一種納塔櫟體細胞胚胎發生的方法
【專利摘要】本發明公開了一種納塔櫟體細胞胚胎發生的方法，包括選材、消毒處理、試管芽苗誘導培養、體胚誘導、增殖培養、成熟培養、體胚的萌發一系列操作；在體胚誘導、增殖、成熟、萌發培養的培養基中進行培養。本發明具有繁殖系數高，繁殖時間不受季節限制，取材對母體傷害小，無病蟲害困擾，能夠保持原植株優良性狀，在納塔櫟苗木生產及科研中均具有重要的應用價值。
【專利說明】一種納塔櫟體細胞胚胎發生的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及納塔櫟的組織培養方法，具體的說是納塔櫟的體細胞胚胎發生方法。【背景技術】
[0002]納塔櫟Wuercus nuttalli)為殼斗科櫟屬落葉喬木,主干直立,大枝平展略有下垂，塔狀樹冠。葉橢圓，長l(T20cm，寬5~13cm，正面深綠色，背面暗綠色，有叢生毛，秋葉亮紅色或紅棕色。樹皮灰色或棕色，光滑。納塔櫟原產美國，分布區從美國德州東部到佛羅里達西部，包括阿肯色，密蘇里，俄克拉何馬和田納西的南部。引種實踐表明，納塔櫟生長速度快，五年生平均樹高可達5m，十年生胸徑15~20cm。每年11月初葉色開始變紅，第二年2月落葉，冠形優美，葉色紅艷，是良好的速生觀賞樹種。[0003]但納塔櫟開花結實遲、較難建立種子園、結實量大小年現象明顯、扦插生根困難、嫁接繁殖存在不親和現象，因此大規模生產納塔櫟種苗十分困難。特別對于經過優選的樹姿挺秀、葉色亮紅的優良單株，急需新型繁殖技術，滿足市場的潛在需求。
[0004]體細胞胚胎發生及其再生技術是20世紀90年代形成的林業繁育技術的重要內容之一，已經成為許多樹種大規模繁殖的有效手段。體細胞胚胎，由體細胞發育而來，進而再生為完整植株。體細胞胚胎發生途徑優點明顯:繁殖系數高，操作可重復，遺傳相對穩定。特別是近年來，隨著其技術體系的逐漸成熟，已成為改良櫟樹生長速率和抗病性的可靠途徑，是優良基因型的最佳繁殖系統，而且在種質創新中具有很大的應用潛力。
【發明內容】
[0005]發明目的:建立納塔櫟體胚發生技術體系，實現納塔櫟優選單株規模化高效生產。
[0006]技術方案:本發明提供了一種納塔櫟體細胞胚胎的發生方法，包括以下步驟:
(1)選材:9年生納塔櫟優選單株當年生萌條為材料，將其剪成約4Cm的帶芽小段；
(2)對采集到的莖段進行消毒處理；
(3)芽苗誘導培養:將步驟(2)中的莖段用剪刀去除頭尾氧化變黑部分，分清形態學上、下端，剪成長1.5~3cm的Y字型，下端切口呈斜型，豎直接種于芽誘導培養基中，培養15^20d后分化長成試管芽苗；
(4)體胚誘導:將芽誘導產生的嫩葉接種到體胚誘導培養基中，在培養溫度為(25±2)°C，光照強度為I 600-2 500 Ix的培養室中培養30d后體胚誘導率為97%。
[0007](5)增殖培養:將步驟(4)中誘導產生的體胚，轉接于含有增殖培養基的玻璃培養瓶中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，在光照強度為1600-25001χ，光照時間為16h/d，溫度為(25±2)°C，2(T25d后體胚迅速增殖呈白色或黃色透明狀顆粒。
[0008](6)成熟培養:將步驟(5)中增殖獲得的體胚，轉接于成熟培養基中，在光照強度為1600-25001χ，光照時間16h/d，溫度為(25±2) °C的培養條件下，進行成熟培養，50天后成熟率在80% ；
(7)體胚的萌發:將步驟(6)中獲得的成熟體胚接種于萌發培養基中，在光照強度為1600-25001χ，光照時間16h/d，溫度為(25±2) °C的培養條件下，進行萌發培養60d。
[0009]進一步，所述步驟(2)中的消毒處理過程包括:將采集的嫩梢去除2/3葉片后修剪成約4cm長的帶腋芽莖段，洗滌劑浸泡30 min，流水沖洗10次，蒸餾水清洗外植體后，用無菌水沖洗3~4次，置于無菌燒杯中，在超凈工作臺內用70%的酒精浸泡30s，無菌水沖洗2^3次,再用0.1%升汞溶液消毒3 min，最后用無菌水沖洗6次；
