專利名稱：蛹蟲草的培養及其口服片劑的制備的制作方法
技術領域：
在本發明涉及一種蛹蟲草培養基及其制備方法、蛹蟲草的培養方法和蛹蟲草口服片劑的制備。
背景技術：
蛹蟲草是以蠶蛹為宿主的真菌，與冬蟲夏草同科同屬，化學成分基本一致，其抗腫瘤成分蟲草素含量高于冬蟲夏草，且是衛生部批準的新資源食品，具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎癥、延緩衰老、提高免疫力等多種功效，適用人群廣泛。然而，目前，人工培養的天然蛹蟲草產量有限，其營養成分含量低，質量參差不齊且價格昂貴，無法滿足人們的需要。
發明內容
為了解決上述技術問題，本發明提供了一種蛹蟲草培養基及其制備方法、蛹蟲草的培養方法及蛹蟲草片劑的制備方法。本發明提供的蛹蟲草培養基為水溶液，由如下濃度的成分構成 干蠶蛹粉13(Tl40 g/L ；
大米粉6(T65 g/L ；
磷酸二氫鉀1. 2 1. 5 g/L ；
磷酸二氫鈉0. 8 1. 2 g/L。優選地，上述的蛹蟲草培養基，由如下濃度的成分構成 干蠶蛹粉140 g/L ；
大米粉60 g/L ；
磷酸二氫鉀1. 2 g/L ；
磷酸二氫鈉1. 2 g/L。本發明提供的上述的蛹蟲草培養基的制備方法，步驟如下
以純凈水將KH2P04、NaH2PO4溶解、并充分混勻后再加入干蠶蛹粉、大米粉混合均勻，裝入培養瓶，密封，滅菌，冷卻。優選地，上述滅菌的條件為121°C，1. IMpa滅菌3(T45 min。本發明提供應用上述的蛹蟲草培養基培養蛹蟲草的方法，包括如下步驟
1)接種在超凈臺中向裝有所述蛹蟲草培養基的培養瓶中接種蛹蟲草菌種，在溫度 220C、濕度75 85%條件下避光培養3 5天，至蛹蟲草菌絲長滿所述蛹蟲草培養基表面；
2)第5 20天采用的光照培養白天12小時日光燈光照，溫度2(T22°C、濕度80 85%，光照強度控制在100 150Lx ；晚上12小時閉光，溫度18 20°C、濕度75 85% ；每天通風2次，早晚各一次，每次20 30分鐘；
3)第20 35天采用的光照培養白天12小時自然光加日光燈光照，溫度2(T22°C、 濕度75% 85%，總光照強度控制在1000 1200 Lx ；晚上12小時閉光，溫度18 20°C、濕度 75 85% ；每天通風2次，早晚各一次，每次20 30分鐘；4)收獲及再培養步驟3)光照培養后，將所述培養瓶中成熟的蛹蟲草子實體取出，剩余部分按照步驟3)的方法繼續培養至子實體成熟。優選地，步驟1)中所述蛹蟲草菌種為蛹蟲草液體菌種，其密度為3-5個菌球/mL， 所述蛹蟲草培養基與所述蛹蟲草液體菌種的體積比為50:1。優選地，步驟2)和3)中的日光燈光照采用散射光，光照同時旋轉培養瓶以保證光照均勻。本發明提供應用上述方法培養得到的蛹蟲草子實體制備片劑的方法，步驟如下
1)烘干將收獲的蛹蟲草子實體置于墊有紗布的不銹鋼盤中，均勻鋪開，3(T37°C熱風循環烘干待用，其水分含量控制在10%以下；
2)多重冷滅菌處理步驟1)烘干后的取出蛹蟲草子實體置于紫外滅菌柜中照射 2(T40min ；
3)粉碎取步驟2)滅菌后的蛹蟲草子實體，放入超微破碎機中，超微粉碎，得到蛹蟲草
粉；
4)濕法制粒
a.取蛹蟲草粉，以噴霧的形式加入食用酒精使其均勻的與蛹蟲草粉接觸，同時不斷攪拌，使蛹蟲草粉聚合成團，形成大小一致的顆粒；
b.將步驟a得到的顆粒倒入濕法制粒機中，選擇80目的篩網搖擺制粒；
c.步驟b得到的蛹蟲草顆粒，輕微振蕩使其均勻單層鋪開放入烘箱中30-37°C繼續烘干，除去顆粒中殘留的酒精；
