含有色氨酸的肽的制作方法

專利名稱：：含有色氨酸的肽的制作方法
技術領域：
：本發明涉及含有色氨酸的肽。
背景技術：
：腦內的血清素(serotonine)水平己與情緒、機警、警覺、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制、食欲和性行為相關聯。存在許多出版物，其中腦血清素水平的改變與天然氨基酸L-色氨酸(Trp或W)的可用度相關。因為這種關聯，提高血衆色氨酸水平的方法受到大量關注。已有報道，每個個體1克/天左右的色氨酸量產生臨床顯著的作用(Markusetal.，Am.JClin.Nutr2005;81,1026-1033)。提高血漿色氨酸水平的一種方法涉及消耗富含乳清蛋白(wheyprotein)a-乳白蛋白(lactalbumin)的蛋白質制劑。a-乳白蛋白制劑是可容易獲得的，并具有相對高的色氨酸濃度。然而，其中提供o!-乳白蛋白的途徑(見例如DE4130284和JP2279700)并未考慮腦色氨酸和血清素水平的主要決定因子不只是血漿色氨酸濃度，而是所謂的Trp/LNAA比例(FernstromandWurtman.Science1971,173,149-152)。該Trp/LNAA比例代表血漿中色氨酸相對于大中性氨基酸(LargeNeutralAminoAcid,LNAA;即酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的和)的摩爾比例。這些LNAA與色氨酸競爭攝入大腦，推測是因為使用了相同的跨越血-腦屏障的轉運機制。因此，提高腦色氨酸濃度的最有效途徑是供應具有高Trp/LNAA比例的制備物。大量出版物a.o.WO02/46210涉及從a-乳白蛋白制備具有提高的Trp/LNAA比例的肽級分。顯然，游離色氨酸(即游離氨基酸)的使用會提供最簡單和最便宜的途徑，用于提供具有高Trp/LNAA比例的制劑。然而，在許多國家中，存在嚴格管制游離色氨酸供應的立法。游離色氨酸在其多種應用形式中的最大允許水平在各個國家不同。為了以更自然的方式供應額外的膳食色氨酸，更近期的途徑著眼于提供富含色氨酸的蛋白質。如所述的，a-乳白蛋白及其水解產物已作為提高血漿色氨酸水平的安全選擇獲得普及。然而，a-乳白蛋白作為色氨酸富集制劑起點的用途伴隨著最大Trp/LNAA比例和成本方面的缺點。a-乳白蛋白和0-乳球蛋白形成組成乳清的主要蛋白質。因為在工業規模上完全分離g;-乳白蛋白和/3-乳球蛋白是困難的，所以意味著成本有效的a-乳白蛋白制劑會同樣含有/3-乳球蛋白。盡管o;-乳白蛋白具有5.3%的摩爾色氨酸含量，但是/3-乳球蛋白的色氨酸含量僅為2%。盡管a-乳白蛋白具有0.11的摩爾Trp/LNAA比例，但是/5-乳球蛋白具有不多于0.04的摩爾Trp/LNAA比例。因此，顯然/3-乳球蛋白對a-乳白蛋白制劑的任何污染會顯著降低最終產物的Trp/LNAA比例。考慮到對能夠調控腦血清素水平的制劑的廣泛興趣，人們需要下述改進的生產方法，所述生產方法用于生產可在多種食物和營養藥物制品中廣泛應用的、具有高Trp/LNAA比例的蛋白質和肽制劑。發明簡述本發明涉及生產組合物的工藝，所述組合物包含水溶性的、含色氨酸的肽，優選地含有至少兩種水溶性的、含色氨酸的肽，并具有多于0.15、優選地在0.15和1.8之間的Trp/LNAA比例，所述工藝包括水解溶菌酶，優選地水解雞卵溶菌酶(henegglysozyme)，以制備具有5和45之間DH的水解產物，并任選地去除含精氨酸或賴氨酸的肽中的部分。優選地，所述組合物包含AW或GNW，更優選地包含AW和GNW。所述水解產物優選地具有10和40之間的DH。本發明還涉及下述組合物，其包含至少兩種不同的水溶性肽，并且其中組合物的摩爾Trp/LNAA比例至少為0.15，優選地在0.15和1.8之間。優選地所述組合物包含AW或GNW，優選地包含AW和GNW，最優選地包含AW和GNW，其中AW與GNW的摩爾比例在1比2至U10比1之間，優選地在1比2和5比1之間。另夕卜，本發明提供了富含色氨酸的水溶性肽的組合物。有利地，本發明還涉及包含至少兩種不同的二肽或三肽的組合物，其中選自二肽或三肽的兩種肽以占二肽和三肽總量至少5mo1%的量存在，且在所述組合物中，與肽結合的色氨酸中多于30mol%、優選地多于40moP/。、更優選地多于50mo1。/。、進一步更優選地多于60mol%、仍然更優選地多于70mol%和最優選地多于80mol%以二肽或三肽的形式存在，優選地所述組合物具有多于0.15、優選地在0.15和1.8之間的Trp/LNAA比例。與肽結合的色氨酸表示作為肽中的氨基酸存在的色氨酸。該組合物優選地是溶菌酶水解產物或經純化的溶菌酶水解產物。在本發明的一個實施方案中，溶菌酶水解產物尤其富含精氨酸殘基。精氨酸不屬于大中性氨基酸(LNAA)組，但是已知其胰島素刺激效應。