專利名稱：：人睪丸特異性蛋白50基因表達調節劑篩選系統及篩選其基因表達調節劑的方法
技術領域：
：本發明公開一種人睪丸特異性蛋白50基因表達調節劑篩選系統，同時還提供了篩選人睪丸特異性蛋白50基因表達調節劑的方法，屬于生物醫藥
技術領域：
。
背景技術：
：乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，發病率有逐年上升的趨勢，目前，乳腺癌的治療手段仍以手術為主，放療、化療為輔。隨著社會的發展，乳癌根治術將被保乳手術所代替，更易術后復發及轉移，而現有的化療藥物由于不是特異的作用于腫瘤細胞，在殺傷腫瘤細胞的同時，對正常的細胞也有殺傷作用，因此副作用較大，而且極易產生耐藥性，給患者帶來的痛苦有目共睹。尋找一種特異有效且毒副作用較小的抗腫瘤藥物成為人們亟待解決的問題。本發明涉及的睪丸特異性蛋白50(testesspecificprotein50，以下簡稱TSP50)是最近新發現的一個原癌基因，它編碼一個385個氨基酸的蛋白，且此蛋白與多種絲氨酸蛋白酶有相似的結構，但其接觸反應的殘基Ser被Thr所取代，因此它可能是一個特殊類型的蘇氨酸蛋白酶。在正常情況下其只表達在人的睪丸組織中，且只存在于精原細胞中，而不在精子中，提示其在精子產生的過程中具有重要的作用。而在睪丸以外的其他正常組織中，此基因不表達(Yuan，L.，Shan，J.，DeRisi，D.，Broome，J.，Levecchio，J.，Gal，D.，Vinciguerra，V.，andXuHP.Isolationofanovelgene，TSP50，byahypomethylatedDNAfragmentinhumanbreastcancer.CancerRes.1999，59，3215-3221)。但最近的研究表明，在90％以上的乳腺癌組織中發現TSP50的異常高表達，而且此種表達局限在惡變的上皮細胞中(Shan，J.，Yuan，L，Xiao，Q.，Chiorazzi，N.，Budman，D.，Teichberg，S.，andXu，HP，TSP50，Apossibleproteaseinhumantestis，isactivatedinbreastcancerepithelialcells.CancerRes.2002，62，290-294)。由此我們推測TSP50是一個新的腫瘤-睪丸抗原(cancertestesantigen，CTA)，作為蘇氨酸蛋白酶在乳腺癌發生和精子形成過程中起著重要的作用，它將是乳腺癌診斷和治療的重要靶點。TSP50的表達是受其啟動子控制的，在啟動子上有很多基元(motif)供轉錄因子識別。某些轉錄因子與相應的基元結合后，將抑制下游基因的表達；而某些轉錄因子與相應的基元結合后，將激活下游基因的表達。不同的藥物可能會通過不同的途徑，直接或間接地影響不同的轉錄因子，使其與啟動子上的相應基元結合后，表現出對下游基因表達的激活或抑制。利用此原理我們可以通過一定的手段篩選出調節TSP50表達的藥物。
發明內容本發明公開一種人TSP50基因表達調節劑篩選系統，此篩選系統是一個基因工程細胞的培養體系，此基因工程細胞的宿主細胞中含有一個重組載體，此重組載體是通過將TSP50啟動子連接到載體報告基因上游構建而成，同時還提供了篩選人TSP50基因表達調節劑的方法。本發明用包含人TSP50基因啟動子和報告基因的重組載體轉染宿主細胞，此基因工程細胞可用于篩選人TSP50基因表達調節劑。本發明所用術語“載體”是指本領域熟知的用于將外源目的基因轉入宿主細胞進行復制、轉錄和表達的運載工具，包括各種質粒、噬菌體、粘粒(cosmid，裝配型質粒)、病毒顆粒或噬菌體等。本發明可適用的原始載體含有一個報告基因；報告基因的上游沒有啟動子，但有一個多克隆位點，可供克隆啟動子之用。