一種增強動物免疫力的復合菌劑、制備方法及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及動物養殖領域，特別是指一種增強動物免疫力的混合菌株發酵粉、制 備方法及其應用。
【背景技術】
[0002] 動物的免疫功能是由許多免疫細胞和免疫分子執行的，其免疫細胞與免疫分子的 數量與活性，決定了其免疫力的強弱。免疫物質的數量與活性與飼料成分密切相關。因此想 要提高動物自身免疫功能，必須從飼料的成分抓起。近年來使用的飼料添加劑中，有不少含 有提高動物免疫力的添加劑。飼料添加劑的使用對提高動物的免疫力、提高生長速率等方 面具有極大的促進作用，養殖效益十分顯著。但是目前各國所使用的飼料添加劑多大事化 學合成藥物或激素類物質。用這些添加劑飼喂動物，常常具有各種各樣的毒副作用，使病原 菌產生抗耐藥性，動物產品中有害殘留物增加。人們吃了飼喂這些添加劑的動物產品以后， 導致畸形、癌癥、早衰、兒童早熟等問題的發生率明顯提高，嚴重危害人類的健康。因此，各 國政府都已立法限制化學類飼料添加劑的使用，我國也出臺了多種法令法規。
[0003] 隨著人們對健康的關注程度越來越高，人們對于食品的安排問題越來越重視。除 了要求基本的食品安全之外，健康、綠色也成為更多人的選擇和追求。而動物的免疫力是關 系動物抗病力的關鍵因素。因此如何激發動物自身的免疫系統功能，提高動物的免疫力，是 動物養殖過程中研究的重點。
【發明內容】
[0004] 本發明提出了一種增強動物免疫力的混合菌株發酵粉、制備方法及其應用，能夠 調節動物體內的菌群平衡，增強動物的抵抗力和應激能力。
[0005] 本發明的技術方案是這樣實現的：
[0006] -種復合菌劑，以細胞個數記，包括以下組分:側孢短芽胞桿菌1-10份，產朊假絲 酵母1-10份，地衣芽胞桿菌5-15份，米曲霉5-15份。
[0007] -種增強動物免疫的復合菌劑發酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0008] (1)配制復合菌劑發酵所需的培養基；
[0009] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發酵液，取制得的菌株發酵液，按配方量混合均 勻后，加入到上述混合菌劑發酵培養物中，在溫箱中培養得到復合菌劑發酵液，干燥后即得 混合菌劑發酵粉。
[0010] 進一步，所述步驟（1)中，所述培養基包括以下重量份數的組分，葡萄糖1-10份、蔗 糖1-8份、麩皮2-15份、蛋白胨1-5份、椰子粉3-7份、脫脂大豆粉5-10份，純化水100-400份。
[0011] 進一步，所述發酵培養物中，以細菌總數計，復合菌劑中總菌株濃度為106-108cfu/ mL〇
[0012] 進一步，所述的步驟(2)中，培養條件為，35-40°C，培養45-50小時。
[0013] 進一步，所述步驟(2)中，復合菌劑的干燥方式為噴霧干燥或者冷凍干燥。
[0014] 進一步，在噴霧干燥之前，復合菌劑發酵液中加入多孔淀粉，混合均勻。
[0015] 上述的復合菌劑或者復合菌劑發酵粉在制備增強動物免疫力的制劑上的應用。
[0016] 進一步，所述的動物為家畜。
[0017] 進一步，所述的動物為家禽。
[0018] 本發明中所述的菌株均購自中國工業微生物菌種保藏管理中心，經鑒定分別為側 抱短芽胞桿菌(Brevibacillus laterosporus)，編號為CICC21185;產H元假絲酵母(Candida utilis)，編號為CICC32211;地衣芽胞桿菌(Bacillus licheniformis)，編號為CICC10037; 米曲霉（Aspergillus oryzae)，編號為CICC2195。
[0019] 本發明的有益效果：
[0020] 側孢短芽胞桿菌，為非脊椎動物的病原菌，有研究證實具有殺線蟲的作用。
[0021] 產朊假絲酵母又叫產朊圓酵母或食用圓酵母。其蛋白質和維生素 B的含量都比啤 酒酵母高，它能以尿素和硝酸作為氮源，在培養基中不需要加入任何生長因子即可生長。它 能利用五碳糖和六碳糖，既能同化硝酸鹽，還能利用糖蜜、木材水解液等生產出人畜可食 用的蛋白質。
[0022] 地衣芽胞桿菌能夠調節腸道內微生物之間、微生物與宿主之間處于微生態平衡， 同時參與腸道內物質代謝，增強免疫力和抗應激能力。
[0023] 米曲霉是一類產復合酶的菌株，除產蛋白酶外，還可產淀粉酶、糖化酶、纖維素酶、 植酸酶等，可以分解培養物中的大分子物質，將其降解，以供其他菌株新陳代謝以及繁殖所 需，有利于提高發酵的效率，提高菌粉中有益菌的數量;噴霧干燥之前加入多孔淀粉，可以 保護菌株在干燥過程中的成活率，提高菌粉中菌株的活力。
[0024] 本發明所述的復合菌株及復合菌株發酵粉，通過組合配比，并進行混合發酵，各菌 株之間相互影響，能更充分的利用培養基中的各種營養成分，發酵效率大大提高，添加到動 物飼料中后，可以調節動物腸道的菌群平衡，增強免疫力和應激能力，降低動物的發病率， 調節動物的消化系統功能，大大提高飼料的利用率，日增重顯著增加。
【具體實施方式】