我們發現根據本發明的水解產物能夠體內產生高血漿Trp/LNAA比例。非常驚人的是發現在血漿中檢測的Trp/LNAA比例比水解產物的Trp/LNAA比例更高。本發明的又一優點是含Tip的肽非常小，從而即便是與具有較不優良的Trp/LNAA比例的富含蛋白質的產物組合時，水解產物仍立即產生高的血漿Trp/LNAA比例。組合物還可含有游離的色氨酸。優選地，水解產物不含有多于lwtM(以干物質計)的游離色氨酸。本發明的另一方面是下述組合物用于改善情緒、認知、食欲、機警、警覺、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的用途，或在用于情緒、認知、食欲、機警、警覺、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的食物、寵物食物、飼料、膳食補劑或營養藥物組合物的制備中作為成分的用途，所述組合物是通過水解溶菌酶、優選地水解雞卵溶菌酶獲得的組合物，或是根據本發明的另一組合物。除了溶菌酶水解產物以外，組合物還含有碳水化合物以及針對"腦"營養、釋放壓力或抑郁或改善機警、情緒、認知或睡眠模式的推薦化合物。另外，本發明涉及AW、SW或GNW用于改善情緒、認知、食欲、機警、警覺、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的用途，或在用于情緒、食欲、食欲、機警、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的食物、飼料、膳食補劑或營養藥物組合物的制備中作為成分的用途。本發明公開了下述食物(包括嬰兒配方)、寵物食物、詞料、膳食補劑或營養藥物組合物，它們包含根據本發明的工藝生產的組合物或根據本發明的組合物，所述組合物包含GNW、SW或AW作為存在的肽。根據又一實施方案，提供了水溶性含色氨酸的肽或本發明的組合物用于在攝取肽或蛋白質后90分鐘內、優選地60分鐘內、最優選地30分鐘內提高血漿中Trp/LNAA比例的用途，或用于制備下述營養藥物組合物的用途，所述營養藥物組合物用于在攝取肽后90分鐘內、優選地60分鐘內、最優選地30分鐘內提高血漿中的Trp/LNAA比例。發明詳述本發明提供了包含以肽形式存在的色氨酸的組合物，其非常適用于在非常短的時間間隔中提供血漿中Trp/LNAA比例的有效提高。我們注意到包含色氨酸的二肽和三肽有利地幫助該提高。在本發明的一個實施方案中，在工業過程中用酶(預)水解溶菌酶，優選地雞卵溶菌酶，即(雞卵)溶菌酶優選地以水解產物的形式提供。以水解產物形式提供時，含色氨酸的肽的胃腸吸收被大幅促進。在本申請的另一實施方案中，雞卵溶菌酶被轉化為水解產物，其中包含帶正電荷的精氨酸和賴氨酸殘基的肽的水平被降低。后一水解產物的特征是高于0.14的摩爾Trp/LNAA比例。還在本申請的另一實施方案中，雞卵溶菌酶被轉化為包含肽群體的水解產物，所述肽群體中多于50%、優選地多于60%、更優選地多于75%的存在的肽具有低于500Da的分子量。這具有下述條件水解產物中存在的肽的分子量分布如本申請的材料和方法章節中所述完成。后一實施方案的一個重要優點是包含在二肽和三肽中的色氨酸在口服消耗后立即跨越腸壁轉運進入血流中。因此，血漿色氨酸水平提高，幾乎立即伴有對腦血清素水平的直接影響。本申請實施例6中展示的數據顯示，以這類二肽和三肽形式存在的色氨酸殘基非常快速地導致高Trp/LNAA比例。在這一方面，以這些二肽和三肽形式存在的色氨酸殘基似乎比游離的色氨酸甚至更有效。根據本工藝獲得至少具有0.15的分子Trp/LNAA比例的水溶性肽級分，只要如本申請的材料和方法章節中所述進行水解產物的氨基酸分析即可。以二肽和三肽形式提供色氨酸的另一重要優點還在于這些肽的胃腸吸收迅速到使得它們能夠與含有蛋白質的食物如乳制品(其天然地具有較不優良的Trp/LNAA比例)組合消耗，并仍然導致在消耗后90分鐘內，優選地60分鐘內，更優選地30分鐘內的周期中有效提高血漿中的Trp/LNAA比例。因此，本發明提供了本發明組合物(例如包含色氨酸的水溶性肽)用于在攝取肽后90分鐘內、優選地60分鐘內、最優選地30分鐘內獲得提高的血漿Trp/LNAA比例的用途，或用于制備下述營養藥物組合物的用途，所述營養藥物組合物用于在攝取肽后90分鐘內、優選地60分鐘內、最優選地30分鐘內獲得提高的血槳Trp/LNAA比例。優選地，蛋白質或含蛋白質食物的消耗與水溶性肽同時或幾乎同時。提高的Trp/LNAA比例表示與消耗或攝取本發明的組合物之前的情況相比該比例的提高。"蛋白質"或"多肽"在本文中被定義為包含多于30個氨基酸殘基的鏈。"肽"或"寡肽"在本文中被定義為通過肽鍵連接的至少兩個氨基酸的鏈。術語"肽"和"寡肽"被認為是同義的(如通常所認為的那樣)，且每種術語可根據上下文的需要交換使用。"水溶性"肽是在5.0的pH下可溶于水的肽。本文中所有(寡)肽和多肽式根據通常的實踐從左到右以氨基端到羧基端的方向書寫。