一種利用豆渣栽培蛹蟲草的方法及其培養基的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種利用豆渣栽培蛹蟲草的方法及其培養基。實驗證明，將蛹蟲草在含有豆渣的蛹蟲草栽培培養基中培養，當培養基質中豆渣的含量為10%-66%時，蛹蟲草成熟子實體的產量可達到甚至超過對照（以常用的大米或小麥培養基進行培養）的產量；當培養基質全部為豆渣時，蛹蟲草成熟子實體的產量為對照（以大米培養基進行培養）的39%。本發明為蛹蟲草的栽培提供了一個新的可行的培養方法，同時為豆渣利用提供了一個新的途徑，具有廣闊的應用前景。
【專利說明】一種利用豆渣栽培蛹蟲草的方法及其培養基
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種利用豆渣栽培蛹蟲草的方法及其培養基。
【背景技術】
[0002]蛹蟲草[Cordyceps militaris (L.) Link]又稱北蟲草、北冬蟲夏草,是真菌寄生于鱗翅目等昆蟲的蟲體上形成的蟲菌復合體，是一種具有滋補作用的中藥和營養品。蛹蟲草在生物分類上隸屬于子囊菌門(Ascomycota)、子囊菌綱(Ascomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、蟲草菌科(Cordicipitaceae)、蟲草屬[Cordyceps (Fr.) Link]，與冬蟲夏草同屬異種，其藥用價值與冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)相似。《新華本草綱要》稱,蛹蟲草“全草:味甘，性平。有益肺腎，補精髓，止血化痰的功能”，現代研究也證實了蛹蟲草的多種藥理功效，其特有的蟲草素復合Pentostatin作為治療白血病的藥物已經在美國進入二其月臨床試驗(http: //clinicaltrials.gov/show/NCT00709215)。當前,它已經在東亞地區被廣泛作為滋補品及藥用菌使用，我國衛生部于2009年3月16日正式將其列為了新資源食品(中華人民共和國衛生部公告2009年第3號http://www.moh.gov, cn/publicfiles/business/htmlfiles/zwgkzt/pgg/200903/39591.htm)。
[0003]蛹蟲草是目前蟲草屬中幾個可以利用的種類之一，也是目前唯一能夠進行大規模產業化生產的種類。然而在蛹蟲草的人工栽培中，所用培養基基質的主要原料是大米、小麥、小米、玉米等糧食，大量消耗糧食已經成為蛹蟲草規模化栽培的一個明顯弊端。
[0004]我國是一個大豆生產大國和消費大國，年處理大豆2500萬噸左右，其中1400萬噸左右為制油，而1000萬噸左右用于制作豆制品或其他食品。豆制品加工中，每加工Ikg的大豆就會產生濕重為1.3kg或干重為0.3-0.4kg的豆渣，因此所產生的豆渣數量相當驚人。研究表明，干豆渣中含蛋白15-25%，含膳食纖維40-60%。由于大豆蛋白和纖維素結合緊密，難以被消化道內的酶分解，所以難以用作食品或飼料，通常被廢棄，造成水體富營養，嚴重污染環境，因此急需尋求豆渣的加工利用途徑。
[0005]目前，豆渣在食用菌產業的應用也有一些研究和報道，而以豆渣為主要基質進行蛹蟲草的栽培還未見有報道。
【發明內容】
[0006]本發明的一個目的是提供一種蛹蟲草栽培培養基，由培養基質和營養液組成，所述培養基質和所述營養液的質量比為1: (0.5-1.5)；
[0007]所述培養基質為如下I)或2)的物質:
[0008]1)豆渣；
[0009]2)由豆渣、谷物和蠶蛹粉組成，所述培養基質中所述豆渣、谷物和蠶蛹粉的質量比為(10-100): (0-90): (0-3)，所述谷物和蠶蛹粉的質量均不為0，所述谷物為小麥或大米；
[0010]所述營養液為如下A)或B)中的任一種:
[0011]A)溶質及其濃度分別為葡萄糖10 — 40g/L、蛋白胨O — 15g/L、磷酸二氫鉀I一5g/L、硫酸鎂0.5—2.5g/L、檸檬酸銨O — 2.5g/L和維生素BlO — 0.lg/L的水溶液；
[0012]B)不含瓊脂的PDA培養基，即馬鈴薯200g煮汁和葡萄糖20g，用水定容至1000ml ；
[0013]所述營養液的pH值為5.0 — 8.0。
[0014]在上述蛹蟲草栽培培養基中，所述培養基質和所述營養液的質量比具體可為1:0.5,1:0.8,1:1.2 或 1:1.5。
[0015]在上述蛹蟲草栽培培養基中，當所述培養基質為2)所述的物質時，所述培養基質中所述豆渣、谷物和蠶蛹粉的質量比具體可為10:88: 2、32:65:3或66:33:1。
