處理締丙基氯(0.59mo 1 e)的叔 戊醇（120mL)和石油酸（370mL)溶液，隨后使用乙醇鋼的乙醇溶液（345mL，0.60mo 1 e)處理。 當反應混合物冷卻至室溫時，通過真空過濾除去固體并對濾液減壓濃縮。將殘留液體裝載 在硅膠柱（307. lOg)上并使用己燒-乙酸乙醋（19:1 ;9:1)洗脫。合并適當組分，隨后減壓濃 縮W得到淡黃色液體狀的4-漠-2-下締臘(47.14g)。
[0057] (B)在約14分鐘內向約40°C下攬拌的甲燒亞橫酸鋼的含水(4mL)乙醇（120mL)的等 摩爾溶液中逐滴加入來自部分(A)的產物（150mmo 1)。持續加熱并攬拌6小時后，對反應混合 物進行減壓濃縮。對深色殘留糖漿(syrup)使用丙酬稀釋，隨后真空過濾W除去漠化鋼。將 濾液濃縮為深棟色糖漿，將其裝載在硅膠柱(約255g)上，使用氯仿-乙醇（19:1)洗脫。合并 適當組分，隨后減壓濃縮W生成淺班巧色液體（16.08g)。將該液體（10.48g)裝載在硅膠柱 (約310g)上，使用氯仿-乙醇-己燒(66:4:30)洗脫。合并適當組分，隨后減壓濃縮W生成淺 班巧色液體，將該液體溶解在丙酬中并通過0.45WI1注射器濾器W除去細小顆粒。濃縮澄清 的濾液W生成預期產物(9.71g)。由光譜數據服務公司（Spectral Data Services，Inc.)在 400MHz和DMSO-ds溶液中獲取4-甲基橫酷基-2-下締臘的1h醒R譜。表1顯示醒R結果的化學 位移數據(ppm)。
[0化引
[0059] Η NMR:S3.0-3.2(d，3H)，4.1-4.3(dd，2H)，[6.08(dm，J~16Hz)+6.12(d，J~7Hz)， IH] ,6.64-6.92(血，IH).
[0060] 4-甲基橫酷基-2-下締臘的結構包含7個質子。所有質子都具有或存在合理的化學 位移。甲基和亞甲基質子的化學位移分配是明確的。6ppm和6.化pm之間的兩組多重線可通 過其偶聯常數(J)區分。J~16化與E-構型中締控質子的預期偶聯常數一致，而J~imz與Z- 構型中締控質子的預期偶聯常數一致。基于運些信號的RIV值的比較，E/Z比例為約58/42。 由于6.6ppm和7ppm之間信號的復雜性，無法精確測量剩余締控質子的偶聯常數。該譜含有 一些雜質/溶劑峰(RIV總3.75)。
[0061] 實施例2.凝膠制劑1
[0062] 表2例示了一種含有4-甲基橫酷基-2-下締臘的凝膠制劑。
[0063] 表 2
[0064]
[0065] 實施例3.小鼠中局部施用的活性化合物的抗炎活性
[0066] 該實驗中使用由實施例1制備的4-甲基橫酷基-2-下締臘。
[0067] 評價試驗化合物、嗎I噪美辛（陽性對照)及載劑在小鼠的局部花生四締酸誘導的耳 朵腫脹模型中的抗炎活性。
[006引使用體重22±2g的雄性ICR小鼠并隨機分組;試驗化合物及載劑對照具有10只小 鼠，且嗎I噪美辛具有5只小鼠。將花生四締酸(20μ1丙酬：乙醇/1:1中0.5mg)局部施用到每只 小鼠右耳的前和后表面。在花生四締酸施用前30分鐘及施用后15分鐘，類似地施用表2中所 列的試驗物質及載劑。測量右耳及左耳的厚度且所計算的差異表明右耳炎癥。在花生四締 酸施用后60分鐘及90分鐘時，利用Dyer型號測微規測量耳腫脹，作為炎癥指標。根據下式計 算抑制百分比：Ic-lVlc X 100,其中Ic及It分別指對照及經治療小鼠的耳朵厚度(mm)的 增加。使用AN0VA和頓式t檢驗(Dunnett's t test)來確定載劑對照與治療組之間的顯著差 異。顯著性定為P<0.05水平。表3總結了施用花生四締酸后90分鐘時測量的結果。
[0069] 表3
[0070]
[0071] 相對于載劑治療組，試驗的化合物導致由花生四締酸引起的耳朵腫脹被抑制了 22%。經治療的小鼠與載劑治療的小鼠之間的差異被認為在統計學上顯著（t檢驗得到p值 為0.002)。
[0072] 實施例4.小鼠中通過口服施用的活性化合物的抗炎活性(預示性實施例）
[0073] 將活性化合物4-甲基橫酷基-2-下締臘溶解在載劑(DMS0)中至5-15mg/ml。向小鼠 經口服給予試驗化合物、地塞米松（陽性對照)和載劑并評估其在小鼠中局部花生四締酸誘 導的耳朵腫脹模型中的抗炎活性。