5)壓片將步驟4)制備好的蛹蟲草顆粒加入壓片機中進行壓片，壓力控制在60kN，轉速3、rpm/min，片劑形狀為圓形，大小可根據需求調整。優選地，步驟3)的超微粉碎過程中用壙10°C的水作為冷卻液。優選地，步驟4)中蛹蟲草粉與食用酒精的比例按4 g: 1 mL飛g: 1 mL。本發明以繅絲后的蠶蛹為主要原料，大米為輔料所培養的蛹蟲草可收獲兩季，每瓶每次可獲1 g干重的蛹蟲草，其營養成分遠高于采用其他方法培養的蟲草中的成分，且顏色金黃有光澤，香氣四溢，腺苷含量> 1%。、蟲草素含量> 6%。均高于天然的冬蟲夏草；收獲烘干后進行多重冷滅菌處理，采用低溫超微粉碎保證蛹蟲草孢子的破壁效果同時降低營養成分的損失，加入酒精制粒流動性佳且易去除，保持蛹蟲草本身的特性，烘干除去酒精成分，實現100%純蛹蟲草顆粒無添加劑壓片，創造蛹蟲草口內含服、粘膜吸收的新方式，確保其精華成分的最大化吸收，使其能直接進入人體循環，充分發揮對局部及全身的雙重呵護作用。本發明培養的蛹蟲草營養豐富，質量可控，料損少成本低，產品易于保存，服用方便，市場潛力巨大。
圖1為采用普通破碎方法破碎蛹蟲草后的掃描電鏡圖片； 圖2為超微低溫粉碎后的圖片。
具體實施方式
下面結合附圖和具體實施例對本發明作進一步說明，以使本領域的技術人員可以更好的理解本發明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發明的限定。一、 蛹蟲草培養基的配制
本發明的蛹蟲草培養基為水溶液，由如下濃度的成分構成 優選地具體制備方法如下
取如下重量的成分干蠶蛹粉2. 1 kg，大米粉900 g，磷酸二氫鉀18 g，磷酸二氫鈉18
加純凈水12 L先把KH2P04、NaH2PCM先溶解、并充分混勻后再加入干蠶蛹粉、大米粉混合均勻，得到體積為15L的培養基溶液，勻漿，分裝入培養瓶，每瓶裝50 ml，蓋好蓋子， 121°C，1. IMpa滅菌30 40min，待其自然冷凝后備用。二、蛹蟲草的培養
1、在超凈臺中接種蟲草菌體(菌種為Cordyc印S militaris(L) Link)，液體菌種，密度控制在3-5個菌球/mL，每培養瓶1 mL，在溫度22°C、濕度75 85%條件下避光培養3 5 天，使蟲草菌絲迅速長滿培養基表面，防止其他雜菌在培養基表面生長。2、第5 20天光照培養，白天12小時日光燈光照，溫度2(T22°C(最好為22°C )、濕度80 85%，光照強度控制在100 150Lx ；晚上12小時閉光，溫度18 20°C (最好18°C)、 濕度75 85%。每天通風2次，早晚各一次，氣溫相對低的時候進行每次20 30分鐘。白天晚上溫差有利于原基的分化形成。3、第20 35天白天12小時光照(自然光加日光燈)，溫度20 22°C(最好為22°C )、 濕度75% 85%，光照強度控制在1000 1200Lx ；晚上12小時閉光，溫度18 20°C (最好為 18°C )、濕度75 85%。此時間為子實體生長時期，強光對子實體的生長有利，使其呈棒狀生長并不斷成熟、健壯、色澤變為鮮艷的橙黃色，在此生長階段每天通風2次，早晚各一次，氣溫相對低的時候進行每次20 30分鐘。4、收獲及再培養，旋開培養瓶蓋，鑷子用75%酒精消毒后，將子實體取出(只取出培養基上面的部分)，將取出的子實體置于干凈的不銹鋼盤中，挑選色澤均勻、粗壯、完整的子實體，去除殘存的培養基后置于新的不銹鋼盤中稱重備用；培養瓶中剩余部分按第 20^35天的培養條件及方法繼續培養，再次收獲。培養中的注意事項
