一種甲基營養型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus）三炬-04及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus?methylotrophicus)三炬-04及其應用，該菌株保藏于保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號為CCTCC?No:M2012169。本發明具有很好的防治辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩定，無有毒的化學物殘留，不污染農產品和環境，性價比高和施用方便的優點。其將在植物的青枯病、炭疽病的防治中發揮重要的作用，應用前景廣闊。
【專利說明】-種甲基營養型芽抱桿菌（Bac i I I us methy I otroph i cus) 三炬-04及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一株甲基營養型芽孢桿菌與具體應用，特別是涉及一株甲基營養型芽 孢桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04菌及其菌劑與該菌劑在防治植物病害中的 應用。
【背景技術】
[0002] 青枯病是一種廣泛分布于熱帶、亞熱帶和某些溫帶地區的世界性病害，是多種農 作物減產的主要原因，在我國福建、廣東、廣西、四川、云南、湖南、江西、浙江、上海、江蘇、安 徽等省、市（區）都有分布。辣椒的青枯病是辣椒種植過程中最為嚴重的土傳病害之一，由 于近幾年塑料大棚辣椒春早熟和秋延遲栽培的迅速發展，辣椒青枯病呈逐步上升趨勢。春 早熟栽培從剛進入盛花結果期（一般在5月上旬）開始發生，秋延遲栽培從10?11月份 開始發生。一旦發生，損失嚴重，常常造成20%?30%的死亡，嚴重的高達50%以上。秋延 遲栽培比春早熟栽培為害更為突出，也是近年來影響辣椒種植的突出問題。
[0003] 柑桔炭疽病是一種世界性的、為害較重的病害。可引起落葉、枝梢枯死，嚴重時會 造成連片的果園感染，樹捎全部枯死，損失慘重，2007年廣東的德慶柑橘產區就出現了大面 積感染炭疽病，造成嚴重減產，是一種毀滅性的病害。對于輕微的果實感染會造成果實腐爛 及落果，帶病果實常在貯運期間發生腐爛，所以又是一種重要的采后病害。柑桔炭疽病對我 國的柑橘主產區福建、廣東、江西、四川都造成過嚴重的危害和較大經濟損失，對柑橘產業 的發展造成嚴重影響。
[0004] 對于以上病害傳統防治方法大都采用化學農藥，然而化學農藥效果大都不顯著， 卻同時帶來了環境污染、化學殘留等副作用，對農產品的質量造成不良影響。對此，具有污 染小、而且對人畜毒性小、環境兼容性好、病蟲害不易產生抗性等優點的生物修復技術應運 而生。生物修復劑是利用微生物本身或其代謝物防治和修復病、蟲、雜草等影響的生物制 齊?，其更符合現代社會對農業生產要求。目前我國在生物修復劑生產始終未能形成規模產 業。生物修復劑和生物農藥在農藥總量中的占有量只為4%左右，與發達國家相比還有較大 差距。近年來，我國開發的生物修復劑、生物農藥及其它高新技術越來越受到國際生物、農 藥界的關注。但在品種、劑型、質量和數量方面與發達國家相差甚遠，仍遠遠不能滿足國內 外市場的需求。發展生物修復劑、生物農藥產業對保證農業可持續發展、保障人們的生命與 健康、保護生態環境都十分重要，將為我國農產品出口創造十分有利的條件，極大地增強我 國農產品的國際競爭力。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一株對植物青枯病、炭疽病具有防治作用的甲基營養型芽孢 桿菌。該甲基營養型芽抱桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC No. Μ2012169， 該菌株已于2012年5月16日保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏編號CCTCC No. M2012169。
[0006] 所述的一種甲基營養型芽抱桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC N〇.M2012169,其菌株的16S rRNA基因序列如序列表中SEQ ID NO 1所示。
[0007] 本發明的另一目的在于提供所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的用途，其 用于防治植物的青枯病或炭疽病。尤其是用于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。
[0008] 本發明的再一目的在于提供前述的甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，即 將其發酵，制成發酵液使用。
[0009] 在本發明的較佳實施例中，所述的發酵為液體發酵，以1-10%接種量接種發酵罐， 進行好氧深層發酵，發酵溫度20-30°C，發酵周期36-45h。
[0010] 在本發明的較佳實施例中，液體發酵培養基包括：蔗糖〇. 5-2%、酵母膏0. 5-2%、 磷酸二氫鉀 0.05-0. 02 %、硫酸鎂 0.01-0. 10 %、氯化鈉 0.01-0. 10 %、碳酸鈣 0.01-0. 10%、 PH5-9。
[0011] 在本發明的較佳實施例中，發酵液再制成液體產品或固體產品使用。