進一步，所述步驟(3)中芽誘導培養基的配方為:WPM基本培養基+0.0Smg.1^e-BA+
0.05mg.L^NAA+SOg.L-1蔗糖+6.5 g.L-1卡拉膠，培養基pH值控制在5.7~5.8。
[0010]進一步，所述步驟(4)中體胚誘導培養基配方為:MS基本培養基+0.16 mg.L_16-BA+0.3mg.L_1NAA+0.1 mg.U12, 4_D+30g.171 鹿糖 +6.5 g.171 卡拉膠；pH 值控制在
5.7~5.8ο
[0011]進一步，所述步驟(5)中的增殖培養基配方為:MS基本培養基+2.0 mg.L_16-BA+0.02 mg.L_1NAA+30g.L-1 鹿糖 +6.5 g.L-1 卡拉膠；pH 值控制在 5.7~5.8。
[0012]進一步，所述步驟(6)的成熟培養基配方為:MS基本培養基+50g.1蔗糖+6.5g.L—1卡拉膠；pH值控制在5.7~5.8。
[0013]進一步，所述步驟(7)中的萌發培養基配方為:MS基本培養基+10 g.L—1山梨醇+30g.L-1蔗糖+6.5 g.L-1卡拉膠，所述萌發培養基的pH值為5.7~5.8。
[0014]進一步，所述WPM基本培養基即木本植物組織培養基的具體配方如下:
硝酸銨 NH4N03400 mg/L
硝酸鈣 Ca (NO3) 2.4H20556 mg/L
氯化鈣 CaCl2.2H2096 mg/L
硫酸鎂 MgSO4.7H20370 mg/L
磷酸二氫鉀 KH2PO4170 mg/L
硫酸鉀 K2S04990 mg/L
乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA 37.3 mg/L 硫酸亞鐵 FeSO4.7H2027.8 mg/L
硫酸錳 MnSO4.H2O22.3 mg/L
硫酸鋅 ZnSO4.7H208.6 mg/L
硼酸 H3BO36.2 mg/L
鑰酸鈉 Na2MoO4.2H200.25 mg/L
硫酸銅 CuSO4.5H200.025 mg/L
氯化鈷 CoCl2.6 H2O0.025 mg/L
肌醇 C6H12O6.2H20100 mg/L
甘氨酸 NH2.CH2.COOH 2 mg/L
鹽酸硫胺素 C12H17ClOS.2HC1 I mg/L
鹽酸吡唆醇 C8HltlNO5P0.5 mg/L
煙酸 NC5H4COOH0.5 mg/L。
[0015]所述MS基本培養基的具體配方如下:
硝酸鉀 KN031900 mg/L
硝酸銨 NH4N031650 mg/L磷酸二氫 KH2P04 170 mg/L 硫酸鎂 MgS04.7H20 370 mg/L 氯化鈣 CaCl2.2Η20 440 mg/L 碘化鉀 KI0.83 mg/L
硼酸 H3B036.2 mg/L
硫酸錳 MnS04.4H20 22.3 mg/L 硫酸鋅 ZnS04.7 H208.6 mg/L
鑰酸鈉 Na2Mo04.2 H20 0.25 mg/L 硫酸銅 CuS04.5 H20 0.025 mg/L 氯化鈷 CoC12.6 H200.025 mg/L
乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA 37.3 mg/L 硫酸亞鐵 FeS024.7H2027.8 mg/L
肌醇100 mg/L
甘氨酸2 mg/L
鹽酸硫胺素VBl0.1 mg/L
鹽酸吡哆醇VB60.5 mg/L
煙酸 VPP0.5 mg/L ο
[0016]有益效果:本發明相對于現有技術而言具有以下優點:
1.以無菌瓶苗葉片作為外植體進行體胚誘導，克服了離體培養外植體取材受季節限制的缺點。