[0016]在上述蛹蟲草栽培培養基中，當所述營養液為所述溶液A時，所述營養液中所述溶質及其濃度分別為葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸二氫鉀2g/L、硫酸鎂lg/L、檸檬酸銨lg/L和維生素BI0.05g/L ;或，
[0017]葡萄糖40g/L,蛋白胨15g/L,磷酸二氫鉀5g/L,硫酸鎂2.5g/L和維生素BI0.1g/L ;或，
[0018]葡萄糖20g/L，磷酸二氫鉀lg/L，硫酸鎂0.5g/L和檸檬酸銨2.5g/L。
[0019]在上述蛹蟲草栽培培養基中，所述營養液的pH值具體可為5.0、5.5、6.5或8.0。
[0020]本發明的另一個目的是提供一種栽培蛹蟲草的方法，包括將蛹蟲草(Cordyc印smilitaris)接種于含豆渣的蛹蟲草栽培培養基上進行培養獲得所述蛹蟲草的子實體的步驟。
[0021]在上述方法中，所述 含豆渣的蛹蟲草栽培培養基可為本發明在第一個目的中所闡述的蛹蟲草栽培培養基中的任意一種，但不限于本發明所提供的上述蛹蟲草栽培培養基。
[0022]在上述方法中，所述接種按照包括如下步驟的方法進行:將所述蛹蟲草接種于種子培養基中，獲得所述蛹蟲草含量以菌絲球濕重計為60-120g/L的種子液，再按每100g所述蛹蟲草栽培培養基接種13_27mL所述種子液將所述蛹蟲草接種于所述蛹蟲草栽培培養基上。
[0023]在上述方法中，將接種所述蛹蟲草的所述蛹蟲草栽培培養基依次于如下溫度和光照條件下進行培養，獲得所述蛹蟲草的子實體:
[0024]a) 16_22°C恒溫、黑暗條件下培養至所述蛹蟲草菌絲體充滿培養基；
[0025]b)每天24小時中23°C光照10 —16小時、其余時間為16°C黑暗的條件下培養至所述蛹蟲草的子座原基形成；
[0026]c) 20— 25°C恒溫、每天24小時中光照8 —12小時其余時間為黑暗的條件下培養至獲得所述蛹蟲草的子實體。
[0027]本發明保護上述任一所述蛹蟲草栽培培養基在培養蛹蟲草(Cordyc印smilitaris)中的應用。
[0028]實驗證明，將蛹蟲草在含有豆渣的蛹蟲草栽培培養基中培養，當培養基質中豆渣的含量為10%_66%時，蛹蟲草成熟子實體的產量可達到甚至超過對照(以常用的大米或小麥培養基進行培養)的產量；當培養基質全部為豆渣時，蛹蟲草成熟子實體的產量為對照(以大米培養基進行培養)的39%。本發明為蛹蟲草的栽培提供了一個新的可行的培養方法，同時為豆渣利用提供了一個新的途徑，具有廣闊的應用前景。
【具體實施方式】[0029]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0030]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0031 ] 下述實施例中的％如無特別說明，均為質量百分含量。
[0032]蛹蟲草(Cordyceps militaris):購自遼寧錦州亞泰微生物研究所。
[0033]豆渣:生產豆奶或豆腐過程中的副產品。下述實施例所用的豆渣來自北京仙源食品釀造有限公司；含水份70-85%。
[0034]蠶蛹粉:蠶蛹經過干燥、粉碎后的產品。下述實施例所用的蠶蛹粉購自遼寧省丹東市振安區群長土特產公司；無霉變及異味異臭；含水份10-12%，粗蛋白45-55%，粗纖維3-6%,粗灰分 4-5%。
[0035]小麥:去掉內外稃且無霉變的小麥粒。
[0036]大米:去掉內外稃且無霉變的大米粒。
[0037]實施例1、利用豆渣栽培蛹蟲草的方法及其培養基
[0038]—、利用豆洛栽培蛹蟲草的方法及其培養基
[0039]1、培養基的制備
[0040]將豆渣100g，小麥200g和蠶蛹粉9g混合均勻，分裝成10只罐頭瓶，然后按1:1.5的質量比加入營養液A，封口，121°C 滅菌I小時，待冷卻至室溫后備用，獲得含蛹蟲草栽培培養基的培養瓶。
[0041]上述營養液A的配方為:葡萄糖10g，蛋白胨10g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂lg，檸檬酸銨lg，維生素B10.05g，用水定容至1000ml，調pH值5.0。
[0042]2、種子液的制備
[0043]將蛹蟲草(Cordyceps militaris)接種于PDA平板上,20°C活化培養后，接種于500ml三角瓶中，瓶中裝有150ml步驟I的營養液A，20°C、150rpm震蕩培養4天，得到含蛹蟲草(Cordyceps militaris)以菌絲球濕重計為80g/L的種子液。
[0044]3、接種
[0045]無菌條件下，在每個步驟I的培養瓶中接種IOmL步驟2的種子液，即每100g蛹蟲草栽培培養基接種13ml步驟2的種子液。
[0046]4、菌絲體培養