術語“報告基因”是指一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，即一種其表達產物非常容易被鑒定的基因；把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，在調控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控，篩選得到轉化體。術語“宿主細胞”是指人、鼠和其他哺乳動物細胞。術語“待測樣品”是指通過本發明的方法對之進行人TSP50基因表達調節活性篩選的蛋白質、核酸、碳水化合物或任何其它分子。術語“激動劑”是指當與人TSP50基因啟動子作用時，一種可導致該基因表達上調的分子。激動劑可以包括蛋白質、核酸、碳水化合物或任何其它可作用于人TSP50基因啟動子的分子。術語“抑制劑”是指當與人TSP50基因啟動子作用時，一種可導致該基因表達下調的分子。抑制劑可以包括蛋白質、核酸、碳水化合物或任何其它可作用于人TSP50基因啟動子的分子。本發明提供了一種重組載體，它包含原始載體和人TSP50基因啟動子，其中所述原始載體含有一個報告基因且不含啟動子，所述人TSP50基因啟動子連接到報告基因的上游，且人TSP50基因啟動子的活性和報告基因的表達具有相關性。本發明的重組載體所含的原始載體為質粒，優選pGL3質粒或pEGFP質粒；所述報告基因為熒光素酶基因或熒光蛋白基因。本發明的重組載體還可以包含Neo基因。本發明還提供一種基因工程細胞，它包括用本發明的任一重組載體轉染的宿主細胞。本發明還提供了該宿主細胞在篩選人TSP50基因表達調節劑中的用途。本發明還提供一種篩選人TSP50基因表達調節劑的方法，它包括先將本發明的任一基因工程細胞與待測樣品接觸，再檢測該基因工程細胞內報告基因表達強度的變化。所述報告基因的表達和人TSP50基因啟動子的活性具有相關性。若該基因工程細胞接觸待測樣品后，其胞內報告基因的表達強度降低，則該待測樣品可抑制所述人TSP50基因的表達；若該基因工程細胞接觸待測樣品后，其胞內報告基因的表達強度提高，則該待測樣品可促進所述人TSP50基因的表達。本發明的具體解決方案如下TSP50啟動子本發明使用的TSP50啟動子可通過如下方法獲得提取人基因組DNA，合成TSP50啟動子引物，以人類基因組DNA為模板，用合成的引物進行PCR擴增，從而釣取TSP50啟動子。本發明人設計的TSP50啟動子引物序列為上游端引物5’-GGGGTACCCCCAAGCAGTCC-3’下游端引物5’-GAAGATCTTCCCGGGGTGGC-3’5’端帶有KpnI酶切位點，3’端帶有BglII酶切位點。本發明獲得的人TSP50啟動子序列如圖1所示。重組載體本發明可適用的原始載體含有一個報告基因，其上游沒有啟動子，但有一個多克隆位點，可供克隆啟動子之用。人TSP50基因啟動子可連接到報告基因的上游，并且人TSP50基因啟動子的活性和報告基因的表達具有相關性，用以反映待測樣品對人TSP50基因啟動子表達活性的影響。本發明中使用的原始載體包括但不限于pGL3、PGL2、pEGFP、pd2ECFP-1、PECFP1、pDsRed1-1、pd2EGFP-1、pEGFP-1、pd2EYFP-1、pEYFP-1、pHcRed1-1、pd2EGFP-Basic、pGFP-1等(以上載體均可在Clontech公司購得)，優選pGL3質粒或pEGFP質粒；適用的報告基因包括但不限于紅色熒光蛋白基因、黃色熒光蛋白基因、綠色熒光蛋白基因、藍色熒光蛋白基因、LacZ基因或熒光素酶基因等。總之，只要是符合上述特點的原始載體(報告基因)均在本發明的保護范圍之內。這些載體(報告基因)可通過商業途徑獲得或者使用本領域的公知技術構建獲得(參見實施例3、附圖2)。為了便于建立穩定的轉染體系，還可對上述載體進行改建，使之含有Neo基因。(參見實施例5及附圖2)基因工程細胞由本發明的重組載體轉染的基因工程化宿主細胞也在本發明的保護范圍之內。此類宿主細胞可以是包括人、鼠及其他各種哺乳動物細胞。