本文中使用的氨基酸的單字母密碼是本領域通常己知的，并可見于Sambrook，etal.(MolecularCloning:ALaboratoryManual,2nded.ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989)中。蛋白質水解產物、水解產物或經水解的蛋白質表示通過蛋白質的酶水解形成的產物，富集的水解產物是下述蛋白質水解產物級分，其例如富含選定的肽，或其中肽或多肽已從水解產物中被去除。因此，富集的水解產物優選地是肽的混合物(或肽混合物)。因此，本發明的肽混合物是至少兩種，優選地至少三種，更優選地至少四種含色氨酸的肽的混合物。更優選地，混合物包含肽的群，所述群的多于50%、優選地甚至多于60%、最優選地多于75%的存在的肽具有低于500Da的分子量。含色氨酸的肽表示包含至少一個L-色氨酸氨基酸殘基的肽。Trp/LNAA比例表示色氨酸相對于其它大中性氨基酸(LNAA;即酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的總和)水平的摩爾比例。除了血漿Trp/LNAA比例外，Trp/LNAA比例僅涉及與肽結合的氨基酸。因此，游離的色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸不被考慮進Trp/LNAA比例中。與肽結合的氨基酸是屬于肽部分的氨基酸，并且不是游離的氨基酸。Tyr/LNAA比例表示酪氨酸相對于支鏈氨基酸(BCAA;即亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的總和)水平的摩爾比例。優選地，Tyr/BCAA比例高于O.l，優選地高于0.12。優良的睡眠開始和質量被定義為在上床后45分鐘內進入的靜態睡眠。情緒被定義為精神的興奮狀態，并優選地使用情緒狀態類型問巻法(ProfileofMoodStatesquestionnaire)測量(見本申請的實施例6)。認知被定義為與例如解決問題、學習、記憶和語言這類領域相關的組合技能。食欲被定義為進食的期望，其通過感覺或饑餓刺激。機警被定義為精神的注意或警惕狀態，優選地使用MackworthClock測試和臨界追蹤任務(CriticalTrackingTask)測量(見本申請的實施例9)。抗焦慮(anxiolytic)作用是導致釋放恐懼、不安(apprehension)或擔憂的感覺的作用。抑郁被定義為一種精神狀態，特征是嚴重和持久的喪失越快的感覺。術語性行為在本文中被用作性欲(libido)的同義詞。在WO02/46210中描述了提高乳清蛋白水解產物中色氨酸水平的方法。在使用的方法中，首先在酸性pH下用一種或多種酸性蛋白酶水解乳清，優選地用胃蛋白酶、凝乳酶(rennin)、酸性真菌蛋白酶、凝乳酶(chymosin)、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶或無花果蛋白酶水解乳清。優選的孵育條件在pH1.5和3.5之間，并對其進行選擇，以產生具有疏水性質的肽。水解有意地以下述方式進行，所述方式使得色氨酸殘基被摻入大的疏水肽中。小的、更溶于水的肽中存在少得多的色氨酸。在隨后的加工步驟中，pH被提高至4.0到6.0，以促進這些大的、含色氨酸的肽沉淀，從而便于從乳清水解產物中選擇性回收它們。然而，所述工藝具有若干缺點。色氨酸作為大的酸性不溶肽中的存在被獲得，這意味著例如在酸性飲品中的應用會有問題。另外，由于色氨酸存在于相對大的肽中的事實，色氨酸進入血的吸收會被延遲，從而限制了制劑作為食物或飲料成分(特別是與其它蛋白質組合)的應用可能性。使用這類大肽的另一缺點是這類肽可造成變應性反應。對于乳清蛋白的這類反應是公知的。本發明通過公開簡單的水解工藝克服了這些缺點，所述工藝用工業可獲得并且特征是高Trp/LNAA比例的蛋白質開始。本發明的工藝具有以蛋白質色氨酸為基礎多于30%的色氨酸產率，并產生包含色氨酸的水溶性肽組合物。色氨酸殘基的較大部分包含在二肽和三肽中這一事實意味著立即攝入血流中。如即將公開的，該特性允許在多種食物或營養藥物制品中摻入所述水解產物。非常驚人地是本發明還公開了通過口服消耗，根據本發明的水解產物能夠產生比實際的水解產物Trp/LNAA比例更高的血漿Trp/LNAA比例。最后，含色氨酸的肽混合物還有低抗原性的特征。根據本發明，雞卵溶菌酶被用作便利的底物，用于提供具有高Trp/LNAA比例的制劑。溶菌酶以3-4%的濃度存在于卵白中。通過利用其格外高的等電點，使用簡單的陽離子色譜純化步驟將其從卵白中工業分離。得到的產物幾乎是純的，并且該工業可獲得的產物具有7.8%的分子色氨酸含量和至少0.15的分子Trp/LNAA比例。因此，純溶菌酶具有比純a-乳白蛋白和/或/3-乳白蛋白更高的Trp/LNAA比例。