流壓力： 35psi ;碰撞氣為他，掃描模式為多反應監測(MRM)模式。
[0036]測定得到的20種對照品溶液的優化離子對及其檢測參數見表2.
[0037]表2: 20種對照品溶液的優化離子對及其檢測參數 [00381
[0039]
[0040]
[0041 ] 實施例2
[0042] (1)、取市售瑪卡口服液A30ml，向市售瑪卡口服液A中緩慢滴加甲醇至市售瑪卡口 服液A的體積濃度為80%，離心具體參數，取上清液，減壓濃縮至市售瑪卡口服液A甲醇溶液 體積的5 %。-20 °C冰箱靜置12h 〇
[0043] (2)、采用60mg/3mL的C18固相萃取柱(基質為硅膠-Si (CH3)C18H37，粒徑40-63μπι，孔 徑6〇Α，含碳量11%)進行樣品純化。預先用5ml甲醇和5ml去離子水活化小柱，5ml待分析樣 品以1滴/秒的流速過柱。用l〇ml的去離子水進和體積濃度為95 %的甲醇溶液淋洗。最后用 20ml甲醇洗脫，收集洗脫液A。
[0044] (3)、采用離子交換量為60mg/3mL的季胺（SAX)固相萃取柱(基質為三甲基氨丙基 (-Si (CH2) 3NCI ((?) 3，粒徑40-63μηι，孔徑6〇A，孔體積〇 · 8cm3/g，比表面積480m2/g，離子交 換容量1. lmeq/g)進行純化。預先用5ml的去離子水活化小柱，樣品以lmL/min的流速過柱， 用5mL水和5ml甲醇分別淋洗柱子，收集洗洗脫液B。再用15mL含1 %HC1的甲醇溶液洗脫，收 集洗脫液C。
[0045] (4)、采用60mg/3mL的WCX固相萃取柱(基質為N-乙基吡咯烷酮-二乙烯基苯共聚物 基質-C00H;粒徑:40_63μπι;平均孔徑:70A ;離子交換容量：1.4meq/g)進行純化。用去離子 水活化MCX固相萃取柱，加入上一步洗脫液B，依次加入3mL水和3mL甲醇淋洗，棄去流出液， 最后用3mL含5 %氨水的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液D。
[0046] (5)、合并C和D洗脫液，40°C水浴氮氣吹干，用甲醇溶解定容至2mL，過0.22μπι微孔 濾膜，待上機測定。
[0047]采用實施例1中所述的液質聯用優選條件，通過超高效液相色譜-三重四級桿聯用 方法對樣品Α進行篩查和鑒定。通過比對供試樣品和各對照品的兩離子對的色譜峰保留時 間，請參閱圖1和圖2，發現供試樣品中的460.4/151和460.4/312離子對的保留時間均在 3.81分鐘，與偽伐地那非對照品優化的離子對(表2)保留時間一致，因此判定對照品即判斷 此樣品A為陽性，含有偽伐地那非。
[0048]通過定量離子的所建立的外標曲線，獲得樣品A中偽伐地那非的含量為45.5 土 0 · 32ng/ml。
[0049] 實施例3
[0050] (1)、取市售瑪卡含片B5克，碾細并過80目篩，用甲醇：水= 80:20(v/v)溶液提取 20min，過濾，減壓濃縮。-20 °C冰箱靜置12h 〇
[0051 ]下述步驟與實施例2相同，在此不再贅述。
[0052]通過超高效液相色譜-三重四級桿聯用方法對樣品進行篩查和鑒定。通過比對供 試樣品和各對照品的兩離子對的色譜峰保留時間，請參閱圖1和圖3,未發現與表2列出的任 何離子對保留時間一致，因此判定對照品即判斷此樣品B為陰性，不含有表2所述非法添加 藥物。
[0053]綜上所述，本發明提供的一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法， 為:步驟一、待測樣品依次經粉碎、醇提后過濾，收集上清液，所述上清液減壓濃縮后，第一 次靜置，得第一產物;步驟二、向所述第一產物中滴加醇溶液，離心取上清液，減壓濃縮，第 二次靜置，得第二產物;步驟三、所述第二產物經C 18固相萃取柱純化，收集洗脫液A;步驟四、 所述洗脫液A經季胺固相萃取柱純化后，先用去離子水和甲醇沖洗，收集洗脫液B;繼續用含 1%HC1的甲醇溶液沖洗，收集洗脫液C;步驟五、所述洗脫液B經羧酸固相萃取柱純化，先用 去離子水和甲醇淋洗，棄去流出液;繼續用5 %的氨水甲醇溶液沖洗，收集洗脫液D;步驟六、 合并所述洗脫液C和所述洗脫液D，水浴氮氣吹干，甲醇定容后，微孔濾膜過濾，得待測品。步 驟七、待測品通過高效液相色譜-三重四級桿方法進行定性檢測和/或定量檢測。從本方案 可以清楚的得出，本發明提供的檢測方法，可以有效地解決現有技術中，并未能對于改善陽 虛和/或緩解疲勞類化學物質進行多指標完整的檢測的問題。同時，本發明提供的檢測方 法，還可以解決現有技術中且成本高、檢測時間長以及工作效率低的缺點。