上文所述載體可通過本領域常規的轉化或轉染技術引入哺乳動物細胞。術語“轉染”(transfection)是指本領域公知的各種將外源核酸序列(如DNA)引入宿主細胞的技術，包括磷酸鈣或氯化鈣共沉淀法、DEAE-dextranmediatedtransfection、lipofection或electroporation等。可適用于本發明的宿主細胞包括但不限于HEK293細胞和HEK293T細胞(人胚胎腎細胞系)、MCF-7細胞(人乳腺癌細胞系)、HT22細胞(小鼠海馬神經細胞系)等。篩選方法本發明提供了一種篩選人TSP50基因表達調節劑的方法。該方法是基于本發明的基因工程細胞內所含報告基因的表達與其上游的人TSP50基因啟動子的活性相關聯。當人TSP50基因啟動子受到刺激或抑制時，其下游報告基因的表達量也會隨之發生變化。通過檢測報告基因表達量的變化(如熒光強度的變化)即可了解人TSP50基因啟動子的活性變化。若待測樣品能調節人TSP50基因啟動子的活性，其便可導致細胞內報告基因的表達量發生變化，進而引起熒光強度等的變化。因此，本發明的基因工程細胞可用于識別人TSP50基因表達的激動劑或拮抗劑。在篩選過程中，本領域的技術人員可分別將用重組載體轉染的宿主細胞和用空質粒轉染的宿主細胞與待測樣品接觸，然后分別測定并比較兩種細胞內報告基因表達強度的變化；若用重組載體轉染的細胞接觸待測樣品后，細胞內的報告基因的表達減弱了，則該待測樣品可能是一種人TSP50基因的表達抑制劑；相反，若基因工程細胞接觸待測樣品后，細胞內的報告基因的表達增強了，則該待測樣品可能是一種人TSP50基因的表達激動劑。通過該方法可對不同的樣品進行平行篩選。因此，該方法可應用于高通量篩選中。藥物組合物和治療方法藥物組合物以及治療人TSP50基因相關疾病如乳腺癌等的方法亦在本發明的范圍之內。所述藥物組合物包括治療有效量的通過本發明的篩選方法獲得的人TSP50基因表達調節劑(包括蛋白質、核酸、碳水化合物或任何其它分子)以及可藥用載體。“可藥用載體”包括溶劑、分散劑(dispersionmedium)、包衣(acoating)、抗細菌和抗真菌劑以及等張劑(isotonicagent)和吸收延遲劑(absorptiondelayingagent)等。本發明的藥物組合物可通過傳統方法制成各種適應于不同給藥途徑的藥物劑型。例如，它可制成口服的膠囊或片劑。膠囊劑可包含任何標準的可藥用物質如明膠、纖維素等。片劑可按傳統方法即將藥物組合物與固相載體以及潤滑劑壓縮制得。所述固相載體包括淀粉和糖斑脫土(sugarbentonite)。本發明的藥物組合物還可制成硬殼片劑(hardshelltablet)或包含捆綁劑(binder)如乳糖或甘露醇、常規填充劑以及tabletingagent的膠囊。本發明的藥物組合物還可通過非腸道途徑給藥。非腸道途徑給藥劑型包括本發明的藥物組合物的水劑、等張鹽溶液或5％的糖溶液以及與其他本領域公知的可藥用賦形劑形成的制劑。環式糊精或其他本領域技術人員所公知的促溶劑均可作為藥用賦形劑來遞呈本發明的藥物組合物。概括地講，通過本發明的方法篩選獲得的人TSP50基因表達調節劑可懸溶于可藥用載體(如生理溶液)中，通過口服或靜脈輸液，或通過皮下、肌下、胸內、腹膜內、直腸內、陰道內、鼻內、胃內、氣道內、肺內注射或輸液等途徑給藥。劑型的選擇受到給藥途徑、制劑類型、患者(病種、病情、體形、體重、體表面積、年齡、性別)、藥物相互影響以及收治醫師的診斷等諸多因素的影響。適用的制劑用量范圍為0.01～100.00mg/kg。用量范圍可隨病人情況與給藥途徑的不同而做相應的調整。其將主要取決于收治醫師的診斷。例如，口服劑量一般要高于靜脈注射劑量。所述劑量可通過本領域公知的經驗優化方法進行調整。將本發明的藥物組合物包裹于適宜的藥物遞呈載體(如聚合微粒體或輸入設備)可提高給藥，特別是口服給藥的效率。本發明的藥物組合物的活性可通過體外(invitro)和體內(invivo)實驗進行評價。