因此，根據本發明的溶菌酶水解產物優選地具有高于0.15的摩爾Trp/LNAA比例，更優選地Trp/LNAA比例高于0.20，進一步更優選地Trp/LNAA比例高于0.23，仍然更優選地Trp/LNAA比例高于0.25，最優選地Trp/LNAA比例高于0.30。通常，摩爾Trp/LNAA比例低于3.0。同樣，這類溶菌酶代表了含色氨酸的肽或組合物的優選的起點。溶菌酶(EC3.2丄17)是能夠水解細菌細胞壁中特異肽聚糖鍵，導致細胞裂解的酶。因為其殺細菌作用，溶菌酶通過防止感染在宿主防御(hostdefence)中起到重要作用。在生理條件下，溶菌酶分子非常能抵抗蛋白水解攻擊。該罕見的抗性可在進化基礎上解釋因為入侵的細菌能夠分泌多種蛋白酶，因此對這類蛋白酶易感的溶菌酶分子會被快速失活。已針對a.o.反芻動物的胃溶菌酶闡述了其蛋白酶抗性(Dobsonetal，J.BiolChem.1984，259(18)11607-11616)。從結構觀點來看，分子中四個二硫鍵的存在可被預期增加溶菌酶的蛋白酶抗性。在本申請的實施例1中所示數據的基礎上，雞卵溶菌酶可被認為如此抵抗蛋白水解攻擊，使得該分子不太可能能夠在人腸道的相關部分中被有效消化。該蛋白酶抗性的結果是，盡管其具有非常吸引人的Trp/LNAA比例，但是不完整的溶菌酶不是產生血漿色氨酸水平的合適來源，僅僅因為色氨酸殘基在胃腸道中存在的生理條件下不被解離。膳食攝取后，存在于食物中的蛋白質被逐漸水解為更小的片段，然后被轉運穿過小腸壁并吸收進血中。在胃腸道中，從胃、胰和小腸產生的大量不同的蛋白酶能活性水解膳食蛋白質。內切蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶將大分子量蛋白質切割為較小的寡肽。這些寡肽隨后被大量其它酶如二肽基和三肽基肽酶進一步水解，產生二肽和三肽，并被氨基肽酶和羧基肽酶水解產生游離氨基酸。特異轉運游離氨基酸或二肽和三肽的運載體體系負責穿越腸壁有效轉運進入血流。膳食攝取后，游離氨基酸、二肽和三肽立即被摻入血流中。比三肽更大的肽需要額外的酶切割使得能夠吸收。我們發現，如果被摻入以例如乳制品為代表的含高蛋白質的食物基質中，根據本發明的水解產物也是有效的。這是非常驚人的，因為含蛋白質的食物基質表現出高LNAA負荷，并因此可被期望為降低具有高Trp/LNAA比例制品的作用。對這種預料之外的現象的一種可能的解釋是通常的食物制品摻入了完整的而不是充分水解的蛋白質。根據本發明的水解產物的典型大小分布在圖3中展示。根據該圖，大部分摻入色氨酸和酪氨酸的肽具有低于500Da的分子量。考慮到色氨酸(MW=186)和酪氨酸(MW=163)的非常高的分子量和只存在非常低水平的游離色氨酸，意味著大部分這些肽應該是三肽或二肽。因為色氨酸在使用的波長下具有比酪氨酸高得多的摩爾吸光系數，所以峰值應涉及主要摻入色氨酸的肽。因為根據本發明的含色氨酸的二肽和三肽被吸附得比例如未經水解的基質蛋白質所代表的大量LNAA快得多，所以我們推測這是即便存在大量基質蛋白質時仍能獲得高血漿Trp/LNAA比例的原因。這樣的解釋對摻入酪蛋白和谷蛋白的食物基質尤其適用，因為這類蛋白質在胃的酸性條件下顯示差的溶解度。然而，其還適用于慘入更多可溶完整蛋白質(如乳清蛋白)的基質，因為即使這類蛋白質的胃腸消化相對低，使得與根據本發明的含色氨酸的二肽和三肽相比，得到的肽的摻入仍被顯著延遲。根據實施例6中展示的數據，這樣的延遲在30和60分鐘之間足夠長到吸收所有含色氨酸的二肽和三肽。因此，蛋白質或含蛋白質食物的攝取可以與水溶性肽同時或幾乎同時。幾乎同時表示肽的攝取在攝取蛋白質后60分鐘內，優選地在30分鐘內。有趣的是，我們目前的實驗數據也似乎表明，根據本發明的水解產物能夠在人志愿者體內產生比水解產物的Trp/LNAA比例更高的Trp/LNAA比例。盡管這樣的現象是未知的，并且根據我們最大限度的知識不存在對該作用的被接受的解釋，但是我們相信，這可能是由溶菌酶分子的極高的精氨酸含量引起的。本文公開了最近提出的工作假設，以解釋實施例中所示實驗數據。該假設被用于給出本發明人的目前看法，但是本發明不以任何方式關聯或限制于該假設。因此，本發明與該假設的正確性無關。血胰島素的提高刺激了從血進入外周組織(特別是肌肉)的氨基酸吸收。然而，由于在血中色氨酸與血漿蛋白質白蛋白結合的事實，色氨酸在很大程度上避開了該途徑。因此，提高的胰島素水平降低了LNAA而不是色氨酸的濃度，進而提高了血中的Trp/LNAA比例。因為碳水化合物的攝食引發胰島素分泌，并刺激外周組織和尤其是肌肉中LNAA的吸收，所以通過碳水化合物攝取提高血漿Trp/LNAA比例(FernstromandWurtman,1972,Metabolism,Vol.21,No.4，337-342)。除了被碳水化合物攝食刺激外，也已知胰島素分泌被具體的氨基酸刺激。如果灌輸個體氨基酸造成的血漿氨基氮水平非常相似，則胰島素應答可觀地變化。