專利名稱：一種草莓根尖脫毒與組培方法
技術領域：
本發明涉及植物脫毒與組培技術領域，尤其一種草莓根尖脫毒與組培方法。
背景技術：
草莓作為一種經濟作物，其種苗的莖尖脫毒組培快繁，是一種常規采用的技術。但在草莓莖尖組培快繁的過程中，存在有操作難度大、工作效率低(在顯微鏡下，用手術工具剝離O. 02mm莖尖)，難以徹底消毒，組培苗污染率高。至目前，關于采用以草莓的根尖為外植體進行脫毒和組培的技術，尚未見有成熟技術的文獻報導。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種草莓根尖脫毒與組培方法，可以解決草莓 組培傳統莖尖脫毒技術所存在的效率低、消毒難徹底、組培苗污染率高等問題，操作效率高、消毒徹底、組培苗污染率低。為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是一種草莓根尖脫毒與組培方法，該方法包括以下步驟
I)培養基的制備以MS培養基為基本培養基，附加6 -芐氨基嘌呤5 7. 5mg/L, 2，4 -二氯苯氧乙酸O. 3 O. 5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的根尖誘導培養基；
以MS培養基為基本培養基，附加6-芐氨基嘌呤5 7. 5mg/L，a-萘乙酸O. 2
O.5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的繼代增殖培養基；
以1/2MS培養基為基本培養基，附加吲哚乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的生根培養基；
2)材料預處理和根尖外植體的選取、滅菌將草莓放入滅菌細沙內于38°C ±2°C下進行熱處理4 6周至抽生出新根系；取I 2cm長主根根尖，用無菌濾紙吸干表面水分，在顯微鏡下將主根根尖前端長I 2mm的根尖切下作為外植體；
3)根尖誘導再生植株培養將外植體接種在根尖誘導培養基上，在28±2°C、光強8001ux、光照12小時/d下培養，至四周后其余條件不變光強增強到16001uX，六周后光強增強到32001uX，八周后光強減弱到12001uX下繼續培養直至從根尖誘導出再生植株幼芽，此階段總共需培養2 3個月；
4)幼芽增殖培養將植株幼芽接種在繼代增殖培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養至長成8 IOcm長小苗；
5)繼代生長培養將小苗剪成2 2.5cm長小段接種在生根培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養至長成8 IOcm長小苗；以后每隔3 4周將小苗按同上述方法進行一次繼代擴繁，直到滿足苗數要求；
6)生根培養將繼代擴增小苗接種在生根培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養，I周后長出根系成為完整試管苗。步驟2)中，對長主根根尖消毒的方法為放入70%酒精中浸泡30秒，再用質量百分濃度為 ο. 5%次氯酸鈉溶液消毒8分鐘及無菌水洗6次。MS培養基的成分為(mg/L)
i) NH4NO3 33000、KNO3 38000、CaCl2 · 2H20 8800、MgSO4 · 7H20 7400、KH2PO4 3400 ；
ii) KI 166、H3BO3 1240、MnSO4 · 4H20 4460、ZnSO4 · 7H20 1720、Na2 · MoO4 · 2H20 50、CuSO4 · 5H20 5、CaCl2 · 6H20 5 ；
iii) FeSO4 · 7H20 5560、Na2 · EDTA · 2H20 7460 ；
將配制好的MS培養基用水稀釋兩倍后得到1/2MS培養基。本發明提供的一種草莓根尖脫毒與組培方法，有益效果如下 I、操作容易，效率顯著提高因為現有的草莓采用種苗的莖尖脫毒組培快繁技術，但在莖尖組培快繁的過程中，用手術工具剝離O. 02mm莖尖是一項難度較大且工作效率低的工作，而草莓的根尖直接暴露在外，在顯微鏡下切除其根尖的尖端就十分容易，效率大大提聞。2、消毒徹底、組培苗污染率低莖尖脫毒由于其外圍莖片不易清除，消毒難以徹底，導致組培苗污染率往往高達60%左右；而根尖脫毒由于其外圍無任何包裹，消毒容易徹底，組培苗污染率低。3、簡化了操作，提高了工作效率，且接種體分化好，試管苗繁殖速度快，脫毒徹底，草莓長勢良好。
具體實施例方式一種草莓根尖脫毒與組培方法，該方法包括以下步驟
1)培養基的制備以MS培養基為基本培養基，附加6-芐氨基嘌呤5 7. 5mg/L, 2，4 -二氯苯氧乙酸O. 3 O. 5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的根尖誘導培養基；
以MS培養基為基本培養基，附加6-芐氨基嘌呤5 7. 5mg/L，a-萘乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的繼代增殖培養基；