[0017]2.本發明建立的再生體系，通過各個生長階段植株生長需求不同調配適當的培養基，所得體胚誘導率為97%，與其它無性繁殖相比較(從f 2年幼樹上采嫩枝進行夏插，成活率為20%左右；以I年生麻櫟做砧木，春季枝接活率為12~15%)，繁殖系數大大增加。
[0018]3.本發明建立的再生體系，植株發育正常，穩定保存了新葉亮紅的優良性狀。
[0019]本發明提供的繁殖方法很大程度上提高了納塔櫟的再生效率和繁殖系數，為產業化快速繁殖納塔櫟優選單株提供了一種新方法。
【具體實施方式】
[0020]下面結合實施例對本發明作更進一步的說明。
[0021]以下實例所用的基本培養基的配方如下:
芽誘導基本培養基為WPM培養基，其中，常量元素的組分和其對應的使用濃度如下:硝酸銨(NH4NO3) 400 mg/L、硝酸鈣(Ca(NO3)2.4Η20) 556 mg/L、氯化鈣(CaCl2.2Η20) 96 mg/L、硫酸鎂(MgSO4.7H20) 370 mg/L、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 170 mg/L、硫酸鉀(K2SO4) 990 mg/L ；微量元素的組分和其對應的使用濃度如下:硫酸錳(MnSO4.H2O )22.3 mg/L、硫酸鋅(ZnSO4.7H20) 8.6 mg/L、硼酸(H3BO3) 6.2 mg/L、鑰酸鈉(Na2MoO4.2H20) 0.25 mg/L、硫酸銅(CuSO4.5Η20)0.025 mg/L、硫酸銅(CuSO4.5Η20)0.025 mg/L、氯化鈷(CoCl2.62 )0.025 mg/L ；
鐵鹽的組分和其對應的使用濃度如下:乙二胺四乙酸二鈉(Na2.EDTA) 37.3 mg/L、硫酸亞鐵(FeSO4.7H20) 27.8 mg/L ；有機成分的組分和其對應的濃度如下:肌醇100 mg/L、甘氨酸(Gly) 2 mg/L、鹽酸硫胺素(VB1) I mg/L、鹽酸吡哆醇(VB6) 0.5 mg/L、煙酸(VPP) 0.5 mg/L。
[0022]體胚誘導、增殖、成熟、萌發培養的基本培養基為MS培養基，其中，常量元素的組分和其對應的使用濃度如下:硝酸銨(NH4NO3) 1650 mg/L、硝酸鉀(KNO3) 1900 mg/L、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 170 mg/L、硫酸鎂(MgSO4.7H20) 370 mg/L、氯化鈣(CaCl2.2H20) 440 mg/L ；
微量元素的組分和其對應的使用濃度如下:碘化鉀(ΚΙ) 0.83 mg/L，硫酸錳(MnSO4.H2O) 22.3 mg/L、硫酸鋅(ZnSO4.7H20) 8.6 mg/L、硼酸(H3BO3) 6.2 mg/L、鑰酸鈉(Na2MoO4.2Η20)0.25 mg/L、硫酸銅(CuSO4.5Η20)0.025 mg/L、氯化鈷(CoCl2.62 )0.025 mg/L ；
鐵鹽的組分和其對應的使用濃度如下:乙二胺四乙酸二鈉(Na2.EDTA) 37.3 mg/L、硫酸亞鐵(FeSO4.7H20) 27.8 mg/L ；
有機成分的組分和其對應的濃度如下:肌醇100 mg/L、甘氨酸(Gly) 2 mg/L、鹽酸硫胺素(VB1) I mg/L、鹽酸吡哆醇(VB6) 0.5 mg/L、煙酸(VPP) 0.5 mg/L。
[0023]一種納塔櫟體細胞胚胎的發生方法，包括以下步驟:
(1)選材:2012年4飛月，以江蘇省林科院自主選育的納塔櫟為研究材料(樹齡9年，胸徑12cm，具有春季新葉鮮紅，秋季葉色亮紅，樹形優美等優良性狀)，采集當年生萌條，將其剪成約4飛cm的帶芽小段進行芽的誘導，30d后取芽誘導獲得的嫩葉作為外植體進行體胚誘導；