A、光照時要用散射光，而不能用直射光，蟲草的生長有向光性，對光照均勻的地方的瓶子要進行轉瓶，使其光照均勻，子實體向上生長。B、在培養過程中要嚴格控制溫度和濕度，所以要嚴格控制好溫度。在目前車間沒控制溫度設備的情況下，要用地面灑水來控制培養室的溫度，一般一天灑水3次，但也要根據當天的氣溫情況來變，溫度高要多灑，培養室溫度超過25°C，要開空調降溫。C、每天培養室要通風換氣一到兩次，時間選擇在早上和傍晚溫度相對低的時候， 每次20 30分鐘。
干蠶蛹粉大米粉
磷酸二氫鉀磷酸二氫鈉
130^140 g/L ； 60 65 g/L ； 1. 2 1. 5 g/L ； 0. 8 1. 2 g/L。
D、接種后污染的瓶子要及時的拿出，把里面的培養基倒出重新滅菌后重新接種， 不能讓污染的瓶子放在培養室里培養，而造成整個培養室受雜菌的污染。本方法以繅絲后的蠶蛹為主要原料，大米為輔料所培養的蛹蟲草可收獲兩季，每瓶每次可獲1 g干重的蛹蟲草，其營養成分遠高于采用其他方法培養的蟲草中的成分，且顏色金黃有光澤，香氣四溢，腺苷及蟲草素含量高于天然的冬蟲夏草。三、蛹蟲草口服片劑的制備 1、烘干
將培養得到的蛹蟲草子實體置于墊有紗布的不銹鋼盤中，均勻鋪開，37°C熱風循環烘干待用，其水分含量控制在10%以下。2、多重冷滅菌處理
烘干后的取出蛹蟲草子實體置于紫外滅菌柜中照射30min，再轉移至超微粉碎機中，通過低溫機械加工的方法進行滅菌，詳見下一粉碎步驟； 3、粉碎
每次稱取200 g烘干的蛹蟲草子實體，放入超微破碎機中，超微粉碎6 min，破碎全過程用Γ Ο 的水作為冷卻液，確保有效成分的釋放和生物活性的穩定，粉碎后取樣檢測微生物指標并用掃描電鏡檢測破碎效果。結果見圖1和2，可以明顯看出，超微粉碎后的蛹蟲草孢子徹底破碎，營養成分得到了有效的釋放。4、濕法制粒
a.取適量蛹蟲草粉按4g:l mL飛g:l mL (優選5:1 (m/v))量取食用酒精，以噴霧的形式緩慢加入使其均勻的與用蟲草粉接觸，同時不斷攪拌，使蟲草粉聚合成團，形成大小一致的顆粒，達到“握成團，捏即散”的效果；
b.即刻將混合好的半成品倒入濕法制粒機中，選擇80目的篩網搖擺制粒；
c.用消毒后的不銹鋼盤收集蟲草顆粒，輕微振蕩使其均勻單層鋪開，防止結塊，之后放入烘箱中37°C繼續烘干30 min，除去顆粒中殘留的酒精；
5、壓片
將制備好的蛹蟲草顆粒加入壓片機中進行壓片，壓力控制在60 kN，轉速;Γ5 rpm/min, 片劑形狀為圓形，大小可根據需求調整。6、保存
避光、干燥、室溫保存M個月。四、檢測
對上述制備的蛹蟲草片劑的性狀及質量進行檢測，結果如下 感官指標
權利要求
1.一種蛹蟲草培養基，其特征在于，所述蛹蟲草培養基為水溶液，由如下濃度的成分構成干蠶蛹粉13(Tl40 g/L ；大米粉6(T65 g/L ；磷酸二氫鉀1. 2 1. 5 g/L ；磷酸二氫鈉0. 8 1. 2 g/L。
2.根據權利要求1所述的蛹蟲草培養基，其特征在于，由如下濃度的成分構成干蠶蛹粉140 g/L ；大米粉60 g/L ；磷酸二氫鉀1. 2 g/L ；磷酸二氫鈉1. 2 g/L。
3.權利要求1所述的蛹蟲草培養基的制備方法，其特征在于，步驟如下以純凈水將KH2P04、NaH2PO4溶解、并充分混勻后再加入干蠶蛹粉、大米粉混合均勻，裝入培養瓶，密封，滅菌，冷卻。
4.根據權利要求1所述的蛹蟲草培養基的制備方法，其特征在于，所述滅菌的條件為 121°C，1. IMpa 滅菌 30 45 min。