以1/2MS培養基為基本培養基，附加吲哚乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的生根培養基；
2)材料預處理和根尖外植體的選取、滅菌將草莓放入滅菌細沙內于38°C±2°C下進行熱處理4 6周至抽生出新根系；取I 2cm長主根根尖，用無菌濾紙吸干表面水分，在顯微鏡下將主根根尖前端長I 2mm的根尖切下作為外植體；
3)根尖誘導再生植株培養將外植體接種在根尖誘導培養基上，在28±2°C、光強8001ux、光照12小時/d下培養，至四周后其余條件不變光強增強到16001uX，六周后光強增強到32001uX，八周后光強減弱到12001uX下繼續培養直至從根尖誘導出再生植株幼芽，此階段總共需培養2 3個月；
4)幼芽增殖培養將植株幼芽接種在繼代增殖培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養至長成8 IOcm長小苗；
5)繼代生長培養將小苗剪成2 2.5cm長小段接種在生根培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養至長成8 IOcm長小苗；以后每隔3 4周將小苗按同上述方法進行一次繼代擴繁，直到滿足苗數要求；
6)生根培養將繼代擴增小苗接種在生根培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養，I周后長出根系成為完整試管苗。步驟2)中，對長主根根尖消毒的方法為放入70%酒精中浸泡30秒，再用質量百分濃度為10. 5%次氯酸鈉溶液消毒8分鐘及無菌水洗6次。MS培養基的成分為(mg/L)
i) NH4NO3 33000、KNO3 38000、CaCl2 · 2H20 8800、MgSO4 · 7H20 7400、KH2PO4 3400 ；
ii) KI 166、H3BO3 1240、MnSO4 · 4H20 4460、ZnSO4 · 7H20 1720、Na2 · MoO4 · 2H20 50、CuSO4 · 5H20 5、CaCl2 · 6H20 5 ；
iii) FeSO4 · 7H20 5560、Na2 · EDTA · 2H20 7460 ；
將配制好的MS培養基用水稀釋兩倍后得到1/2MS培養基。
權利要求
1.一種草莓根尖脫毒與組培方法，其特征在于該方法包括以下步驟 1)培養基的制備以MS培養基為基本培養基，附加6-芐氨基嘌呤5 7. 5mg/L, 2，4 -二氯苯氧乙酸O. 3 O. 5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的根尖誘導培養基； 以MS培養基為基本培養基，附加6-芐氨基嘌呤5 O. 75mg/L，a -萘乙酸O. 2 O.5mg/L后制得pH值為5. 8 6. O的繼代增殖培養基； 以1/2MS培養基為基本培養基，附加吲哚乙酸O. 2 O. 5mg/L后制得pH值為5. 8 6.O的生根培養基； 2)材料預處理和根尖外植體的選取、滅菌將草莓放入滅菌細沙內于38°C±2°C下進行熱處理4 6周至抽生出新根系；取I 2cm長主根根尖，消毒后吸干表面水分，將主根根尖前端長I 2mm的根尖切下作為外植體；3)根尖誘導再生植株培養將外植體接種在根尖誘導培養基上，在28±2°C、光強8001ux、光照12小時/d下培養，至四周后其余條件不變光強增強到16001uX，六周后光強增強到32001uX，八周后光強減弱到12001uX下繼續培養直至從根尖誘導出再生植株幼芽，此階段總共需培養2 3個月； 4)幼芽增殖培養將植株幼芽接種在繼代增殖培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養至長成8 IOcm長小苗； 5)繼代生長培養將小苗剪成2 2.5cm長小段接種在生根培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養至長成8 IOcm長小苗；以后每隔3 4周將小苗按同上述方法進行一次繼代擴繁，直到滿足苗數要求； 6)生根培養將繼代擴增小苗接種在生根培養基上，在28±2°C，光強2000 30001ux、光照12小時/d下培養，I周后長出根系成為完整試管苗。
2.根據權利要求I所述的一種草莓根尖脫毒與組培方法，其特征在于步驟2)中，對長主根根尖消毒的方法為放入70%酒精中浸泡30秒，再用質量百分濃度為10. 5%次氯酸鈉溶液消毒8分鐘及無菌水洗6次。
全文摘要
一種草莓根尖脫毒與組培方法，該方法包括以下步驟1)培養基的制備；2)材料預處理和根尖外植體的選取、滅菌；3)根尖誘導再生植株培養；4)幼芽增殖培養；5)繼代生長培養；6)生根培養。本發明提供的一種草莓根尖脫毒與組培方法，可以解決草莓組培傳統莖尖脫毒技術所存在的效率低、消毒難徹底、組培苗污染率高等問題，操作效率高、消毒徹底、組培苗污染率低。
文檔編號A01H4/00GK102893866SQ20121038937
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月15日 優先權日2012年10月15日
發明者劉開紅 申請人:長陽勤勞農夫農產品有限公司