施例1所制備的20克從三七參中提取的原人參三醇類皂苷(主要含Rgl、Re、Rl 皂苷）中加入30毫升乙醇和270毫升0.02摩爾、pH5.0的檸檬酸緩沖液，攪拌溶解，加入上述 制備的粗酶液300毫升，在45°C攪拌反應48小時，用TLC法檢測，反應液中主要為F1皂苷； c. 提取反應液中皂苷，得到人參稀有皂苷F1: 在反應液中加入1800毫升的乙醇混合，靜止過夜使酶蛋白沉淀，離心分離酶蛋白沉淀， 加入210毫升緩沖液，即成回收酶，如上所述可重復使用。
[0044] 分離酶沉淀得到的酶反應上清液，經預先處理好的700毫升體積的D-280脫色大孔 樹脂脫色，再用1500毫升質量濃度75%的乙醇液洗脫柱內的皂苷、其脫色液減壓濃縮（回收 乙醇），用300毫升水稀釋、經大孔樹脂柱(AB-8或HP-20樹脂）反復吸附皂苷，用4200毫升的 去離子水洗脫柱中的糖類等雜質，然后用3500毫升的質量濃度85%乙醇洗脫皂苷，減壓濃 縮，結晶、干燥，得11克反應產物FI，HPLC檢測，其純度90%以上。
[0045]上述反應中，從人參或者西洋參根或者三七參根提取的人參三醇類皂苷，利用含 有機溶劑(丙醇、丙酮、乙醇或甲醇）的緩沖液(醋酸緩沖液、檸檬酸緩沖液或磷酸緩沖液）， 配制成人參三醇類皂苷(PPT)的底物溶液;底物溶液中緩沖液pH為4.5~6.0，濃度為0.01~ 0.5M，有機溶劑含量為質量濃度5~40%，人參三醇類皂苷(PPT)底物含量為質量濃度0.5~ 8%。其底物溶液粗酶液按照體積比1:0.1~10混合，在35~60 °C反應16~48小時，產物幾乎都 是F1皂苷。加入反應液2~4倍體積的有機溶劑(丙醇、丙酮、乙醇或甲醇），同樣沉淀酶蛋白、 離心收集酶蛋白，溶解在原酶液質量濃度70~80%的pH5的緩沖液(醋酸緩沖液、檸檬酸緩沖 液或磷酸緩沖液)中，酶可重復使用。
[0046]分離酶蛋白的離心上清，經脫色大孔樹脂柱（柱體積，PPT皂苷原料重量的20倍體 積)脫色、減壓濃縮、回收有機溶劑，其濃縮液經大孔樹脂柱(柱體積，PPT皂苷原料重的20倍 體積)反復吸附皂苷，用5~8倍柱體積的去離子水洗脫糖等雜質;再用4~6倍柱體積的質量 濃度80~94%的有機溶劑(丙醇、丙酮、乙醇或甲醇)洗脫皂苷，濃縮、結晶、干燥、同樣得到純 度90%以上的F1稀有皂苷。
[0047] 實施例3: 人參自身皂苷酶復合物制備:取1公斤實施例1所述人參提取皂苷后的渣中加入6升的 去離子水，在55~65°C攪拌2~3小時，離心收集上清，高真空濃縮（品溫65°C以下）至波美度 25(大約500毫升左右），即為人參自身皂苷酶復合物。
[0048] 將所得到的人參自身皂苷酶復合物與實施例1所得到C-K反應，在反應體系中加入 反應體積0.1~50%的甲酸、乙酸或檸檬酸降低pH反應，可制備四種異構體的人參二醇皂苷 J L· 〇
[0049] 具體如下:取20克實施例1的產物C-K皂苷、50克的人參自身皂苷酶復合物、去離子 水350毫升、檸檬酸25克混合，在70~75°C反應2小時。用TLC法檢測，反應徹底后，加入400毫 升水飽和正丁醇萃取皂苷反應物，重復三次，合并正丁醇層，用600毫升的去離子水洗滌正 丁醇3~4次，減壓濃縮（回收正丁醇）、干燥，得到12~14克人參二醇皂苷元。經HPLC檢測，其 苷元是四種異構體組成，具體如圖1及表1所示： 表1四種異構體人參二醇皂苷元的HPLC數據
從圖1中可以看到，所制備的人參二醇皂苷元是由四種異構體組成，經核磁共振法測定 結構，四種異構體為20(S)_人參二醇皂苷元[20(S)-PPD01]、20(R)_人參二醇皂苷元[20 (R)-PPDol]、其20-羥基脫水的20(21) ,24-二烯人參二醇皂苷元[PPD01(-H20_20(21) ,24-diene] 和 20(22) ,24-二烯人參二醇皂苷元 [ΡΗ)ο1(-Η20-20(22) ， 24-diene]; 各皂苷元在總 皂苷元中的含量比32.4:16.7:23.3:27.6，產物中總皂苷元的質量含量為90%以上。
[0050] 上述結果，人參皂苷C-K水溶液和人參自身酶復合物酶(人參根干品原料計算）的 比例(重量)是1:0.1~10倍；甲酸、乙酸或檸檬酸的加量為反應體積的0.1~50%;反應液中 人參皂苷C-K質量濃度為0.1~10%，在60~85°C反應1.5~10小時內，得到同樣的結果;產品 經HPLC檢測，四種異構體人參二醇皂苷元含量為總苷元至質量的90%以上，其中20(S)_人參 二醇皂苷元和20(R)_人參二醇皂苷元在總皂苷元的含量比例為質量20~80%之間。
[0051 ] 實施例4: 人參自身皂苷酶復合物制備同實施例3。