(2)消毒處理:將采集的萌條去除2/3葉片后，洗滌劑浸泡30min，流水沖洗10次，蒸餾水清洗外植體后，用無菌水沖洗3~4 次，置于無菌燒杯中，在超凈工作臺內用70%的酒精浸泡30s，無菌水沖洗2~3次，再用0.1%升汞溶液消毒3分鐘，最后用無菌水沖洗6次；
(3)試管芽苗誘導培養:在超凈的工作臺上及無菌條件下，將步驟(2)中消毒后的外植體用剪刀去除莖段頭尾氧化變黑部分，分清形態學上、下端，將莖段剪成長約2cm的Y字型，下端切口呈斜型，豎直接種于芽誘導培養基中。然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，其中光照強度為1600-25001X，每日光照時間為16小時，溫度為(25±2) °C，培養20天，分化長成試管芽苗；
(4)體胚誘導:將芽誘導后產生的嫩葉接種到體胚誘導培養基中，在培養溫度為(25±2) °C，光照強度為I 600~2 500 Ix的培養室中培養30d后體胚誘導率為97%。
[0024](5)增殖培養:將步驟(4)中誘導產生的體胚，在超凈的工作臺上及無菌條件下，轉接于增殖培養基中，然后將其置于普通日光燈為光源的環境下，在光照強度為1600-25001χ，光照時間為16h/d，溫度為(25±2) °C的條件下培養25d，體胚迅速增殖呈白色或黃色透明狀顆粒。
[0025](6)成熟培養:將步驟(5)中增殖獲得的體胚，轉接于成熟培養基的培養瓶中，在光照強度為1600-25001χ，每日光照時間為16小時，溫度為(25±2) °C的條件下，進行成熟培養，50天后成熟率在80% ；
(7)體胚的萌發:將步驟(6)中獲得的成熟體胚接種于萌發培養基中，在光照強度為1600-25001χ，光照時間為16h/d，溫度為(25±2) °C的條件下，進行萌發培養60天。
[0026]實施例1:
本實施例中所選用的各個階段的培養基配方如下:(1)芽誘導培養基的配方為:WPM基本培養基，附加0.05mg.Ll-BA、 0.06mg.L^1NAA,40g.L-1鹿糖、7.0 g.L-1卡拉膠，調pH值為5.7 ；
(2)體胚誘導培養基配方為:MS基本培養基，附加0.20mg.L-^-ΒΑ,Ο.2mg.L^1NAA,0.08mg.U12, 4_D、25g.L-1 鹿糖、6.5g.L-1 卡拉膠,調 pH 值為 5.7。
[0027](3)體胚增殖培養基配方為:MS基本培養基，附加2.0 mg.Ι^β-ΒΑ,Ο.01 mg.L^1NAA,25g.L-1 蔗糖、6.5g.L-1 卡拉膠，調 pH 值為 5.7。
[0028](4)體胚成熟培養基配方為:MS基本培養基,附加60g.L—1鹿糖、6.5 g.L—1卡拉膠，調pH值為5.7。
[0029](5)體胚萌發培養基配方為:MS培養基，附加12 g.L-1山梨醇、20g.L-1蔗糖、6.5g.卡拉膠，調pH值為5.7
實施例2:
本實施例中所選用的各個階段的培養基配方如下:
(1)芽誘導培養基的配方為:WPM基本培養基，附加0.08mg.Ι^β-ΒΑ, 0.05mg.L^1NAA,25g.L-1蔗糖、6.5 g.1/1卡拉膠，調pH值為5.7 ;
(2)體胚誘導培養基配方為:MS基本培養基，附加0.16mg.L_1NAA>0.12 mg.U12, 4_D、40g.L—1 鹿糖、7.0g.L—1 卡拉膠,調 pH 值為 5.7。
[0030](3)體胚增殖培養基配方為:MS基本培養基，附加1.8 mg.Ι^β-ΒΑ,Ο.03 mg.L-1NAAdOg.L-1 蔗糖、7.0 g.L-1 卡拉膠，調 pH 值為 5.7。
[0031](4)體胚成熟培養基配方為:MS基本培養基，附加40g.L-1蔗糖、7.0 g.L-1卡拉膠，調pH值為5.7。
[0032](5)體胚萌發培養基配方為:MS培養基，附加8 g.L-1山梨醇、30g.L-1蔗糖、7.0g.卡拉膠，調pH值為5.7。
[0033]實施例3:
