L-PEG-NHS的摩爾比為多肽化合物：MAL-PEG-NHS = 1 : (0. 1~10)，特 別地，優選1 : (0. 3~6)，更優選1 : (0. 4~3)，最優選為1 : (0. 5~2)。
[0154] 在得到步驟三的反應體系后，純化水凝膠因子。
[0155] 純化水凝膠因子的方法并不受到特別的限制，只要能將水凝膠因子提純即可。
[0156] 在優選的實施方式中，選用透析法對水凝膠因子進行純化，其中，透析時所需的透 析袋的分子量為5000~100000。
[0157] 透析的時間并沒有特別地限制，只要能純化即可，優選為20~100小時，更優選為 25~55小時，最優選為35~50小時。
[0158] 在透析的過程中，每8小時換液一次，然后凍干，獲得基于四代聚酰胺-胺型樹枝 狀分子的水凝膠因子。
[0159] 在接到樹枝狀分子的MAL-PEG-NHS的末端選用多肽進行修飾，不僅提升了與細胞 的粘附性，而且提供了交聯點。
[0160] 根據本發明的另一方面，由本發明提供的制備方法得到的水凝膠為一種三維材 料，具有穩定的溶脹率、可控的降解率、較強的機械性能和良好的生物相容性，因此，該水凝 膠材料能夠應用到組織工程中，在市場中能夠得到越來越廣泛的應用。
[0161] 實施例
[0162] 以下通過具體實例進一步描述本發明。不過這些實例僅僅是范例性的，并不對本 發明的保護范圍構成任何限制。
[0163] 在下述實施例中：
[0164] 巰基修飾的八臂聚乙二醇（0-PEG)的分子量為20kDa ;
[0165] 馬來酰亞胺一聚乙二醇一N-羥基琥珀酰亞胺（MAL-PEG-NHS)分子量為5000 ;
[0166] 甲氧基聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺（mPEG-NHS)分子量為1000 ;
[0167] 四代聚酰胺-胺型樹枝狀分子為按照說明書中所提及的發散法自行合成。
[0168] 實施例1
[0169] 第一水凝膠因子0-PEG-D0PA的制備過程
[0170] 1
1的制備：將2. 00g二硫二批陡與426. 36mg端巰基丙醇加入甲 醇溶液中混合，再加入lmL乙酸，在室溫下攪拌12h，得到包含：
的反應 體系，
[0171] 將反應體系通過柱層析法進行提純，其中，洗脫劑為二氯甲烷：乙酸乙酯=40:1 ;
[0172] 2)
的制備：
[0173] 在冰鹽浴條件下，將步驟1)中所得提純后的產物340mg與對硝基苯基氯甲酸 酯445. 0 lmg加入到四氫呋喃中混合，再加入400mg三乙胺，反應48小時，得到包含有 l〇2
的反應體系，
[0174] 將上述反應體系通過柱層析進行提純，其中，洗脫劑：二氯甲烷：石油醚=20:1。
[0175] 3)第一水凝膠因子0-PEG-D0PA的制備：
[0176] 在避光和常溫條件下，將219. 6mg步驟2)中提純得到的 與170. 7mg多巴胺（D0PA)加入二甲基亞砜（DMS0)中，再加入500mg三乙胺，反應48h，之后 加入1. 〇g巰基修飾的八臂聚乙二醇（0-PEG)，繼續反應48h，最終得到包含有第一水凝膠因 子的反應體系，
[0177] 將得到的包含有第一水凝膠因子的反應體系用分子量為2000的透析袋透析48h， 每8h換液一次，然后凍干，獲得產物第一水凝膠因子。
[0178] 實施例2
[0179] 含有RGDyC多肽基團的樹枝狀分子衍生物的制備
[0180] 1)在室溫條件下，將25. 03mg四代的聚酰胺-胺型樹枝狀分子和 187. 73mgMAL-PEG-NHS 加入水中，反應 15min ;
[0181] 2)向步驟1)中得到的體系中再加入75. 09mg mPEG-NHS，繼續反應30min ;
[0182] 3)向步驟2)中的體系中加入13. 73mg RGDyC，反應2h，得到包含有水凝膠因子 (G-4.0-PEG-RGDyC)的反應體系，
[0183] 得到的反應體系用分子量為8000的透析袋透析48h，每8h換液一次，然后凍干，獲 得水凝膠因子，即含有RGDyC多肽基團的樹枝狀分子衍生物。
[0184] 實施例3
[0185] 含有Fmoc-RGDC和RAADyC多肽基團的樹枝狀分子衍生物的制備
[0186] 重復實施例2,其中，在步驟3)中，不添加 RGDyC，而是添加11. 84mgFmoc-RGDC，反 應2h，之后再加入13. OlmgRAADyC，反應2h，其余條件不變。