Floydetal(JClinInvest45(9):1487-502)確立了針對氨基酸的遞減的胰島素應答精氨酸>賴氨酸>亮氨酸>苯丙氨酸>纈氨酸>甲硫氨酸。考慮到溶菌酶尤其富含氨基酸精氨酸的事實，傾向于推測由精氨酸引發的胰島素刺激作用導致高的Trp/LNAA比例。因為已知碳水化合物的胰島素刺激作用，所以根據本發明的碳水化合物優選地被配制為與碳水化合物組合。在本發明的一個實施方案中，溶菌酶，優選地雞卵溶菌酶在工業過程中被酶(預)水解，即(雞卵)溶菌酶優選地以水解產物或富集的水解產物形勢提供。以這類(富集的)水解產物形勢提供時，極大地便利了含色氨酸的肽的腸吸收。在本申請的另一實施方案中，雞卵溶菌酶被轉化為包含色氨酸的水解產物或富集的水解產物，其包含下述肽群體，其中多于50%、優選地多于60%、更優選地多于75。/。的存在的肽具有低于500Da的分子量。優選地，這類(富集的)水解產物不含有多于1wt%(以干物質計)的游離色氨酸。存在于水解產物中包含色氨酸的肽的分子量分析如本申請的材料和方法章節中所述進行，并在圖3中闡述。后一實施方案的一個重要有點是二肽和三肽中包含的色氨酸在口服消耗后立即被穿過腸壁轉運進入血流中。因此，血漿色氨酸水平被提高，幾乎同時伴有對腦血清素水平的直接影響。非常驚人的是本申請實施例6中所示數據顯示，以這些二肽和三肽形勢存在的色氨酸殘基的有效性比游離的色氨酸甚至更有效。該觀察結果強調了本發明提供的優點。還在本申請的另一實施方案中，(雞卵)溶菌酶水解產物被分級分離，從而提高水解產物級分的色氨酸含量。該級分或富集的水解產物與分級分離前的水解產物相比優選地具有提高的Trp/LNAA比例。水解產物或具有額外的游離色氨酸的經富集的水解產物的富集，這也形成了本發明的部分。在制備這類經富集的水解產物的一個優選的選項中，利用了我們的下述觀察結果溶菌酶摻入罕見大量的堿性精氨酸和賴氨酸殘基。驚人地，作為選擇的酶孵育條件(即選擇具有正確切割偏好的內切蛋白酶如枯草桿菌蛋白酶，與產生高粱二肽和三肽的孵育條件組合，所述二肽和三肽摻入色氨酸但是幾乎沒有精氨酸或賴氨酸殘基)的結果，我們能夠生產根據本發明的富集的溶菌酶水解產物。因此，摻入精氨酸或賴氨酸殘基的含LNAA的肽能夠從不具有這類堿性殘基的含色氨酸的肽中分離。例如，通過將水解產物的pH調節至4和6之間、更優選地5.0和5.5之間的數值，不具有這類堿性殘基的肽會不帶電荷，并因而具有降低的親水性。這些特征可例如在色譜或其它分離過程中用于我們的優點，以選擇性地去除大部分含精氨酸或賴氨酸的肽。因此，含色氨酸的肽的含量被顯著提高，并任選地提高了該富集的水解產物的Trp/LNAA比例。可通過已知的技術，如離子色譜、疏水作用色譜或電滲析去除帶電的摻入精氨酸或賴氨酸的肽。在相關肽的層析分離中使用這類特征的實踐背景可見于a.o.theProteinPurificationHandbook(issuedbyAmershamPharmaciaBiotech,nowadaysGEHealthcareBio-Sciences,Diegem，Belgium)。在朝向下述制劑的進一步更先進的純化途徑中，有利地使用溶菌酶中帶有酸性側基的氨基酸如谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)殘基的存在，所述制劑將高色氨酸含量與高Trp/LNAA比例結合。在該途徑中，根據本發明的溶菌酶水解產物的pH首先被調節至3.0，然后在陽離子樹脂上進行色譜。在該pH值下，摻入Glu或Asp的肽會通過柱，其它肽則會結合。隨后用pH5緩沖液的洗脫會解吸附如所述的不含賴氨酸或精氨酸殘基的所有結合的肽。大部分含有色氨酸的肽會在經解吸附的該級分中。然后通過用具有甚至更高pH值的緩沖液洗脫，從柱上去除剩余的結合肽。該優良的途徑在本申請的實施例4中闡述。盡管對于本發明而言，優選地使用離子交換色譜和/或疏水作用色譜，但是也可使用其它合適的色譜分離方法，包括親和色譜和尺寸排除色譜。可通過本領域已知的方法完成從得到的水性級分中回收富含色氨酸的肽。為了獲得濃縮的和保質期穩定的產物，回收優選地包括蒸發和(噴霧)干燥步驟。另外，之后是蒸發/沉淀步驟的納米過濾和涉及有機溶劑的萃取過程代表了對期望的純化的選項。優選地通過蒸發溶劑進行從有機溶劑中回收富含色氨酸的肽。WO2006/009448提供了得自雞卵蛋白質的具有抗高血壓特性的蛋白質水解產物，以及包含這些水解產物的食物制品和食物補劑。該文件公開了大量水解產物(包括得自雞卵溶菌酶的水解產物)的制備。所有這些水解產物目的是在人中口服攝食后降低血壓或預防血壓升高。WO2006/009448還公開了在堿性條件下使用枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)(EC3.4.21.62;商品名稱Alcalase或Protex)獲得的溶菌酶水解產物制劑。根據獲得的高水解程度，這些溶菌酶水解產物含有大比例的具有低于500Da分子量的肽。