[0047]將步驟3的培養瓶放置于20°C、黑暗條件下培養8天后蛹蟲草菌絲體充滿培養基。
[0048]5、原基分化培養
[0049]將步驟4的培養瓶于每天24小時中23°C光照16小時、其余時間為16°C黑暗的條件下培養8天后蛹蟲草的子座原基形成。
[0050]6、子實體生長培養
[0051]將步驟5的培養瓶放置于22°C條件下，每天光照8小時培養30天后獲得蛹蟲草的子實體。
[0052]上述步驟5和6中的光照培養為自然光照射培養，晚上用日光燈增加光照射時間(光照強度為300-500Lux)培養。
[0053]7、采收
[0054]采集步驟6的培養瓶中生長到8-10厘米長的成熟蛹蟲草子實體，烘干得產品。
[0055]8、結果[0056]隨機取8個培養瓶，統計每瓶蛹蟲草子實體的產量(濕重和干重，克)，計算平均值
土標準差，結果如表1所示。
[0057]表1.豆渣培養基中蛹蟲草子實體產量統計結果
[0058]
【權利要求】
1.一種蛹蟲草栽培培養基，由培養基質和營養液組成，所述培養基質和所述營養液的質量比為1: (0.5—1.5)； 所述培養基質為如下I)或2)的物質: 1)豆渣； 2)由豆渣、谷物和蠶蛹粉組成，所述培養基質中所述豆渣、谷物和蠶蛹粉的質量比為(10-100): (0-90): (0-3)，所述谷物和蠶蛹粉的質量均不為0，所述谷物為小麥或大米； 所述營養液為如下A)或B)中的任一種: A)溶質及其濃度分別為葡萄糖10— 40g/L、蛋白胨O — 15g/L、磷酸二氫鉀I一5g/L、硫酸鎂0.5—2.5g/L、檸檬酸銨O — 2.5g/L和維生素BlO — 0.lg/L的水溶液； B)不含瓊脂的PDA培養基； 所述營養液的PH值為5.0 — 8.0。
2.根據權利要求1所述的蛹蟲草栽培培養基，其特征在于:所述培養基質和所述營養液的質量比為 1:0.5、1:0.8、1: 1.2 或 1:1.5。
3.根據權利要求1或2所述的蛹蟲草栽培培養基，其特征在于:當所述培養基質為2)所述的物質時，所述培養基質中所述豆渣、谷物和蠶蛹粉的質量比為10:88:2、32:65:3或66:33:1 ο
4.根據權利要求1-3中任一所述的蛹蟲草栽培培養基，其特征在于:當所述營養液為所述溶液A時，所述營養液中所述 溶質及其濃度分別為葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、磷酸二氫鉀2g/L、硫酸鎂lg/L、檸檬酸銨lg/L和維生素BI0.05g/L ;或， 葡萄糖40g/L,蛋白胨15g/L,磷酸二氫鉀5g/L,硫酸鎂2.5g/L和維生素BI0.lg/L ;或， 葡萄糖20g/L，磷酸二氫鉀lg/L，硫酸鎂0.5g/L和檸檬酸銨2.5g/L。
5.根據權利要求1-4中任一所述的蛹蟲草栽培培養基，其特征在于:所述營養液的pH值為 5.0、5.5、6.5或8.0。
6.一種栽培蛹蟲草的方法,包括將蛹蟲草(Cordyceps militaris)接種于含豆洛的蛹蟲草栽培培養基上進行培養獲得所述蛹蟲草子實體的步驟。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于:所述含豆渣的蛹蟲草栽培培養基為權利要求1-5中任一所述的蛹蟲草栽培培養基。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于:所述接種按照包括如下步驟的方法進行:將所述蛹蟲草接種于種子培養基中，獲得所述蛹蟲草含量以菌絲球濕重計為60-120g/L的種子液，再按每100g所述蛹蟲草栽培培養基接種13_27mL所述種子液將所述蛹蟲草接種于所述蛹蟲草栽培培養基上。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于:所述種子培養基為權利要求1所述的營養液。
10.根據權利要求6-9中任一所述的方法，其特征在于:將接種所述蛹蟲草的所述蛹蟲草栽培培養基依次于如下溫度和光照條件下進行培養，獲得所述蛹蟲草子實體: a)16 — 22°C恒溫、黑暗條件下培養至所述蛹蟲草菌絲體充滿培養基； b)每天24小時中23°C光照10—16小時、其余時間為16°C黑暗的條件下培養至所述蛹蟲草的子座原基形成； c)20— 25°C恒溫、每天24小時中光照8 —12小時其余時間為黑暗的條件下培養至獲得所述蛹蟲草的子實體。`
【文檔編號】A01G1/04GK103503689SQ201210206174
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2012年6月18日 優先權日:2012年6月18日
【發明者】顏凡雙, 喻順珍, 李鐵軍, 張沅 申請人:北京仙源食品釀造有限公司