[0074] 該實驗中使用雄性ICR小鼠。各組(活性化合物、陽性對照和載劑)使用10只小鼠。 所有動物都維持在受控的溫度(22-24 °C)和濕度(60%-70%)環境和12小時光/暗循環下， 在使用前持續至少一周。
[0075] 將花生四締酸（2化1丙酬中0.5mg)局部施用到測試動物右耳的前和后表面。在花 生四締酸施用前30分鐘及施用后15分鐘，類似地施用表1中所列的試驗物質（在載劑中）及 載劑。在花生四締酸前1小時經口管飼給予含試驗化合物的載劑（lOmL/kg)和載劑（lOmL/ kg，50-150mg/kg)，而在花生四締酸攻擊前3小時經口管飼給予地塞米松。在花生四締酸誘 導耳腫脹后60分鐘和90分鐘時，測量右耳及左耳的厚度且所計算的差異表明右耳炎癥。顯 著的活性定義為:相對于載劑治療組，花生四締酸誘導的耳腫脹中統計學顯著的抑制(通過 t檢驗測得P值小于0.05)。
[0076] 實施例5.小鼠中通過口服給藥的活性化合物的鎮痛活性(福爾馬林模型，預示性 實施例）
[0077] 福爾馬林試驗為由福爾馬林誘導的組織損傷引起的持續疼痛的模型。傷害性及炎 癥性疼痛是通過將福爾馬林稀溶液注射入爪內誘導的，導致包括爪退縮的傷害防御行為。 福爾馬林模型包括疼痛的炎性、神經性及中樞機理。疼痛的早期(0至約10分鐘)是因為傷害 性機理而疼痛的晚期（10-40分鐘）是因為炎性疼痛和傷害性機理的組合。利用手動祿動測 量值評價疼痛行為。研究終點為祿動事件的次數。化unskaar等，Pain, 30:103-114,1987; Li 等，Mole州lar Pain,6:11,2010)
[0078] 研究中每組使用10只小鼠。在測試前(時間0)，將小鼠限制在布中并向左后爪的背 側面皮下注射20化5%福爾馬林溶液。經口管飼W5mL/kg的體積向小鼠給予載劑對照 (DMS0)和試驗化合物4-甲基橫酷基-2-下締臘(在DMS0中）。試驗化合物的量為每劑量100或 500mg/kg。
[0079] W8mg/kg通過皮下注射向小鼠給予含陽性對照嗎啡的鹽水，之后立即注射福爾馬 林并在時間零處測試。
[0080] 福爾馬林注射后，將動物放入各自籠中，W人工方式觀察60分鐘。W五分鐘的間隔 記錄祿動事件，總共持續60分鐘。
[0081] W5分鐘時間間隔繪制載劑對照、嗎啡治療及試驗化合物治療的小鼠的福爾馬林 注射后的不同時間點的祿動事件的次數。
[0082] 計算載劑、陽性對照及試驗化合物在0-10分鐘與10-40分鐘之間的每分鐘祿動事 件次數。每分鐘祿動事件的統計學顯著的降低表示該試驗化合物可有效地治療急性傷害性 疼痛(早期)或炎性傷害性疼痛(晚期）。
[0083] 實施例6.小鼠中通過局部給藥的活性化合物的鎮痛活性(福爾馬林模型，預示性 實施例）
[0084] 動物及治療方案與實施例5中所述的那些類似，不同之處如下。
[0085] 通過將小鼠左后爪浸在各自溶液中約30秒來局部給予試驗化合物4-甲基橫酷基- 2-下締臘(載劑中375mM，n = 10)及載劑對照(丙酬：乙醇l:l，n=10)。然后，收回爪并利用紙 巾擦拭W避免過度皮膚干燥。
[0086] W鹽水中8mg/kg通過皮下注射向小鼠給予陽性對照嗎啡(n = 10)。
[0087] 在福爾馬林注射前15分鐘時，皮下給予嗎啡一次。在福爾馬林注射前60分鐘時，兩 次局部給予(BID)試驗化合物和載劑對照。
[0088] 福爾馬林注射后，將動物放入各自籠中，W人工的方式觀察60分鐘。W5分鐘間隔 記錄祿動事件，總共持續40分鐘。
[0089] 測定載劑對照、嗎啡治療及試驗化合物治療的小鼠在福爾馬林注射后的不同時間 點的祿動事件次數。
[0090] 計算載劑、陽性對照及試驗化合物在0-10分鐘與10-40分鐘之間的每分鐘祿動事 件次數。進行雙樣品t檢驗W比較載劑組與試驗化合物組。顯著性定為P<0.05。
[0091] 實施例7.慢性縮窄性損傷模型中活性化合物的鎮痛活性(預示性實施例）
[0092] 外周神經病變可產生綜合征，其除了自發性疼痛外還包括對輕微接觸的過度應答 (觸覺異常性疼痛）。慢性縮窄性損傷為一種神經性疼痛模型。
[