簡而言之，本發明的藥物組合物的藥理活性反映在其調節人MDR1基因表達活性的能力上。在體內實驗中，所述藥物組合物被注射入動物(如小鼠模型)體內以評價其藥理活性。在此基礎上，合適的劑量范圍和給藥途徑遂得以確定。圖12KbTSP50啟動子區的核苷酸序列圖2含人TSP50啟動子的重組質粒構建示意3不同藥物對TSP50-p-pGL3轉染細胞熒光素酶活性影響。Control未用任何藥物刺激BMP2用骨形成因子210ng/ml刺激，與對照組相比無明顯刺激TSP50啟動子活性OX用增食欲素(orexin，OX)1nM/ml刺激，與對照相比可明顯刺激TSP50啟動子活性PAO用鈣調蛋白抑制劑PAO(pherylarsinoxide，PAO)1μM/ml刺激，與對照相比可顯著抑制TSP50啟動子活性具體實施例方式為了便于理解本發明，特列舉以下實施例。其作用應被理解為是對本發明的闡釋而非對本發明的任何形式的限制。上文所列各參考文獻均以全文引入本發明作為參考。實施例1人基因組DNA的提取取肝素抗凝的人外周血3ml，3000rpm4℃離心20分鐘，吸掉上層血漿后加5倍體積無菌雙蒸水，混勻，室溫放置5-10分鐘。4000rpm，4℃，離心20分鐘，棄上清。加5ml生理鹽水，使白細胞恢復等滲環境。4000rpm，4℃，離心15分鐘，棄上清，獲取白細胞層。在白細胞中加入5ml消化緩沖液(TES液)(15mMTris-cl，15mMEDTA，15mMNacl，0.5％SDS)，加蛋白酶K至終濃度為0.1mg/ml，充分混勻，50℃水浴3-5小時(4.5h)。冷卻后加等體積Tris酚抽提兩次，氯仿∶異戊醇(24∶1)抽提兩次。小心吸取上清，加1/10體積的3M乙酸鈉(pH5.2)，2.5倍體積的無水乙醇，沉淀DNA。實施例2TSP50啟動子區的釣取1.引物的設計根據文獻報道從GenBank中查找TSP50啟動子區的堿基序列，根據此序列設計PCR擴增用引物，從而釣取TSP50啟動子。其引物序列如下上游端引物為5’-GGGGTACCCCCAAGCAGTCC-3’；下游端引物為5’-GAAGATCTTCCCGGGGTGGC-3’。5’端帶有KpnI酶切位點，3’端帶有BglII酶切位點。2.PCR擴增、電泳及回收以人類基因組DNA為模板，用以上合成的引物進行PCR擴增。PCR反應條件為94℃，5min；94℃，1min，62℃，45sec，72℃，1min，30個循環；72℃，10min。將上述PCR產物用1％的瓊脂糖凝膠進行電泳并回收1.7Kb條帶。3.PCR產物的TA克隆及篩選將上述回收產物與TA克隆載體連接，方法按PromegaTA克隆試劑盒說明進行，4℃過夜后，取1μl連接產物轉化感受態的HB101細菌，將細菌涂在事先涂有IPTG和X-gal的選擇培養基上，37℃孵箱培養過夜。次日挑取白色菌落，接種至2ml的LB培養基中，37℃振搖培養過夜，提取質粒，用KpnI和BglII酶切鑒定，將酶切鑒定陽性的質粒進行測序。實施例3TSP50-p-pGL3及TSP50-p-pEGFP重組質粒的構建將上述TA克隆細菌進行大量擴增后提取質粒，用KpnI和BglII酶切，回收1.7Kb片段；同時將pGL3用KpnI和BglII酶切，回收酶切后的質粒，將回收后的片段和pGL3質粒用TAKARA的連接酶I進行連接，在構建TSP50-p-pEGFP重組質粒時，將陽性TA克隆質粒和pEGFP載體分別用EcoRI酶切并回收片段進行連接，連接方法按TAKARALigationKit說明書進行，16℃連接4小時后，將連接產物按上述方法處理后電轉化DH5α，將細菌涂至具有氨芐青霉素的LB培養基上，37℃孵箱培養過夜。挑取菌落接種到2ml的LB培養基中，37℃振搖培養過夜，次日提取質粒，用KpnI和BglII或EcoRI酶切鑒定，將酶切鑒定陽性的質粒進行測序。