一種小麥赤霉病安全快速鑒定方法
【技術領域】
[0001 ]本發明涉及糧食選種育種領域，特別是一種小麥赤霉病安全快速鑒定方法。
【背景技術】
[0002] 小麥赤霉病是主要由禾谷鐮刀菌引起的世界性的疾病，它不僅能導致小麥減產絕 產，還會產生毒素，危及人和動物的健康。在我國，小麥赤霉病原本多發于江浙一帶溫暖濕 潤的地區，但近些年由于全球氣候變暖及秸桿還田等因素的影響，小麥赤霉病發病逐漸北 移，在2012年以來在黃淮麥區也有爆發。所以小麥赤霉病的防治與抗病品種的選育是一個 亟待解決的問題，然而在小麥抗病品種鑒定的實驗方法上還存在著很大不足。
[0003] 首先，傳統的田間鑒定方法直接將病菌帶入自然環境中，易引發環境污染、病情爆 發;其次，在田間常用的接種方法包括噴霧法和單花滴注法，其中噴霧法已被證實其針對的 抗侵入性沒有單花滴注法針對的抗擴展性穩定性高，所以，將病菌注入小麥內部是現階段 要證實小麥抗赤霉病能力的必然操作，而這種要將孢子懸浮液注入小穗內的操作十分細 致，不僅要先剪去穎殼尖部，還易注射在小穗外，若要將懸浮液全部注射進去，常常需要調 整針頭進入小穗不同的腔或縫隙內，所以在田間進行大量材料的接種有很大的困難;再次， 小麥接種赤霉病菌的最佳時期是抽穗揚花期，這個時期也正是易出現降雨的季節，在田間 進行試驗不能保證環境濕度、溫度和光照起碼的恒定，使鑒定不夠嚴謹;最后，在實驗數據 記錄上除了有田間觀察不便的問題，傳統的統計方法通常要觀察直至材料完全發病為止， 在田間常常需要長達二至三周的時間，而且要每隔3-5天觀察一次，不僅觀察周期長，次數 也多。綜上，傳統的鑒定方法包括耗時長、操作繁瑣、易污染、不嚴謹等眾多問題，尤其是在 鑒定材料量非常龐大的時候更突顯了這些缺點，所以實驗工具與方法都需要優化和改進。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種小麥赤霉病安全快速鑒定方法，以滿足小麥幼苗抗病 害能力的快速鑒定。
[0005] 為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明公開了一種小麥赤霉病安全快 速鑒定方法，鑒定方法的具體步驟如下：
[0006] 禾谷鐮刀菌培養:在25 % PDA培養基環境下培養禾谷鐮刀菌7天，切3毫米見方的帶 有菌絲的PDA塊7-10塊，放入150mL 2 %的綠豆湯培養基，置于搖床以150rpm的速度培養7 天，使其產孢，制作孢子懸浮液，過濾得到孢子，加入無菌水使其濃度達到5xl05個/mL，放4 °C冰箱保存；
[0007] 麥穗離體培養:剪小麥麥穗放入培養盒內（含穗長，長度為23_25cm)，培養盒內注 水，水深4-5cm;每5支麥穗放入一個培養盒內間隔網中；共需培養5天，可根據實際情況在第 三天的時候換水、剪去泡在水中的麥梗部；
[0008] 抗病實驗:使用異形注射器，采用單花滴注法將10微升孢子懸浮液注射在麥穗中 部小穗，將接種的小麥放入培養盒中，恒溫25°C，恒濕90%，24小時后將濕度調低至70%，連 續培養，記錄第五天數據。
[0009] 其中，麥穗離體培養中麥穗培養盒為自制培養盒，麥穗培養盒具有多層結構，包括 了培養盒盒體、培養盒盒蓋、培養室、可調節間隔網、恒溫恒濕組件室、注射器室、溫度-濕度 感應器、透氣孔、控制中心，培養盒盒體與培養盒盒蓋通過鉸鏈連接，培養盒盒體中設置有 培養室、恒溫恒濕組件室和注射器室，恒溫恒濕組件室和注射器室位于培養室下方，溫度-濕度感應器安裝于培養室內，透氣孔和控制中安裝于培養盒盒蓋內側。
[0010] 其中，異形注射器注射針內直徑為0.2mm，前口封閉，設置6-8個注射孔在注射針 壁，分布在針壁1.5cm范圍內，注射孔直徑為0.1mm。
[0011] 其中，鑒定方法還包括有鑒定標準，鑒定標準如下：
[0012] 0級:沒有可見癥狀；
[0013] 1級：1個病小穗；
[0014] 2級:2個病小穗；
[0015] 3級:3個病小穗；
[0016] 4級:大于3個病小穗小于1/4的穗面積；
[0017] 5級:病穗小于1/3的穗面積；
[0018] 6級:小于1/2的穗面積；
[0019] 7級:小于2/3的穗面積，梗部輕微變色；
[0020] 8級:小于3/4的穗面積，局部梗變色；
[0021 ] 9級:大于3/4的穗面積，擴展性梗變色，穗枯死；
[0022] 由所調查的病級計算各品種每次調查的病情指數，具體公式為：
[0023] 病情指數（％ ) = Σ ax/nT X 100，其中：a為發病級數;X為發病穗數;η為發病最高級 數(9) ;Τ為調查樣本數。
[0024]本發明具有以下有益效果：
[0025] 1.本發明通過自制麥穗培養盒，通過離體培養觀察，，杜絕了田間接種可能會對環 境造成的污染;改善了之前田間操作困難的缺點。
[0026] 2.優化了實驗培養步驟及鑒定標準，僅需第五天的數據記錄，相比以往田間接種 經常長達14-21天的記錄周期縮短了鑒定周期，能夠更早確定品種抗病能力。
【附圖說明】
[0027]圖1為本發明中麥穗培養盒結構示意圖。
[0028] 1:培養盒盒體，2:培養盒盒蓋，3:培養室，4:可調節間隔網，5:恒溫恒濕組件室，6: 注射器室，7:溫度-濕度感應器，8:透氣孔，9:控制中心
【具體實施方式】
[0029]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對 本發明進行進一步詳細說明。
[0030] 如圖1所示，本發明公開了一種小麥赤霉病安全快速鑒定方法，鑒定方法的具體步 驟如下：
[0031] 禾谷鐮刀菌培養:在25 % PDA培養基環境下培養禾谷鐮刀菌7天，切3毫米見方的帶 有菌絲的PDA塊7-10塊，放入150mL 2 %的綠豆湯培養基，置于搖床以150rpm的速度培養7 天，使其產孢，制作孢子懸浮液，過濾得到孢子，加入無菌水使其濃度達到5x105個/mL，放4 °C冰箱保存；
[0032] 麥穗離體培養:剪小麥麥穗放入培養盒內（含穗長，長度為23_25cm)，培養盒內注 水，水深4-5cm;每5支麥穗放入一個培養盒內間隔網中；共需培養5天，可根據實際情