[0054]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人 員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應 視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法 為： 步驟一、待測樣品經Cl姻相萃取柱純化，收集洗脫液A; 步驟二、所述洗脫液A經季胺固相萃取柱純化后，先用去離子水和甲醇沖洗，收集洗脫 液B;繼續用含1 %肥1的甲醇溶液沖洗，收集洗脫液C; 步驟=、所述洗脫液B經簇酸固相萃取柱純化，先用去離子水和甲醇淋洗，棄去流出液； 繼續用5 %的氨水甲醇溶液沖洗，收集洗脫液D; 步驟四、合并所述洗脫液C和所述洗脫液D，水浴氮氣吹干，甲醇定容后，微孔濾膜過濾， 得待測品。 步驟五、所述待測品通過高效液相色譜重四級桿方法進行定性檢測和/或定量檢 測。2. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述Cis固相萃取柱的基質為硅膠-Si (C也)Cl祖37,所述Cl姻相萃取柱的粒徑為40-63皿，所述Cl姻相萃取柱的孔徑為械A，所述 Cis固相萃取柱的含碳量11 %。3. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述季胺固相萃取柱的基質為鍵合有 S甲基氨丙基的高純硅膠，所述季胺固相萃取柱的粒徑為40~63nm，所述季胺固相萃取柱 的孔徑為60A，所述季胺固相萃取柱的孔體積為0.ScmVg,所述季胺固相萃取柱的比表面 積為480mVg，所述季胺固相萃取柱的離子交換容量為1. Imeq/g。4. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述簇酸固相萃取柱的基質為N-乙基 化咯燒酬-二乙締基苯共聚物，所述簇酸固相萃取柱粒徑為40~63WH，所述簇酸固相萃取柱 的平均孔徑為70A，所述簇酸固相萃取柱的離子交換容量為1.4meq/g。5. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述水浴溫度為40°C，所述微孔濾膜 為0.22曲!微孔濾膜。6. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述定性檢測和/或定量檢測的對照 品為O.lmg/ml的偽伐地那非、徑基豪莫西地那非、豪莫西地那非、硫代艾地那非、那紅地那 非、那莫西地那非、鹽酸育亨賓、氨基他達拉非、紅地那非、西地那非、伐地那非、他達那非、 琉基西地那非、去乙基伐地那非、N-去甲基西地那非、二甲基西地那非、格列齊特、二乙氨基 他達拉非、徑基伐地那非和甲橫酸酪妥拉明的甲醇溶液中的一種或多種。7. 根據權利要求1所述的檢測方法。其特征在于，所述待測品的定性檢測和/或定量檢 測采用梯度洗脫方法，所述梯度洗脫的流動相為體積濃度0.1 %的甲酸水溶液和體積濃度 0.1 %的甲酸乙臘溶液的中的一種或二者的混合溶液； 進樣0~5min時，流動相1的配比為90 %所述甲酸水溶液和10 %所述甲酸乙臘溶液的混 合溶液； 進樣5~7.5min時，流動相2為所述乙酸乙臘溶液； 進樣7.5min后，流動相3的配比為90 %所述甲酸水溶液和10 %所述甲酸乙臘溶液的混 合溶液。8. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述待測品的定性檢測和/或定量檢 測采用電噴霧離子源，正離子模式進行檢測； 電噴霧電壓為5.5KV，離子源溫度為550°C;脫溶劑氣為化，所述脫溶劑氣的氣流壓力為 50psi;錐孔反吹氣為化，所述錐孔反吹氣的氣流壓力為35psi;碰撞氣為化;掃描模式為多反 應監測模式。9. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括預處理步驟，所 述預處理在步驟一前進行： 所述預處理的方法為:待測樣品依次經粉碎、醇提后過濾，收集上清液，所述上清液減 壓濃縮后，靜置，靜置產物中滴加醇溶液，離屯、取上清液，減壓濃縮，靜置即得。10. -種包括權利要求1至9任意一項所述的檢測方法在改善陽虛和/或緩解疲勞類化 學物質的定性檢測和/或定量檢測中的應用。
【專利摘要】本發明屬于食品、藥品或保健品分析領域，尤其涉及一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法。本發明提供的一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法：待測樣品經預處理后。依次經過C18固相萃取柱純化、季胺固相萃取柱純化和羧酸固相萃取柱純化，合并洗脫液后，水浴氮氣吹干，甲醇定容后，微孔濾膜過濾，得待測品，待測品通過高效液相色譜-三重四級桿方法進行定性檢測和/或定量檢測。本發明還提供了一種根據上述檢測方法在改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的定性檢測和/或定量檢測中的應用。
【IPC分類】G01N30/02, G01N30/06
【公開號】CN105651884
【申請號】
【發明人】高新開, 熊斌, 曹子豐
【申請人】無限極（中國）有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年12月31日