專利名稱：一種能同時富集沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種能同時富集培養沙門菌(Salmonella spp.)、大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的培養基。
背景技術：
食品中污染的病原細菌是引起食源性疾病的主要因素之一。來自國家食源性疾病監測網的統計資料顯示近十年來，由微生物引起的食品中毒事件的數量與涉及的人數最多，其中副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)、沙門菌(Salmonella spp.)和大腸桿菌(Escherichia coli)是最常見的病原菌[1]，因此，快速檢測與鑒定食源性病原細菌，對及時有效地控制疾病傳播，預防食物中毒事件的發生非常重要，一些快速檢測技術也迅速發展。但是，無論是傳統的培養方法，還是以現代免疫學或分子生物學技術為基礎的快速檢測方法，常常都需要對病原細菌進行富集增菌[2]。例如，在國家標準中，檢測食品中的沙門菌時，需要使用蛋白緩沖水培養基、氯化鎂孔雀綠增菌液、四硫磺酸鈉煌綠增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液等進行富集與增菌；檢測病原性大腸桿菌時，使用營養肉湯、腸道菌增菌肉湯進行增菌；檢測葡萄球菌時，使用7.5％氯化鈉肉湯增菌[3]。然而，通常一種培養基，甚至多種培養基才能富集一種病原細菌。這樣，象多重PCR、基因芯片等能同時檢測多種病原菌的快速檢測技術，常常需要使用多種培養同時進行富集增菌，操作繁瑣，檢測成本高，從而限制了這些技術的推廣和應用。因此，研究開發能同時富集，特別是能選擇性富集多種病原細菌的培養基具有十分重要的意義和應用價值。目前常用的能同時非選擇性地富集多種病原細菌的培養基主要有蛋白緩沖水、胰酶大豆肉湯(trypticase soy broth)和營養肉湯，而能同時富集多種病原細菌的選擇性培養基很少，例如，通用預增菌肉湯(universal pre-enrichment broth)就是其中的一種，它能同時富集沙門菌、大腸桿菌和單核增生李斯特菌[4-6]。關于能夠同時富集培養食品中常見的沙門菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的培養基目前還未見報道。
主要參考文獻[1]劉秀梅，陳艷，王曉英，等.1992～2001年食源性疾病暴發資料分析——國家食源性疾病監測網，衛生研究，2004(6)725-727. 陳福生，高志賢，王建華.食品安全檢測與現代生物技術.北京化學工業出版社，2004. GB4789-94.食品衛生微生物學檢驗.北京中國標準出版社，1994. Jiang J，Larkin C，Steele M，et al. Evaluation of universal pre-enrichment broth for the recovery of foodbornepathogens from milk and cheese.Journal of Dairy Science，1998，812798-2803. Zhao T，Doyle M P.Evaluation of universal pre-enrichment broth for growth of heat-injured pathogens.Journal of Food Protect，2001，64(11)1751-1755. Nam H M，Murinda S E，Nguyen L T，et al.Evaluation of universal pre-enrichment broth for isolation ofSalmonella spp.，Escherichia coli O157H7，and Listeria monocytogenes from dairy farm environmentalsamples.Foodborne Pathogenic Disease，2004，1(1)37-44.
發明內容
本發明的目的是提供一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基。
為達到上述目的，本發明采取的技術方案是本發明是一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基，其主要組分和含量為氯化鈉25～75g，磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)5～15g，磷酸二氫鉀0.5～3.0g，蒸餾水1000mL，pH7.0～7.5。
本發明是一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基，其組分和含量為蛋白胨5～20g，牛肉膏1～5g，氯化鈉25～75g，磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)5～15g，磷酸二氫鉀0.5～3.0g，蒸餾水1000mL，pH7.0～7.5。
本發明是一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基，其組分和含量為蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉50g，磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)9g，磷酸二氫鉀1.5g，蒸餾水1000mL，pH7.2。
采用上述方案后，由于本發明在培養基中含有磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)和磷酸二氫鉀的緩沖體系，所以針對食品樣品復雜的酸堿性環境，可防止增菌過程中pH值的劇烈變化，有利于沙門菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌快速的增殖，大大減少假陰性，提高檢測結果的準確性。同時，考慮到沙門菌和大腸桿菌的競爭力強而耐鹽性低，金黃色葡萄球菌的競爭力弱而耐鹽性高，本發明優化了培養基中氯化鈉的含量，從而使三種細菌能夠保持相對一致的增殖速度。
本發明能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，彌補了國內外同類培養基的空白。該培養基同時富集培養三種菌，可以提高檢測效率，節約檢測成本。
具體實施例方式
實施例1一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基，其組分和含量為蛋白胨5g、牛肉膏1g、氯化鈉25g、磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)5g、磷酸二氫鉀0.5g，蒸餾水1000mL，pH7.0。
實施例2一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基，其組分和含量為蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉50g、磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)9g、磷酸二氫鉀1.5g，蒸餾水1000mL，pH7.2。
實施例3一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基，其組分和含量為蛋白胨15g、牛肉膏5g、氯化鈉75g、磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)15g、磷酸二氫鉀3.0g，蒸餾水1000mL，pH7.5。
本發明培養基配制過程準確稱取上述各組分，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，用1mol/LNaOH調pH值至7.2，121℃高壓滅菌15min備用。
鑒定方法將10cfu的沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，同時接種于10mL牛奶樣品中，加入90mL本發明培養基，經37℃培養16h后，采用WS平板和Baird-Parker平板進行計數。WS平板上出現藍綠色菌落的為沙門菌，桔黃(紅)色菌落為大腸桿菌，Baird-Parker平板上的黑色菌落為金黃色葡萄球菌。同時運用多重PCR進行檢測，出現目的擴增條帶的為陽性，否則為陰性。
權利要求
1.一種能同時富集培養沙門菌(Salmonella spp.)、大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的培養基，其配方如下蛋白胨5～20g，牛肉膏1～5g，氯化鈉25～75g，磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)5～15g，磷酸二氫鉀0.5～3.0g，蒸餾水1000mL。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于所述氯化鈉為50g，所述磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)為9g，所述磷酸二氫鉀為1.5g。
3.根據權利要求1和2所述的培養基，其特征在于將配方各成分加熱溶解后，用1mol/LNaOH調節pH到7.2，121℃高壓滅菌15min備用。
全文摘要
本發明涉及一種能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基。食源性病源細菌是引起食物中毒的主要原因之一，快速檢測與鑒定它們，有利于有效地預防食物中毒，控制疾病傳播和蔓延，因此，相應的快速檢測技術發展迅速。但是，在同時富集多種病原細菌的培養基研究方面相對滯后。目前僅有通用預增菌肉湯被報道為可以同時選擇性地富集沙門菌、大腸桿菌和單核增生李斯特菌。本發明提供的能同時富集培養沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的培養基，其組分和含量為蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉50g，磷酸氫二鈉(Na
文檔編號C12R1/19GK101045909SQ20061001864
公開日2007年10月3日 申請日期2006年3月27日 優先權日2006年3月27日
發明者陳福生, 許一平 申請人:陳福生, 許一平