[0012] 在本發明的較佳實施例中，發酵液中加入穩定劑后，經無菌灌裝即為液體產品。
[0013] 在本發明的較佳實施例中，固態產品為：把發酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌 后的有機培養基上，混合攪拌均勻，在放置至少l〇h后包裝成袋。
[0014] 本發明的有益效果是：
[0015] 本發明提供了一株對辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病具有較高防治效果的甲基營養 型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC No. M2012169 及其菌劑。該菌 劑具有很好的防治和修復辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩定，無有毒的化學物 殘留，不污染農產品和環境，性價比高和施用方便的優點。本發明將在辣椒的青枯病、柑橘 的炭疽病的防治中發揮重要的作用，應用前景廣闊。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016] 圖1為本發明菌種的顯微照片圖（放大1000倍）
【具體實施方式】
[0017] 以下通過【具體實施方式】進一步描述本發明：
[0018] 實施例1菌種分離和鑒定
[0019] 甲基營養型芽抱桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC No. M2012169菌的分離：采集福建省南靖縣和溪鎮樂土村六斗山（東經117° 1 z 30〃，北緯 24° 56^20"，海拔360米）的土壤，從該土壤中通過營養瓊脂平板分離獲得一株甲基營養 型芽孢桿菌，命名為三炬-04,已于2012年5月16日保藏于武漢大學中國典型培養物保藏 中心，保藏編號CCTCC NO.M2012169。經鑒定，該菌為甲基營養型芽孢桿菌，具有以下特征： 單個細胞0.7?0.8X2?3微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運動。革蘭氏陽性菌， 芽孢0. 6?0. 9 X 1. 0?1. 5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨 大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養基中生長時，常形成皺醭，需氧菌， 適宜生長溫度28?30°C，適宜pH值為5-9。菌種的顯微照片見圖1。
[0020] 菌株三炬-04生理生化特性
[0021] 表型及生理生化特性一酶活、碳源同化
[0022]
[0023]
【權利要求】
1. 一種甲基營養型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04,保藏于保藏 于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號為CCTCC No. M2012169。
2. 如權利要求1所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于：其用 于防治植物的青枯病或炭疽病。
3. 如權利要求1所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于：其用 于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。
4. 如權利要求1所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 將其發酵，制成發酵液使用。
5. 如權利要求4所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在 于：所述的發酵為液體發酵，以1-10%接種量接種發酵罐，進行好氧深層發酵，發酵溫度 20-30°C，發酵周期 36-45h。
6. 如權利要求4所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 液體發酵培養基包括：蔗糖〇. 5-2%、酵母膏0. 5-2 %、磷酸二氫鉀0. 05-0. 02 %、硫酸鎂 0· 01-0. 10%、氯化鈉 0· 01-0. 10%、碳酸鈣 0· 01-0. 10%、pH5-9。
7. 如權利要求4所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 發酵液再制成液體產品或固體產品使用。
8. 如權利要求7所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 發酵液中加入穩定劑后，經無菌灌裝即為液體產品。
9. 如權利要求7所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 固態產品為：把發酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌后的有機培養基上，混合攪拌均勻，再 放置至少l〇h后包裝成袋。
【文檔編號】A01N63/04GK104195076SQ201410403220
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2012年12月17日 優先權日:2012年12月17日
【發明者】林克明, 尤越 申請人:福建三炬生物科技股份有限公司