[0025] 下面將結合本發明實施例，對本發明中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然， 所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施 例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于 本發明保護的范圍。
[0026] 實施例1
[0027] 一種復合菌劑，以細菌個數記，包括以下組分:側孢短芽胞桿菌1份，產朊假絲酵母 1份，地衣芽胞桿菌5份，米曲霉5份。
[0028] -種增強動物免疫的復合菌劑發酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0029] (1)取葡萄糖lg、鹿糖lg、麩皮2g、蛋白胨lg、椰子粉3g、脫脂大豆粉5g份混勾，加入 純化水100g，混合均勻，制成復合菌劑發酵所需的培養基；
[0030] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發酵液，取制得的菌株發酵液，混合均勻后，菌 株發酵液混合后，以細菌個數記，包括以下組分:側孢短芽胞桿菌1份，產朊假絲酵母1份，地 衣芽胞桿菌5份，米曲霉5份;加入到上述混合菌劑發酵培養物中；以細菌總數計，發酵培養 物中復合菌劑中總菌株濃度為106cfu/mL。在35°C的溫箱中培養45小時得到復合菌劑發酵 液，加入多孔淀粉，混合均勻，噴霧干燥后即得混合菌劑發酵粉。
[0031] 上述制得的復合菌劑或復合菌劑發酵液可用于制備提高家禽免疫力的制劑
[0032] 實施例2
[0033] -種復合菌劑，以細菌個數記，包括以下組分:側孢短芽胞桿菌10份，產朊假絲酵 母10份，地衣芽胞桿菌15份，米曲霉15份。
[0034] -種增強動物免疫的復合菌劑發酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0035] (1)取葡萄糖10g、鹿糖8g、麩皮15g、蛋白胨5g、椰子粉7g、脫脂大豆粉10g，混勾，加 入純化水400g，混合均勻，制成復合菌劑發酵所需的培養基；
[0036] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發酵液，取制得的菌株發酵液，混合均勻后，菌 株發酵液混合后，以細菌個數記，包括以下組分:側孢短芽胞桿菌10份，產朊假絲酵母10份， 地衣芽胞桿菌15份，米曲霉15份;加入到上述混合菌劑發酵培養物中；以細菌總數計，發酵 培養物中復合菌劑中總菌株濃度為10 8cfu/mL;在40 °C的溫箱中培養50小時得到復合菌劑 發酵液，冷凍干燥后即得混合菌劑發酵粉。
[0037] 上述制得的復合菌劑或復合菌劑發酵液可用于制備提高家畜免疫力的制劑。
[0038] 實施例3
[0039] -種復合菌劑，以細菌個數記，包括以下組分:側孢短芽胞桿菌5份，產朊假絲酵母 5份，地衣芽胞桿菌10份，米曲霉10份。
[0040] -種增強動物免疫的復合菌劑發酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0041] (1)取葡萄糖5g、鹿糖5g、麩皮10g、蛋白胨3g、椰子粉5g、脫脂大豆粉7g，混勾，加入 純化水200g，混合均勻，制成復合菌劑發酵所需的培養基；
[0042] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發酵液，取制得的菌株發酵液，混合均勻后，菌 株發酵液混合后，以細菌個數記，包括以下組分:側孢短芽胞桿菌10份，產朊假絲酵母10份， 地衣芽胞桿菌15份，米曲霉15份;加入到上述混合菌劑發酵培養物中，以細菌總數計，發酵 培養物中復合菌劑中總菌株濃度為10 7cfu/mL;在38°C的溫箱中培養48小時得到復合菌劑 發酵液，加入多孔淀粉，混合均勻，噴霧干燥后即得混合菌劑發酵粉。
[0043]上述制得的復合菌劑或復合菌劑發酵液可用于制備提高家禽或者家畜免疫力的 制劑。
[0044]本發明所述的混合菌劑發酵粉對實驗動物免疫力的影響
[0045] 清潔級昆明種小鼠80只，雌雄各半，體重（20±2)g，隨機分為8組，每組10只。實驗 組按照3個實施例提供的方法制備混合菌劑發酵粉。對照組1的復合菌劑中去掉側孢短芽胞 桿菌;對照組2的復合菌劑中去掉側孢短芽胞桿菌;對照組3的復合菌劑中去掉地衣芽胞桿 菌;對照組4的復合菌劑中去掉米曲霉;其他操作與實施例3相同。以體重為標準，實驗組按 〇 . 〇4g/kg的給藥標準，灌胃給藥；以同等體積量的生理鹽水作為空白對照組，連續灌胃10 天。通過以下指標評價混合菌劑發酵粉對小鼠免疫力的影響。其結果分別見表1-3。
[0046] (1)免疫器官指數:脫頸處死小鼠，取小鼠胸腺和脾臟，稱重后，計算胸腺指數和脾 臟指數。胸腺指數=胸腺重量/體重;脾臟指數=脾臟重量/體重 [0047] (2)免疫功能檢測
[0048]小鼠碳廓清實驗:按100mL/kg體重從小鼠尾靜脈叢注入稀釋4倍的印度墨汁，注入 墨汁后分別在2min、10min時從眼內眥靜脈取血20yL，并加入到0.1%的似2〇)3溶液21^中，在 600nm波長測光密度值(0D)，以0.1 %的Na2C03溶液作為空白對照，計算廓清指數K。
[0049] K=