實施例4細胞瞬時轉染及熒光檢測(1)MCF-7細胞的轉染將MCF-7細胞用10％FCS的DMEM培養基傳代培養，將生長良好的細胞以5×105個/ml的密度接種24孔板，每孔0.5ml，37℃，5％CO2孵箱培養過夜，次日，用無血清DMEM培養基稀釋質粒DNA，以每孔200μlDMEM、0.6μgTSP50-p-pGL3(TSP50-p-pEGFP重組質粒或空質粒)、0.2μgCMV-β-gal的比例稀釋，然后加入2.4μlTransfast轉化試劑，渦旋混勻，室溫靜置15-20分鐘，將細胞用PBS洗一次后，將質粒及轉化試劑混合物加入細胞孔，37℃培養1小時后，每孔加入1ml完全培養基，繼續培養12小時后加入刺激物，繼續培養24小時后用熒光化學發光儀測綠色熒光強度或裂解細胞，測熒光素酶活性。(2)熒光素酶活性的測定將24孔板中的細胞收集至EP管中，5000rpm，離心5min，棄上清，每管加入1mlPBS，充分振蕩使細胞懸浮，5000rpm，離心5min，棄上清，在每個EP管中加入100μlExtractionBuffer(1％TritonX-100，15mMMgSO4，4mMEGTA，1mMDTT，25mMglycylglycine)，渦旋振蕩1分鐘，冰上放置20min，待用。在測定管中加入5μlAssaycocktail(30mMATP，0.1MKH2PO4(pH7.4)，0.1MMg2SO4)，再加入45μl細胞裂解液，最后每管加入100μl熒光素液(0.1MKH2PO4，50μg/ml的熒光素)，立即用化學發光儀(Lumat9507)測定熒光素酶活性。(3)β-半乳糖苷酶活性的測定在96孔酶標板中加入37.5μlβ-gal緩沖液(0.5MNa2HPO4，1MNaH2PO4，3MKCl，1MMgCl2，0.34％2-melcaptalethanol)，12.5μlONPG，20μl細胞裂解液，振蕩混勻，37℃避光反應直至液體變黃，用酶標儀測定OD420值。用此數值來標準化熒光素酶活性，以修正由于轉染效率的差異而引起的誤差。實施例5重組質粒的改建用BglII及SalI將pKO質粒中的Neo基因表達元件切下，連接入用BamHI及SalI酶切后的重組質粒，使重組質粒中含有Neo基因，便于穩定轉染體系的建立。實施例6哺乳動物細胞穩定轉染及熒光檢測將MCF-7細胞接種到直徑60mm的培養板中，次日，將3μg改建后的重組質粒，用TransFast轉化試劑轉染MCF-7細胞，繼續培養24小時后全換液，繼續培養24小時后胰酶消化并加入G418，最終濃度為400μg/ml，每2～3天觀察并更換篩選培養基1次。2周左右克隆形成后，挑選細胞克隆30個，分別入6孔板。含G418(200μg/ml)的培養基維持培養1周，將克隆有限稀釋后加入96孔板，使每個孔中只有3個細胞，繼續培養直至克隆長至滿孔，取出部分細胞檢測熒光素酶活性，將熒光素酶活性較高的孔繼續G418(200μg/ml)維持擴大培養，用于樣品庫的篩選。實驗例1用熒光素酶報告基因模型對待測樣品進行篩選將重組質粒TSP50-p-pGL3-neo及空質粒pGL3-Basic-neo穩定轉染的MCF-7細胞分別用含10％小牛血清的DMEM培養基進行培養，待其呈對數生長時，將其用胰酶消化后以含血清DMEM培養基稀釋并均勻加入24孔細胞培養板，培養24小時后，棄上清，每孔加入250ul含1％血清的DMEM培養基，同時加入待測樣品，繼續培養24小時后，收集細胞放至EP管中，5000rpm離心5分鐘，棄上清，用PBS洗一次后，每管加入100ulExtractionBuffer(1％TritonX-100，15mMMgSO4，4mMEGTA，1mMDTT，25mMglycylglycine)，渦旋振蕩1分鐘，冰上放置20min，待用。