶劑）的老年癡呆疾病蠅學習記憶 行為指數，P〈〇. 05為有明顯差別，P〈0.01為有顯著差別，P〈0.001為有極顯著差別。
[0125] 數據分析和圖形展示通過GraphPad Prism 5.01進行處理;具體結果見表5:
[0126] 表5二咖啡酰亞精胺衍生物糖苷提高老年癡呆果蠅學習記憶活性結果
[0127]
[0128] 2U*H29.3代表健康果蠅;P35*H29.3代表疾病果蠅；美金剛代表陽性對照藥治療 組。藥物治療組給藥濃度為1〇〇μΜ。與2U*H29.3組比較， #P〈0.001;與P35*H29.3組比較，*P〈 0.05 ,**P<0.01 ,***P<0.001 ；n = 6,One-way analysis of variance(AN0VA) 〇
[0129] 表5的實驗結果表明本發明的所有化合物可提高老年癡呆果蠅的學習記憶功能， 大部分化合物效果優于陽性對照藥物美金剛或與陽性對照藥物相當。
[0130] 實施例4二咖啡酰亞精胺衍生物糖苷抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性結果
[0131] (1)細胞毒性測定
[0132] 1 )HEp-2細胞接種于96孔細胞培養板中，100μL7孔，細胞密度為2.5 X 105/mL，置于 37°C，5%C02培養箱中培養，約20h長成細胞單層。
[0133] 2)棄去96孔板中的培養液，用維持液將待測樣品倍半稀釋成不同濃度，每個稀釋 度設置3個復孔，100μL7孔，同時設置細胞對照孔，然后置于培養箱中繼續培養。
[0134] 3)每天觀察樣品毒性引起的細胞病變，72h后，棄去培養液，參照ΜΤΤ法，每孔加入 30yL5mg/mL的MTT溶液，置于培養箱中避光繼續孵育4h，使其形。
[0135] (2)細胞致病變法（Cytopathic effect assay，CPE)
[0136] 1 )HEp-2細胞接種于96孔細胞培養板中，100μL孔，細胞密度2.5 X 105/mL，置于37 °C，5 % C02培養箱中培養，約20h長成細胞單層。
[0137] 2)棄去細胞培養液，維持液倍半稀釋待測樣品，單體化合物起始濃度為50μΜ，每孔 加入50yL樣品和50yL 100 X TCID50的病毒稀釋液，設置陽性對照藥利巴韋林組、病毒對照 組和細胞對照組。置于37 °C，5 % C02培養箱中培養。
[0138] 3)繼續培養60~72h，待病毒對照組完全病變時，記錄各組病毒病變情況。
[0139] 4)病毒致細胞病變效應的記錄方法為:無細胞病變記為"一"，0~25%細胞病變記 為"+"，25 %~50 %細胞病變記為"++"，50 %~75 %細胞病變記為"+++"，75 %~100 %細胞 病變記為"++++"。病變程度為"++"對應的樣品濃度即為該樣品抗病毒的半數抑制濃度IC50。
[0140] 5)每個實驗獨立進行三次實驗。
[0141] 具體結果如表6:
[0142] 表6二咖啡酰亞精胺衍生物糖苷抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性結果
[0143]
[0144] 表6的實驗結果顯示了本發明的化合物I