[0187] 實施例4
[0188] 含有RGDyC和RAADyC多肽基團的樹枝狀分子衍生物的制備
[0189] 重復實施例2,其中，在步驟3)中，RGDyC的添加量為13. 73mg，反應2h，之后加入 13. Olmg RAADyC，反應2h，其余條件不變。
[0190] 實施例5
[0191 ] 含有RAADyC多肽基團的樹枝狀分子衍生物的制備
[0192] 重復實施例2,其中，在步驟3)中，不添加 RGDyC，加入13. Olmg RAADyC，反應2h， 其余條件不變。
[0193] 實施例6
[0194] 水凝膠I的制備
[0195] 將實施例1中的得到的水凝膠因子15mg加入在50 μ L的磷酸鹽緩沖溶液（PBS) 中，混合均勻后，向其中加入50 μ L含有lmg/lOOuL的高碘酸鈉（NaI04)的水溶液，然后獲 得水凝膠I。
[0196] 經觀察，形成凝膠的時間為5分鐘。
[0197] 實施例7
[0198] 水凝膠II的制備
[0199] 將實施例1中的得到的水凝膠因子15mg和7. 5mg實施例2中得到的水凝膠因子 加入到50 μ L的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)中，混合均勻后，向其中加入50 μ L含有lmg/100uL 的高碘酸鈉（NaI04)的水溶液，然后獲得水凝膠II。
[0200] 經觀察，形成凝膠的時間為5分鐘。
[0201] 實施例8
[0202] 水凝膠III的制備
[0203] 將實施例1中的得到的水凝膠因子15mg和7. 5mg實施例3中得到的水凝膠因子加 入到50 μ L的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)中，混合均勻后，向其中加入50 μ L濃度為lmg/100uL 的高碘酸鈉（NaI04)的水溶液，然后獲得水凝膠III。
[0204] 經觀察，形成凝膠的時間為5分鐘。
[0205] 實施例9
[0206] 水凝膠IV的制備
[0207] 將實施例1中的得到的水凝膠因子15mg和7. 5mg實施例4中得到的水凝膠因子加 入到50 μ L的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)中，混合均勻后，向其中加入50 μ L濃度為lmg/100uL 的高碘酸鈉（NaI04)的水溶液，然后獲得水凝膠IV。
[0208] 經觀察，形成凝膠的時間為5分鐘。
[0209] 實施例10
[0210] 水凝膠V的制備
[0211] 將實施例1中的得到的水凝膠因子15mg和7. 5mg實施例5中得到的水凝膠因子加 入到50 μ L的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)中，混合均勻后，向其中加入50 μ L濃度為lmg/100uL 的高碘酸鈉（NaI04)的水溶液，然后獲得水凝膠V。
[0212] 經觀察，形成凝膠的時間為5分鐘。
[0213] 試驗例
[0214] 核磁1H-NMR (溶劑：氣水）
[0215] 將實施例1中所得的第一水凝膠因子進行核磁測試，結果如圖1所示。
[0216] 紫外可見光譜測試
[0217] 將實施例1中所得的第一水凝膠因子進行紫外可見光譜測試，結果如圖2所示。
[0218] 由圖2可得出：相較于0-PEG，0-PEG-D0PA存在酰胺鍵峰以及鄰苯二酚峰，說明相 較于原料0-PEG，經過反應，確實進行了 D0PA的封端，完成了第一凝膠因子的構建。
[0219] 由圖1和圖2綜合分析可得，核磁低場峰為D0PA上的氫的峰，并且在紫外上出 現鄰苯二酚的特征峰，證明D0PA確實進行了 0-PEG的封端。通過核磁積分可證明每個 0-PEG-D0PA上平均有8個D0PA分子，證明D0PA基本對0-PEG進行了完全的封端，在實施例 1中已成功制備得到第一水凝膠因子。
[0220] 掃描電鏡測試
[0221] 將實施例9中所得的水凝膠浸泡在10ml PBS緩沖液中，保持緩沖液的溫度為 37°C，浸泡時間為48小時。將溶脹好的水凝膠用液氮速冷并切片，將切片放置在內硅片上 進行冷凍干燥，然后通過掃描電鏡Hitachi S4800觀察其表面形態，其中，標尺為100uM，