實現胚胎裝入冷凍載體的系統、冷凍載體及冷凍保存方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生物技術領域，更確切的說涉及一種實現胚胎裝入冷凍載體的系統、冷凍載體及冷凍保存方法。
【背景技術】
[0002]冷凍技術在人類輔助生殖技術中已經成為不可或缺的環節，隨著冷凍技術的不斷發展，慢速冷凍已經逐漸被玻璃化冷凍所取代。玻璃化冷凍技術通過超高的降溫速度(>2000°C /分鐘)使包裹在高濃度冷凍保護劑中的卵子/胚胎迅速形成玻璃態，避免細胞內冰晶產生損傷細胞，從而大幅度提高卵子/胚胎存活率、復蘇率及發育潛能。
[0003]一般的，通過二個方面可以實現高速降溫過程:一是通過降溫介質的溫度(通過開放載體迅速投入液氮實現)；二是控制包裹卵子/胚胎周圍冷凍保護劑體積越小越好。
[0004]但對于第二點，實際工作中，通過實驗人員的操作將卵子/胚胎連同冷凍保護劑一起轉移至玻璃化載體上，包裹卵子/胚胎周圍冷凍保護劑體積完全是由操作人員的熟練程度決定而無客觀標準。
【發明內容】
[0005]本發明解決的技術問題是提供一種實現胚胎裝入冷凍載體的系統、冷凍載體及冷凍保存方法，以在胚胎裝入玻璃化冷凍載體時減少包裹卵子/胚胎周圍冷凍保護劑體積。
[0006]為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案:
[0007]—種實現胚胎裝入冷凍載體的系統，其包括:培養皿和卵子或胚胎玻璃化冷凍載體，其中該卵子或胚胎玻璃化冷凍載體包括:
[0008]載體本體，與所述載體本體一體相連、拖拉所述載體本體的拖桿，其中所述載體本體為網格承載體，所述網格承載體在縱截面上具有弧度；
[0009]所述卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體的弧度最底面貼合培養皿底部，借助卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的拖桿，該卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體隨拖桿在培養皿底部移動使網格承載體中承載的卵子或胚胎周圍的冷凍液沿拖動方向轉移到培養皿底部。
[0010]進一步的，所述弧度為半圓弧。
[0011]進一步的，網格承載體的網格孔徑為80-100um。
[0012]另外，本發明還公開一種卵子或胚胎玻璃化冷凍載體，其包括:
[0013]載體本體，與所述載體本體一體相連、拖拉所述載體本體的拖桿，其中所述載體本體為網格承載體，所述網格承載體在縱截面上具有弧度。
[0014]進一步的，所述弧度為半圓弧。
[0015]進一步的，網格承載體的網格孔徑為80_100um。
[0016]另外，本發明還公開一種卵子或胚胎玻璃化冷凍保存方法，包括:卵子或胚胎平衡操作步驟、玻璃化冷凍液清洗步驟、胚胎裝入載體步驟，其中，所述胚胎裝入載體步驟包括有:
[0017]步驟11:將卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體置于15%乙二醇+15% 二甲基亞砜的玻璃化冷凍液中進行浸潤；
[0018]步驟12:將完全侵潤的卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體放置在培養皿內；
[0019]步驟13:將玻璃化冷凍操作步驟中的清洗后的胚胎吸入玻璃吸管，再轉移至卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體上，并將玻璃吸管內所有剩余液體全部吹打到網格承載體表面；
[0020]步驟14:拖動卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的拖桿，將該卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體在培養皿底部移動，使網格承載體上胚胎周圍的冷凍液沿拖動方向轉移到培養皿底部；
[0021]步驟15:拖動完成后，將卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體置于液氮中，完成冷凍操作。