[0052]將所得到的人參自身皂苷酶復合物與實施例2所得到F1反應，在反應體系中加入 反應體積0.1~50%的甲酸、乙酸或檸檬酸降低pH反應，可制備四種異構體的人參三醇苷元。 [0053] 具體方法可如下： 10克的F1皂苷、50克的人參自身皂苷酶復合物、去離子水120毫升、醋酸（乙酸)30毫升 混合，在70~75°C反應2小時；用TLC法檢測，反應徹底后，加入200毫升水飽和正丁醇萃取皂 苷反應物，重復三次，合并正丁醇層，用300毫升的去離子水洗滌正丁醇3~4次，減壓濃縮 (回收正丁醇）、干燥，得到6克人參三醇皂苷元。經HPLC檢測，其苷元是四種異構體組成：如 圖2及表2所示： 表2四種異構體人參三醇皂苷元的HPLC數據
從圖2及表2中可以看到，所制備的人參三醇皂苷元是由四種異構體組成，經核磁共振 法測定結構，四種異構體為20(S)_人參三醇皂苷元[20(S)-PPT01]、20(R)_人參三醇皂苷元 [20(R)-PPT01]、其 20-羥基脫水的 20(21)，24-二烯人參三醇皂苷元[??1'01(-!120-20(21)， 24-diene]和20(22) ,24-二烯人參三醇皂苷元[PPT01(-H20_20(22)，24-diene];各皂苷元 在總皂苷元中的含量比26.5:22.4:14.4:36.7;產物中總皂苷元的質量含量為90%以上。 [0054]上述結果，人參皂苷F1水溶液和人參自身酶復合物(人參根干品原料計算）的比例 (重量)是1 :〇. 1~10倍；甲酸、乙酸或梓檬酸的加量為反應體積的0.1~50%;反應液中人參 皂苷F1質量濃度為0.1~10%，在60~85°C反應1.5~10小時內，得到同樣的結果;既產物中四 種異構體的人參三醇苷元質量含量為90%以上，其中20(S)_人參三醇皂苷元和20(R)_人參 三醇皂苷元在總皂苷元的含量比例是20~80%之間。
[0055] 實施例5: 實施例3所制備的四種異構體人參二醇皂苷元的各皂苷元單體分離:采用常用的市銷 的高效液相制備色譜儀(任何產品均可用）、用C18制備色譜柱、乙腈-水梯度洗脫分離。
[0056] 取10克實施例3所得人參二醇皂苷元，用C18制備色譜柱、乙腈-水梯度洗脫分離， 依次分別得到2.5克的20(S)_人參二醇皂苷元，1.2克的20(R)_人參二醇皂苷元，1.6克的 20-羥基脫水的20(21) ,24-二烯人參二醇皂苷元，1.8克的20-羥基脫水的20(22) ,24-二烯 人參二醇皂苷元;經HPLC檢測，其四種皂苷元純度均為90%以上。
[0057] 如圖3所示：1，20 (S)-人參二醇皂苷元;2，20 (R)-人參二醇皂苷元;3，20-羥基脫水 的20 (21 )，24-二烯人參二醇皂苷元;4、20-羥基脫水的20 (22 )，24-二烯人參二醇皂苷元。
[0058] 實施例6: 實施例4所制備的四種異構體人參三醇皂苷元的各皂苷元單體分離:采用常用的市銷 的高效液相制備色譜儀(任何產品均可用）、用C18制備色譜柱、乙腈-水梯度洗脫分離。
[0059] 取10克的實施例4制備的人參三醇皂苷元，用C18制備色譜柱、乙腈-水梯度洗脫分 離，依次分別得到1.4克的20(S)_人參三醇皂苷元，1.2克的20(R)_人參三醇皂苷元，0.9克 的20-羥基脫水的20(21) ,24-二烯人參三醇皂苷元，2.2克的20(22) ,24-二烯人參三醇皂苷 元;經HPLC檢測，各皂苷元的純度為90%以上。
[0060] 如圖4所示： 1，20(3)-人參三醇皂苷元;2,20(1〇-人參三醇皂苷元;3,20-羥基脫水的20(21)，24-二 烯人參三醇皂苷元;4、20-羥基脫水的20 (22 )，24-二烯人參三醇皂苷元。
[0061] 為了確認實施例所制備的產物分別是人參皂苷C-K和人參二醇皂苷元的四種異構 體，人參皂苷F1和人參三醇皂苷元的四種異構體，用瑞士Bruke AVANCE 600超導核磁共振 波譜儀，探頭為5mm ΒΒ0,溶劑為Pyridine-D5 (氖代吡啶），測定了上述所制備的C-K和人參 二醇皂苷元四種異構體單體，人參皂苷F1和人參三醇皂苷元的四種異構體單體結構:其13C-NMR數據，如表3所示： 表3.人參皂苷C-K和人參二醇皂苷元四種異構體，人參皂苷F1和人參三醇皂苷元四種 異構體13C-NMR數據(ppm)
表3的人參皂苷C-K和人參二醇皂苷元四種異構體，人參皂苷F1和人參三醇皂苷元四種 異構體的測定數據與參考文獻： 1) In Tanaka, 0. and Kasai , R.：Saponins of ginseng and related plants, Progress in the chemistry of organic natural