5.權利要求1所述的蛹蟲草培養基培養蛹蟲草的方法，其特征在于，包括如下步驟1)接種在超凈臺中向裝有所述蛹蟲草培養基的培養瓶中接種蛹蟲草菌種，在溫度 220C、濕度75 85%條件下避光培養3 5天，至蛹蟲草菌絲長滿所述蛹蟲草培養基表面；2)第5 20天采用的光照培養白天12小時日光燈光照，溫度2(T22°C、濕度80 85%，光照強度控制在100 150Lx ；晚上12小時閉光，溫度18 20°C、濕度75 85% ；每天通風2次，早晚各一次，每次20 30分鐘；3)第20 35天采用的光照培養白天12小時自然光加日光燈光照，溫度2(T22°C、 濕度75% 85%，總光照強度控制在1000 1200 Lx ；晚上12小時閉光，溫度18 20°C、濕度 75 85% ；每天通風2次，早晚各一次，每次20 30分鐘；4)收獲及再培養步驟3)光照培養后，將所述培養瓶中成熟的蛹蟲草子實體取出，剩余部分按照步驟3)的方法繼續培養至子實體成熟。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述蛹蟲草菌種為蛹蟲草液體菌種，其密度為3-5個菌球/mL，所述蛹蟲草培養基與所述蛹蟲草液體菌種的體積比為 50:1。
7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)和3)中的日光燈光照采用散射光，光照同時旋轉培養瓶以保證光照均勻。
8.權利要求5 7任一項所述的方法培養得到的蛹蟲草子實體制備口服片劑的方法，其特征在于，步驟如下1)烘干將收獲的蛹蟲草子實體置于墊有紗布的不銹鋼盤中，均勻鋪開，3(T37°C熱風循環烘干待用，其水分含量控制在10%以下；2)多重冷滅菌處理步驟1)烘干后的取出蛹蟲草子實體置于紫外滅菌柜中照射 2(T40min ；3)粉碎取步驟2)滅菌后的蛹蟲草子實體，放入超微破碎機中，超微粉碎，得到蛹蟲草粉；4)濕法制粒a.取蛹蟲草粉，以噴霧的形式加入食用酒精使其均勻的與蛹蟲草粉接觸，同時不斷攪拌，使蛹蟲草粉聚合成團，形成大小一致的顆粒；b.將步驟a得到的顆粒倒入濕法制粒機中，選擇80目的篩網搖擺制粒；c.步驟b得到的蛹蟲草顆粒，輕微振蕩使其均勻單層鋪開放入烘箱中3(T37°C繼續烘干，除去顆粒中殘留的酒精；5)壓片將步驟4)制備好的蛹蟲草顆粒加入壓片機中進行壓片，壓力控制在60kN，轉速 3 5 rpm/min。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟3)的超微粉碎過程中用Γ Ο 的水作為冷卻液。
10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟4)中蛹蟲草粉與食用酒精的比例按 4 g:1 mL 5 g:1 mLo
全文摘要
本發明公開了一種蛹蟲草培養基及其制備、蛹蟲草的培養方法及蛹蟲草口服片劑的制備方法。蛹蟲草培養基為水溶液，由如下濃度的成分構成干蠶蛹粉130~140g/L；大米粉60~65g/L；磷酸二氫鉀1.2~1.5g/L；磷酸二氫鈉 0.8~1.2g/L。蛹蟲草的培養方法包括接種、培養和收獲再培養等步驟。蛹蟲草片劑的制備步驟為烘干、多重冷滅菌處理、粉碎、濕法制粒和壓片。本發明的蛹蟲草培養基培養得到的蛹蟲草營養成分遠高于采用其他方法培養的蛹蟲草中的成分，且顏色金黃有光澤，香氣四溢；片劑制備烘干后進行多重冷滅菌處理，采用低溫超微粉碎保證蛹蟲草孢子的破壁效果同時降低營養成分的損失。
文檔編號C05G1/00GK102515920SQ20111043757
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月23日 優先權日2011年12月23日
發明者葉曼, 張耀洲, 舒特俊, 陳劍清, 陳昊 申請人:正源堂(天津)生物科技有限公司