本實施例中所選用的各個階段的培養基配方如下:
(1)芽誘導培養基的配方為:WPM基本培養基，附加0.06mg.Ll-BA、 0.05mg.L^1NAA,30g.L-1鹿糖、6.8 g.L-1卡拉膠，調pH值為5.8 ;
(2)體胚誘導培養基配方為:MS基本培養基，附加0.18 mg.L-1^-ΒΑ,Ο.25mg.L^1NAA,0.1 mg.U12, 4_D、30g.L—1 鹿糖、6.8g.L—1 卡拉膠,調 pH 值為 5.8。
[0034](3)體胚增殖培養基配方為:MS基本培養基，附加1.9 mg.Ι^β-ΒΑ,Ο.02 mg.L^1NAA,32g.L-1 蔗糖、6.8 g.L-1 卡拉膠，調 pH 值為 5.8。
[0035](4)體胚成熟培養基配方為:MS基本培養基，附加45g.L-1鹿糖、6.8g.L-1卡拉膠，調pH值為5.8。
[0036](5)體胚萌發培養基配方為:MS培養基，附加10g.L-1山梨醇、28g.L-1鹿糖、6.8g.L—1卡拉膠，調pH值為5.8。
[0037]實施例4:
本實施例中所選用的各個階段的培養基配方如下:
(1)芽誘導培養基的配方為:WPM基本培養基，附加0.07mg.Ι^β-ΒΑ, 0.06mg.L^1NAA,38g.L-1蔗糖、6.5 g.1/1卡拉膠，調pH值為5.8 ;
(2)體胚誘導培養基配方為:MS基本培養基，附加0.19 mg.Ι^β-ΒΑ,Ο.28mg.L^1NAA,0.09 mg.U12, 4_D、35g.171 鹿糖、6.6g.Ι71 卡拉膠,調 pH 值為 5.8。
[0038](3)體胚增殖培養基配方為:MS基本培養基，附加1.8~2.0 mg.Ι^β-ΒΑ,Ο.03 mg.L^1NAA,28g.1 蔗糖、6.9g.1 卡拉膠，調 pH 值為 5.8。
[0039](4)體胚成熟培養基配方為:MS基本培養基，附加48g.L-1鹿糖、6.9 g.L-1卡拉膠，調pH值為5.8。
[0040](5)體胚萌發培養基配方為:MS培養基，附加11 g.1山梨醇、22g.1蔗糖、6.6g.L—1卡拉膠，調pH值為5.8。
[0041]以下是本發明與傳統方法性能對比表:
【權利要求】
1.一種納塔櫟體細胞胚胎的發生方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)選材:選取9年生納塔櫟優選單株的當年生萌條，將其剪成recm的帶芽小段； (2)對帶芽小段外植體進行消毒處理； (3)芽誘導培養:在無菌條件下，將步驟(2)中的外植體用剪刀去除莖段頭尾氧化變黑部分，分清形態學上、下端，剪成長1.5~3cm的Y字型，下端切口呈斜型，豎直接種于芽誘導培養基中培養15~20d，分化長成無菌芽苗；所述芽誘導培養基的配方為:WPM基本培養基，附加 0.05~0.08mg.L h-BA、0.05~0.06mg.L 1NAA^25^40g.L 1 鹿糖、6.5~7.0 g.L 1 卡拉膠，調pH值為5.7~5.8 ; (4)體胚誘導:將步驟(3)中長成的無菌苗嫩葉接種到體胚誘導培養基中培養15~30d；MS基本培養基，附加 0.16~0.20 mg.L_16-BA,0.2^0.3mg.L^1NAA,0.08^0.12 mg.L^2, 4-D,25~40g.L-1蔗糖、6.5~7.0g.L-1卡拉膠，調pH值為5.7~5.8 ； (5)體胚增殖培養:將步驟(4)中誘導產生的體胚，進行增殖培養，2(T25d后，體胚迅速增殖呈白色或黃色透明顆粒狀；體胚增殖培養基配方為:MS基本培養基，附加1.8~2.0mg.L 1-BA、。.01 ~0.03 mg.L 1NAAJS~40g.L 1 鹿糖、6.5~7.0 g.L 1 卡拉膠，調 pH 值為5.7~5.8 ； (6)成熟培養:將步驟(5)中增殖獲得的體胚，接種于含有成熟培養基的培養瓶中培養3(T50d ;體胚成熟培養基配方為:MS基本培養基，附加4(T60g.L—1蔗糖、6.5~7.0 g.L—1卡拉膠，調pH值為5.7~5.8 ; (7)體胚的萌發:將步驟(6)中獲得的成熟體胚接種于萌發培養基中培養4(T60d進行植株再生；所述體胚萌發培養基配方為:MS基本培養基，附加8~12 g.L-1山梨醇、2(T30g.L—1蔗糖、6.5~7.0 g.L—1卡拉膠，調pH值為5.7~5.8。