然而，在WO2006/009448的上下文中均未涉及下述事實溶菌酶是具有高色氨酸含量的蛋白質來源，其能夠積極影響腦血清素水平。也沒有提到溶菌酶水解產物包含水溶性肽，所述肽摻入了大量色氨酸和相對少量的LNAA。WO2006/009448還未提到溶菌酶或溶菌酶水解產物任一的高精氨酸和賴氨酸含量。我們根據本申請中所示數據已經發現，溶菌酶分子的高色氨酸含量與精氨酸和賴氨酸的普遍存在組合，使得溶菌酶成為體內產生高Trp/LNAA比例的完美的起始材料。另外，WO2006/009448的上下文未提到根據本發明的水解產物與其它含蛋白質的食物共同消耗時所提供的優點。除了膜濾器的使用以外，WO2006/009448的上下文還沒有提到從具有選定的氨基酸組成的這些水解產物中獲得肽級分的方法，或使用特異方法提高色氨酸含量或提高Trp/LNAA比例的方法。另外，未記錄提供高度降解的、低變應原性的溶菌酶水解產物的優點。盡管事實上溶菌酶在生理條件(即在酸性pH下使用胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶作為蛋白酶)下顯示高度抵抗蛋白水解，但是在這類較不優良的酸性條件下也可獲得根據本發明的溶菌酶水解產物。然而，在這類條件下需要相對苛刻的孵育條件，例如高得多的酶濃度、更高的溫度和任選地額外的內切蛋白酶。本申請實施例4中所示數據表明，通過在堿性pH下用枯草桿菌蛋白酶孵育溶菌酶獲得的溶菌酶水解產物尤其富含Ala-Trp(AW)二肽。該發現提出化學合成的AW二肽可能為本發明溶菌酶水解產物提供合適的備選方案。盡管合成的二肽的使用具有明顯的立法缺點，但是重要的優點是其成本有效性及其理想的Trp/LNAA比例。理論上可獲得二十種不同的含色氨酸的二肽，但是我們的研究顯示二肽Ala-Trp(AW)和Ser-Trp(SW)代表了通過合成二肽增強血漿Trp/LNAA比例的尤其優選的選項。可能使用例如"Peptides:ChemistryandBiology"byN.SewaldandH.D.Jakubke,Eds.Wiley-VCHVerlagGmbH,2002，Chapter4中所述的常規技術，通過化學合成生產AW和SW二肽。適用于大規模生產的尤其成本有效的化學肽合成方法基于用于活化羧基的垸基氯甲酸酯或特戊酰氯化物的使用，與用于C-端保護的甲基酯和用于N-保護的芐氧羰基(Z)或叔丁基氧羰基的使用組合。用于二肽SW的成本有效合成的詳細步驟在實施例5中提供。能夠獲得根據本發明的溶菌酶水解產物后，我們設想了具有技術和經濟優點的其它新的和驚人的應用。一種新的應用是在多種嬰兒配方制品中摻入本發明的肽。牛乳含有20%的乳清蛋白，人乳則含有40%到60%。因此，牛乳含有比人乳少的a-乳白蛋白，進而含有比人乳少的色氨酸。正常的、足月的嬰兒通常被喂養基于牛乳的配方，其為不能提供等價于母乳的氨基酸構成的制品。盡管色氨酸供應不足的結果尚未完全已知，但是具有高色氨酸的嬰兒配方制品可對嬰兒的認知行為和睡眠開始和質量具有有益的影響。YogmanandZeisel在NEnglJMed.1983Nov10;309(19):1147-1149中提供了有力的跡象:在健康新生兒中，高血漿色氨酸水平促進了靜態睡眠的快速開始。因此，本發明提供了用于嬰兒配方制品的組合物，其中已使用得自(雞卵)溶菌酶的(富集的)水解產物提高了色氨酸水平。優選地，這類嬰兒配方制品中使用的(雞卵)溶菌酶被熔解至防止變應原性問題的程度，即雞卵溶菌酶優選地以低變應原性水解產物的形式被提供。根據本發明的另一方面，根據本發明的(富集的)水解產物可以在膳食替代制品中使用。例如，WO2005/023017描述了高劑量明膠作為膳食替代制品中合適組分的優點。盡管提供了極佳的感官特性，但是明膠不提供需要的氨基酸平衡，例如其不摻入必需氨基酸色氨酸。因此，為了達成具有ECDirective96/8/EC所要求的氨基酸適當平衡的組合物，必須向這類含明膠的組合物中添加色氨酸。在WO2005/023017中，優選地以富含色氨酸的蛋白質(例如卵清粉或全卵粉)的形式添加色氨酸。我們目前已發現，根據本發明的含色氨酸的水解產物對該問題提供了改進的溶液，因為這些水解產物以濃縮得多的形式供應色氨酸。另外，溶菌酶自身以所需量含有所有必需氨基酸，并同樣是理想地適合膳食替代品的全營養蛋白質。根據本發明的又一方面，根據本發明的水解產物被用于刺激食欲。我們非常驚人地發現具有高Trp/LNAA比例的制劑會刺激血漿生長素釋放肽(ghrelin)水平。生長素釋放肽已知是"饑餓"激素，并且刺激生長素釋放肽生產已顯示在人中提高食物攝取和體重(Wrenetal.,2001,JClinEndocrinolMetab86，5992-5995)。因為該預料之外的作用，根據本發明的水解產物在例如臨床食物中提供優點，因為嚴重病患者(criticallyill)趨向于戒除所有食物，這減緩了他們的恢復。