在測定管中加入5μlAssaycocktail(30mMATP，0.1MKH2PO4(pH7.4)，0.1MMg2SO4)，再加入45μl細胞裂解液，最后每管加入100μl熒光素液(0.1MKH2PO4，50μg/ml的熒光素)，立即用化學發光儀(Lumat9507)測定熒光素酶活性，將重組質粒轉染孔的熒光素酶活性用空質粒轉染孔的熒光素酶活性進行標準化。結果見圖2，圖中Control未用任何藥物刺激BMP2用骨形成因子210ng/ml刺激，與對照組相比無明顯刺激TSP50啟動子活性OX用增食欲素(orexin，OX)1nM/ml刺激，與對照相比可明顯刺激TSP50啟動子活性PAO用鈣調蛋白抑制劑PAO(pherylarsinoxide，PAO)1μM/ml刺激，與對照相比可顯著抑制TSP50啟動子活性實驗例2用GFP報告蛋白基因篩選模型對待測樣品進行篩選將重組質粒TSP50-p-pEGFP及空載體pEGFP穩定轉染的MCF-7細胞分別用含10％小牛血清的DMEM培養基進行培養，待其呈對數生長時，將其用胰酶消化后以含血清DMEM培養基稀釋并均勻加入96孔細胞培養板，培養24小時后，棄上清，每孔加入100ul含1％血清的DMEM培養基，同時加入待測樣品，繼續培養24小時后，用博麥潔公司的Fluostar檢測熒光強度，將重組質粒轉染孔的熒光強度用相應的空質粒轉染孔的熒光強度進行標準化。權利要求1.一種人睪丸特異性蛋白50基因表達調節劑篩選系統，此篩選系統是一個基因工程細胞的培養體系，此基因工程細胞的宿主細胞中含有一個重組載體，此重組載體是通過將TSP50啟動子連接到載體報告基因上游構建而成。2.權利要求1所述的篩選系統，其特征在于其重組載體包含一個報告基因，在報告基因上游除插入的人TSP50基因啟動子外無其它啟動子，且人TSP50基因啟動子的活性和報告基因的表達具有相關性。3.權利要求1所述的篩選系統，其特征在于其原始載體為含有報告基因的載體，但其上游不含有啟動子，卻含有多克隆位點的載體如pGL3質粒或pEGFP質粒。4.權利要求1所述的篩選系統，其特征在于重組載體還可以包含Neo基因。5.一種含有外源重組載體的基因工程細胞，其特征在于，它是用權利要求1-4中任一權利要求所述的重組載體轉染的宿主細胞。6.權利要求5的宿主細胞在篩選人TSP50基因表達調節劑中的用途。7.權利要求6的用途，其中所述人TSP50基因表達調節劑為激動劑。8.權利要求6的用途，其中所述人TSP50基因表達調節劑為抑制劑。9.一種篩選人TSP50基因表達調節劑的方法，它包括先將權利要求5所述的基因工程細胞培養體系中加入待測樣品；再檢測細胞內報告基因表達強度的變化，其特征在于，所述報告基因的表達和人TSP50基因啟動子的活性具有相關性。10.權利要求9的方法，其特征在于，若所述基因工程細胞接觸待測樣品后，其胞內報告基因的表達強度降低，則該待測樣品可抑制人TSP50基因的表達。11.權利要求9的方法，其特征在于，若所述基因工程細胞接觸待測樣品后，其胞內報告基因的表達強度升高，則該待測樣品可促進人TSP50基因的表達。12.一種人TSP50基因表達調節劑，在制備治療TSP50表達異常相關性疾病的藥物中應用。全文摘要本發明涉及一種人睪丸特異性蛋白50(TSP50)表達調節劑的篩選模型和篩選TSP50基因表達調節劑的方法，該篩選系統包含一種含有外源多核苷酸的重組載體以及由該重組載體轉化或轉染的宿主細胞，該重組載體包含原始載體和人TSP50基因啟動子，其中所述原始載體含有一個報告基因且不含啟動子，所述人TSP50基因啟動子連接到報告基因的上游，且人TSP50基因啟動子的活性和報告基因的表達具有相關性。本發明還公開了構建該篩選系統的方法及其用途。此篩選模型具有較高的靈敏度，操作簡便，可用于高通量篩選。本發明的篩選系統可用于篩選人TSP50基因表達調節劑。文檔編號C12N15/63GK1824773SQ20051001659公開日2006年8月30日申請日期2005年2月25日優先權日2005年2月25日發明者鮑永利,李玉新,孟祥穎,烏垠,徐浩鵬,單繼東,王淼,易靜雯申請人:東北師范大學遺傳與細胞研究所