[0022]進一步的，步驟12中將卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體放置在培養皿內是以網格承載體的弧度最底面貼合培養皿底部。
[0023]進一步的，卵子或胚胎平衡操作步驟具體為:
[0024]將胚胎置于7.5%乙二醇+7.5% 二甲基亞砜的培養液中放置10分鐘左右；期間胚胎先經歷皺縮的脫水；再經歷從皺縮狀態恢復到原大小的水分子被冷凍保護劑置換的過程。
[0025]進一步的，玻璃化冷凍液清洗步驟具體為:將胚胎置于15%乙二醇+15% 二甲基亞砜的玻璃化冷凍液中，清洗5-10遍直至卵子或胚胎平衡操作步驟中包裹在胚胎周圍的低濃度平衡液清洗干凈。
[0026]與現有技術相比，本發明具有如下有益效果:
[0027]本發明中卵子或胚胎玻璃化冷凍載體包括:載體本體，與所述載體本體一體相連、拖拉所述載體本體的拖桿，其中所述載體本體為網格承載體，所述網格承載體在縱截面上具有弧度；所述卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體的弧度最底面貼合培養皿底部，借助卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的拖桿，該卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體隨拖桿在培養皿底部移動使網格承載體中承載的卵子或胚胎周圍的冷凍液沿拖動方向轉移到培養皿底部。由于卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的所述網格承載體在縱截面上具有弧度，因此，在拖動過程中，流體的靜摩擦力使網格承載體上最底部的冷凍液粘稠液體轉移到干凈無液體的培養皿底部并隨著拖動產生真空吸力；而在網格承載體和培養皿底部形成液體橋梁后，通過虹吸原理可將勢能高、壓強大的網格承載體上的液體繼續壓入培養皿底部；而基于液體表面張力將使所有的液體都有集中的趨勢，產生所有液體都有均勻分布的趨勢而使網格承載體上胚胎周圍的冷凍液體都往最底部的部分集中，進而轉移到培養皿底部，可以在胚胎裝入玻璃化冷凍載體時減少包裹卵子/胚胎周圍冷凍保護劑體積。
【附圖說明】
[0028]圖1為本發明實現胚胎裝入冷凍載體的系統中卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的一種具體實施例結構意圖；
[0029]圖2是本發明中載體本體I為網格承載體的示意圖；
[0030]圖3是本發明根據虹吸原理進行冷凍液轉移的原理示意圖；
[0031]圖4是本發明實現胚胎裝入冷凍載體的系統的初始狀態示意圖；
[0032]圖5是本發明實現胚胎裝入冷凍載體的系統實現減少包裹卵子/胚胎周圍冷凍保護劑的原理示意圖。
【具體實施方式】
[0033]本發明基于玻璃化冷凍方法，具體的，本發明實現胚胎裝入冷凍載體的系統，其包括:培養皿和卵子或胚胎玻璃化冷凍載體，與現有技術不同的，本發明中該卵子或胚胎玻璃化冷凍載體包括:
[0034]載體本體I，與所述載體本體I 一體相連、拖拉所述載體本體I的拖桿2，其中所述載體本體I為網格承載體(參考圖2)，對于不同的胚胎直徑，網格承載體的網格孔徑大小可以變化，例如，本實施例中，網格承載體的網格孔徑為80-100um，隨著胚胎的成長，網格孔徑還可以設置更大，這里不再贅述。
[0035]另外，本實施例中所述網格承載體在縱截面上具有弧度，設置所述弧度主要是利用虹吸原理和液體表面張力的原因在進行胚胎轉移時，可有效減少包裹在胚胎周圍的冷凍液，具體實現時，可以是各種形式的弧度，例如，本實施例中弧度為半圓弧，當然，也可以根據實際狀況調整弧度，這里不再贅述。
[0036]另外，在本實施例中，所述卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體的弧度最底面最好貼合培養皿底部，借助卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的拖桿2，該卵子或胚胎玻璃化冷凍載體的網格承載體隨拖桿2在培養皿底部移動使網格承載體中承載的卵子或胚胎周圍的冷凍液沿拖動方向轉移到培養皿底部。
[0037]下面詳細說明本發明的原理。
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