根據本發明的又一方面，根據本發明的水解產物被用于在嬰兒、兒童和成人中改善睡眠開始和質量。睡眠問題在屬于多種年齡組的個體中非常盛行，并與醫學病癥相關。根據本發明的水解產物適用于治療普遍的睡眠問題，但是他們代表了克服認知、心理、社交(social)和行為紊亂(disturbance)相關問題的一種有用工具。例子是建立良好的睡眠衛生，克服睡眠開始聯合征(sleep-onsetassociation)或晝夜節律睡眠障礙(circadianrythymsleepdisorder)。所述制品還可適用于改善例如纖維肌痛患者的睡眠開始和質量和精神狀態。纖維肌痛綜合征是一種慢性疼痛綜合征，其與嚴重紊亂的睡眠開始和質量和情緒緊張(emotionalstress)相關。我們發現，根據本發明的富含色氨酸的水解產物的規律攝入一般改善受睡眠問題困擾的個體的睡眠開始和睡眠質量。根據本發明的含色氨酸的水解產物提供了額外的優點，例如供應(半)必需的氨基酸。溶菌酶不僅具有高色氨酸水平，而且同樣摻入顯著量的酪氨酸殘基。酪氨酸是神經遞質多巴胺的前體，并且已知血漿酪氨酸水平影響腦中的多巴胺水平。溶菌酶水解產物不僅比其它已知的高色氨酸肽含有更少的LNAA，而且比其它已知的高色氨酸肽含有更少的支鏈氨基酸(BCAA)。這是重要的，因為己知BCAA降低多巴胺前體酪氨酸的血漿可利用度。因此，其高Trp/LNAA比例與其高Tyr/BCAA比例組合，使溶菌酶成為獨特的分子。因此，根據本發明的溶菌酶水解產物被非常適當地定位為"腦食物"，也就是說，用于供應適當的神經遞質水平所需的必需氨基酸。已知多巴胺體系介導報酬(reward)和動機(motivation)的關鍵作用，及其對集中精神(concentration)、記憶、機警、注意力、解決問題和精神運動協調的影響。如本申請實施例9中所闡述的，根據本發明的溶菌酶水解產物的攝入對警覺、機警、集中精神和精神運動協調(psychomotorcoordination)具有顯著的有益影響。該發現證實根據本發明的溶菌酶水解產物可被期望為不僅刺激血清素體系，而且剌激多巴胺體系。若干組個體可受益于該發現。例如，絕經期的女性具有降低的解決問題能力的普遍不適(complaint)，她們將其與不能集中精神關聯。因此，根據本發明的溶菌酶水解產物特別適用于在該年齡組的女性中對抗這些問題。在年輕和中年女性的范疇內，經期綜合征(premenstrualsyndrome)是非常普遍的。該綜合征的特征是多種癥狀，但是關于抑郁和情緒不穩定的不適經常發生。為了對抗這些現象，經常開出選擇性血清素再吸收抑制劑如氟西汀的處方，并且在具有更溫和癥狀的女性中，經常開出飲食適應(dietaryadaptation)和防止壓力的處方。基于本申請實施例6和9中所述實驗的結果，根據本發明的溶菌酶水解產物代表極佳的治療，特別是對這類較溫和的病例而言。另外，多巴胺不足伴隨著注意力缺陷多動癥(ADHD)，從而可預期通過溶菌酶水解產物減輕該病癥的癥狀。我們的下述發現是驚人的對壓力后表現的有益影響在抗壓的受試者中特別突出。可能的解釋可以是具有(過度)活動的血清素體系的有壓力的人需要來自飲品的色氨酸來補充他們的血清素儲備，因此不能使用該色氨酸改進他們在任務中的表現。根據這一條推理，沒有過度活動的血清素能體系的抗壓人群不需要色氨酸來補充他們的色氨酸儲備，并且能夠使用其改善他們的壓力后表現。一種備選的解釋可能是這些作用事實上歸因于多巴胺能過程的刺激作用。可通過富含酪氨酸的食物成分增強多巴胺合成，尤其是與低水平的支鏈氨基酸(BCAA)組合時。在本文中公開這些工作假設(workinghypotheses)以解釋實施例中所示實驗數據，并用于給出本發明人的目前看法(presentinsight)。但是本發明不以任何方式關聯或限制于這些假設。因此，本發明與這些假設的正確性無關。如別處所陳述的，溶菌酶不僅具有高色氨酸水平，而且同樣包括有顯著量的酪氨酸殘基。根據本發明的(富集的)水解產物還能提高食物制品中的半胱氨酸含量。盡管不是必需的氨基酸，但是在許多食物制品中半胱氨酸濃度是有限的。半胱氨酸的內源合成需要甲硫氨酸的存在，像半胱氨酸一樣，甲硫氨酸濃度在許多食物制品中是有限的。提高的食物半胱氨酸含量的優點尤其涉及甲硫氨酸對血清高半胱氨酸提升效應的拮抗效應(antagonisticeffect)。該發現在WO03/055335中已描述。根據本發明的溶菌酶水解產物特征也是高半胱氨酸水平。事實上，溶菌酶分子含有比色氨酸殘基(6)甚至更多的半胱氨酸殘基(8)。在該角度中，根據本發明的水解產物形成提高某些制品半胱氨酸含量的極佳來源。發現提高的半胱氨酸含量對于例如嬰兒配方的制品而言是重要的。不僅嬰兒配方基于酪蛋白或酪蛋白和乳清蛋白的混合物，而且對基于大豆的制品和事實上對于所有富含蛋白質的制品而言，其中主要的蛋白質來源由含有相對低量色氨酸或半胱氨酸的蛋白質提供。