2.根據權利要求1所述的納塔櫟體細胞胚胎的發生方法，其特征在于:所述步驟(2)中的消毒處理過程包括:將采集的枝條去除2/3葉片后修剪成約Teem長的帶腋芽莖段，洗滌劑浸泡30 min，流水沖洗10次，蒸餾水清洗外植體后，用無菌水沖洗3~4次，置于無菌燒杯中，在超凈工作臺內用70%的酒精浸泡30s，無菌水沖洗2~3次，再用0.1%升汞溶液消毒3 min，最后用無菌水沖洗6次； 根據權利要求1所述的納塔櫟體細胞胚胎的發生方法，其特征在于:所述步驟(3)、步驟(4)、步驟(5)、步驟(6)和步驟(7)中的培養條件為:光照強度為1600-25001χ，每日光照時間為16h，溫度為(25±2)°C。
3.根據權利要求4所述的納塔櫟體細胞胚胎的發生方法，其特征在于:所述的WPM基本培養基即木本植物培養基的具體配方如下: 硝酸銨 NH4N03400 mg/L 硝酸鈣 Ca (NO3) 2.4H20556 mg/L 氯化鈣 CaCl2.2H2096 mg/L 硫酸鎂 MgSO4.7H20370 mg/L 磷酸二氫鉀 KH2PO4170 mg/L 硫酸鉀 K2S04990 mg/L 乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA 37.3 mg/L 硫酸亞鐵 FeSO4 .7H2027.8 mg/L硫酸錳 MnSO4.H2O22.3 mg/L 硫酸鋅 ZnSO4.7H208.6 mg/L 硼酸 H3BO36.2 mg/L 鑰酸鈉 Na2MoO4.2H200.25 mg/L 硫酸銅 CuSO4.5H200.025 mg/L 氯化鈷 CoCl2.6 H2O0.025 mg/L 肌醇 C6H12O6.2H20100 mg/L 甘氨酸 NH2.CH2.COOH 2 mg/L 鹽酸硫胺素 C12H17ClOS.2HC1 I mg/L 鹽酸吡唆醇 C8HltlNO5P0.5 mg/L 煙酸 NC5H4COOH0.5 mg/L 。
4.根據權利要求4中任一項所述的納塔櫟體細胞胚胎的發生方法，其特征在于:所述的MS基本培養基的具體配方如下: 硝酸鉀 KN031900 mg/L 硝酸銨 NH4N031650 mg/L 磷酸二氫 KH2P04 170 mg/L 硫酸鎂 MgS04.7H20 370 mg/`L 氯化鈣 CaCl2.2H20 440 mg/L 碘化鉀 KI0.83 mg/L 硼酸 H3B036.2 mg/L 硫酸錳 MnS04.4H20 22.3 mg/L 硫酸鋅 ZnS04.7 H208.6 mg/L 鑰酸鈉 Na2Mo04.2 H20 0.25 mg/L 硫酸銅 CuS04.50.025 mg/L 氯化鈷 CoC12.6 H200.025 mg/L 乙二胺四乙酸二鈉Na2.EDTA 37.3 mg/L 硫酸亞鐵 FeS024.7H2027.8 mg/L 肌醇100 mg/L 甘氨酸2 mg/L 鹽酸硫胺素VBl0.1 mg/L 鹽酸吡哆醇VB60.5 mg/L 煙酸 VPP0.5 mg/L ο
【文檔編號】C05G1/06GK103548679SQ201310519079
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月29日 優先權日:2013年10月29日
【發明者】張敏, 黃利斌, 陳智敏, 方炎明, 蔣澤平, 蔣春 申請人:江蘇省林業科學研究院