專利名稱：一種甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一株甲基營養型芽孢桿菌與具體應用，特別是涉及一株甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04菌及其菌劑與該菌劑在防治植物病害中的應用。
背景技術：
青枯病是一種廣泛分布于熱帶、亞熱帶和某些溫帶地區的世界性病害，是多種農作物減產的主要原因，在我國福建、廣東、廣西、四川、云南、湖南、江西、浙江、上海、江蘇、安徽等省、市(區)都有分布。辣椒的青枯病是辣椒種植過程中最為嚴重的土傳病害之一，由于近幾年塑料大棚辣椒春早熟和秋延遲栽培的迅速發展，辣椒青枯病呈逐步上升趨勢。春早熟栽培從剛進入盛花結果期(一般在5月上旬)開始發生，秋延遲栽培從10 11月份開始發生。一旦發生，損失嚴重，常常造成20% 30%的死亡，嚴重的高達50%以上。秋延遲栽培比春早熟栽培為害更為突出，也是近年來影響辣椒種植的突出問題。柑桔炭疽病是一種世界性的、為害較重的病害。可引起落葉、枝梢枯死，嚴重時會造成連片的果園感染，樹捎全部枯死，損失慘重，2007年廣東的德慶柑橘產區就出現了大面積感染炭疽病，造成嚴重減產，是一種毀滅性的病害。對于輕微的果實感染會造成果實腐爛及落果，帶病果實常在貯運期間發生腐爛，所以又是一種重要的采后病害。柑桔炭疽病對我國的柑橘主產區福建、廣東、江西、四川都造成過嚴重的危害和較大經濟損失，對柑橘產業的發展造成嚴重影響。對于以上病害傳統防治`方法大都采用化學農藥，然而化學農藥效果大都不顯著，卻同時帶來了環境污染、化學殘留等副作用，對農產品的質量造成不良影響。對此，具有污染小、而且對人畜毒性小、環境兼容性好、病蟲害不易產生抗性等優點的生物修復技術應運而生。生物修復劑是利用微生物本身或其代謝物防治和修復病、蟲、雜草等影響的生物制齊 ，其更符合現代社會對農業生產要求。目前我國在生物修復劑生產始終未能形成規模產業。生物修復劑和生物農藥在農藥總量中的占有量只為4%左右，與發達國家相比還有較大差距。近年來，我國開發的生物修復劑、生物農藥及其它高新技術越來越受到國際生物、農藥界的關注。但在品種、劑型、質量和數量方面與發達國家相差甚遠，仍遠遠不能滿足國內外市場的需求。發展生物修復劑、生物農藥產業對保證農業可持續發展、保障人們的生命與健康、保護生態環境都十分重要，將為我國農產品出口創造十分有利的條件，極大地增強我國農產品的國際競爭力。
發明內容
本發明的目的是提供一株對植物青枯病、炭疽病具有防治作用的甲基營養型芽孢桿菌。該甲基營養型芽抱桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC N0.M2012169,該菌株已于2012年5月16日保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏編號CCTCCN0.M2012169。所述的一種甲基營養型芽抱桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCCN0.M2012169，其菌株的16S rRNA基因序列如序列表中SEQ ID NOl所示。本發明的另一目的在于提供所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的用途，其用于防治植物的青枯病或炭疽病。尤其是用于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。本發明的再一目的在于提供前述的甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，即將其發酵，制成發酵液使用。在本發明的較佳實施例中，所述的發酵為液體發酵，以1-10%接種量接種發酵罐，進行好氧深層發酵，發酵溫度20-30°C，發酵周期36-45h。在本發明的較佳實施例中，液體發酵培養基包括:蔗糖0.5-2%、酵母膏0.5-2%、磷酸二氫鉀 0.05-0.02%、硫酸鎂 0.01-0.10%、氯化鈉 0.01-0.10%、碳酸鈣 0.01-0.10%、pH5-9。在本發明的較佳實施例中，發酵液再制成液體產品或固體產品使用。在本發明的較佳實施例中，發酵液中加入穩定劑后，經無菌灌裝即為液體產品。在本發明的較佳實施例中，固態產品為:把發酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌后的有機培養基上，混合攪拌均勻，在放置至少IOh后包裝成袋。本發明的有益效果是:本發明提供了一株對辣 椒的青枯病、柑橘的炭疽病具有較高防治效果的甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC N0.M2012169 及其菌劑。該菌劑具有很好的防治和修復辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩定，無有毒的化學物殘留，不污染農產品和環境， 性價比高和施用方便的優點。本發明將在辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病的防治中發揮重要的作用，應用前景廣闊。
圖1為本發明菌種的顯微照片圖(放大1000倍)
具體實施例方式以下通過具體實施方式
進一步描述本發明:實施例1菌種分離和鑒定甲基營養型芽抱桿菌(Bacillusmethylotrophicus)三炬-04CCTCC N0.M2012169菌的分離:采集福建省南靖縣和溪鎮樂土村六斗山(東經117° I ' 30"，北緯24° 56 ' 20"，海拔360米)的土壤，從該土壤中通過營養瓊脂平板分離獲得一株甲基營養型芽孢桿菌，命名為三炬-04，已于2012年5月16日保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏編號CCTCC N0.M2012169。經鑒定，該菌為甲基營養型芽孢桿菌，具有以下特征:單個細胞
0.7 0.8X2 3微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運動。革蘭氏陽性菌，芽孢0.6
0.9X1.0 1.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養基中生長時，常形成皺醭，需氧菌，適宜生長溫度28 30°C，適宜pH值為5-9。菌種的顯微照片見圖1。菌株三炬-04生理生化特性表型及生理生化特性-酶活、碳源同化
權利要求
1.一種甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylo trophicus)三炬-04,保藏于保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號為CCTCCN0.M2012169。
2.如權利要求1所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04，其特征在于:其菌株的16SrRNA基因序列如SEQ ID NOl所示。
3.如權利要求1所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于:其用于防治植物的青枯病或炭疽病。
4.如權利要求1所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于:其用于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。
5.如權利要求1所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:將其發酵，制成發酵液使用。
6.如權利要求5所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:所述的發酵為液體發酵，以1-10%接種量接種發酵罐，進行好氧深層發酵，發酵溫度20-30 0C，發酵周期 36-45h。
7.如權利要求6所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:液體發酵培養基包括:蔗糖0.5-2%、酵母膏0.5-2%、磷酸二氫鉀0.05-0.02%、硫酸鎂0.01-0.10%、氯化鈉 0.01-0.10%、碳酸鈣 0.01-0.10%、pH5-9。
8.如權利要求5所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:發酵液再制成液體產品或固體產品使用。
9.如權利要求8所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:發酵液中加入穩定劑后，經無菌灌裝即為液體產品。
10.如權利要求8所述的一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于:固態產品為:把發酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌后的有機培養基上，混合攪拌均勻，在放置至少IOh后包裝成袋。
全文摘要
本發明涉及一種甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)三炬-04及其應用，該菌株保藏于保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號為CCTCC No:M2012169。本發明具有很好的防治辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩定，無有毒的化學物殘留，不污染農產品和環境，性價比高和施用方便的優點。其將在植物的青枯病、炭疽病的防治中發揮重要的作用，應用前景廣闊。
文檔編號C12N1/20GK103074272SQ201210550128
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月17日 優先權日2012年12月17日
發明者林克明, 尤越 申請人:漳州三炬生物科技有限公司