除了來自牛乳和明膠的蛋白質組分以外，玉米蛋白、酵母蛋白、豌豆蛋白、大豆蛋白和水稻蛋白代表了這類蛋白質的例子。另外，含有高劑量明膠的上述膳食替代制品含有不足量的半胱氨酸。根據本發明的(富集的)蛋白質水解產物，或得自該蛋白質水解產物的肽級分，或包含色氨酸的二肽或三肽(特別是SW或AW)可以以任何合適的形式使用，例如食物或飲料，如用于特殊營養用途的食物(FoodsforSpecialNutritionalUses),膳食補劑，營養藥物或甚至用在詞料或寵物食物中。可在這些制品的正常過程中的任何階段添加溶菌酶水解產物。如果在食物或飲料中使用，則具有相對低蛋白質含量的制品是優選的，從而消耗根據本發明的制品后在血中維持高的Trp/LNAA比例。另外，優選地向含溶菌酶水解產物的食物或飲料中添加碳水化合物，以進一步提高消耗后血中的高Trp/LNAA比例。合適的食物制品包括例如谷物棒、烘焙物品如蛋糕和曲奇，以及液體食物如湯或湯粉末。除了乳制品如乳和酸乳之外，其它合適的飲料包括非醇和醇飲品以及要被添加進飲用水和液體食物中的液體制劑。非醇飲品優選地為礦物質水、運動飲品、果汁、檸檬水、茶、濃縮飲品如shots、能量飲品(例如含有葡糖醛酸內酯、咖啡因或牛磺酸)和碳酸飲料(例如汽水(pops)、蘇打水(sodas)和可樂飲品)。根據本發明的色氨酸水解產物的優選的組合是與被推薦用于"腦營養"的化合物例如鐵、鋅、鎂、維生素(特別是B2、B6、葉酸和C)、co-3和DHA脂肪或脂肪酸、葡萄糖、GABA、膽堿、磷脂酰絲氨酸、輔酶QIO、肌酸、牛磺酸和5-HTP的組合，或與被推薦用于釋放壓力或抑郁的化合物如纈草(valerian)、巧克力、圣約翰草(StJohn'sworth)、5隱HTP、磷脂酰絲氨酸、醇、香蜂葉(lemonbalm)、綠茶或綠茶提取物、甘菊或S-腺苷甲硫氨酸的組合，或與被推薦用于改進機警的化合物如咖啡因、瓜拉那、人參、白果(gingkobilboa)、圣約翰草和5-HTP的組合，或與被推薦用于情緒改善的化合物如GABA、5-HTP、PEA、綠茶或綠茶提取物、白果、洋蘇草(Salvia)或S-腺苷甲硫氨酸的組合，或與被推薦用于改善睡眠的化合物例如乳肽、游離色氨酸、阿片肽(opoidpeptide)或褪黑素的組合。用于特殊營養用途的食物包括以下范疇運動食物、瘦身食物、嬰兒配方和臨床食物。術語膳食補劑在本文中使用時表示由口攝取的制品，其含有旨在補充膳食的化合物或化合物的混合物。這些制品中的化合物或化合物的混合物可包括維生素、礦物質、草藥(herbs)或其它植物和氨基酸。膳食補劑也可以是提取物或濃縮物，并可以以例如片劑、膠囊、軟膠囊(softgel)、軟膠囊(gelcap)、液體或粉末的許多形式存在。在本文使用時，術語營養藥物表示在營養和藥物兩種應用領域中的有用性。根據本發明的營養藥物組合物可以是適合施用給動物體(包括人體)的任何形式，特別是口服施用的任何常規形式，例如固體形式如食物或飼料(添加劑/補劑)、食物或飼料預混合物、片劑、丸劑、顆粒、錠劑、膠囊和泡騰劑配制物如粉末和片劑，或是液體形式如溶液、乳劑或懸浮液，例如飲料、糊劑和油性懸浮液。摻入根據本發明的水解產物的受控(延遲)釋放配制物也構成本發明的部分。另外，可向本發明的營養藥物組合物中添加多維生素和礦物質補劑，以獲得足量的必需營養素，所述必需營養素在一些膳食中缺失。多維生素和礦物質補劑也適用于疾病預防，和針對由于生活模式造成的營養丟失和不足提供保護。在本發明的一個優選的方面，組合物可在例如老年人以及年輕人(例如準備考試的學生)和例如玩計算機或網絡游戲的人中被用作營養補劑，例如用于情緒改善或用于改善認知功能如學習、記憶、警覺和機警。如前文所述，根據本發明的組合物尤其與絕經前和絕經后的女性相關。根據本發明的組合物還尤其與運動人群相關；具有苛刻的訓練計劃的職業運動員以及娛樂運動人群，如打網球或高爾夫球的人群。這表示本發明涉及根據本發明的水解產物如上文給出的和作為"條件改善者"的用途，即在患病或正常的健康個體中作為用于以下的手段降低應激性和疲勞(最終降低過度訓練的風險)，降低或防止或減輕生理和精神疲勞，保護安穩的睡眠(即作用于對抗失眠和睡眠病癥并改善睡眠)和更籠統地提高能量生產，特別是提高腦能量生產。另外用于通常的認知改善，特別是用于注意力和精神集中、記憶和記憶能力、學習能力、語言處理、解決問題和智力功能的維持或改善；用于改善短期以及長期記憶；用于提高精神機警；用于增強精神警覺；用于減少精神疲勞；用于支持認知健康，用于維持平衡的認知功能。另外，本發明涉及根據本發明的水解產物用于提高食欲的用途。如果需要獲得具有高Trp/LNAA比例的成本有效的制劑，根據本發明的水解產物任選地包含游離的色氨酸。附例圖1.消耗實施例6中詳述的制品后，血漿中摩爾Trp/LNAA比例對時間的函數。REF^酪蛋白水解產物，ALAC二完整的ce-乳白蛋白，Trp二游離色氨酸，WEPS-富含色氨酸的溶菌酶水解產物，SYN-合成的二肽Ser-Trp。圖2.消耗實施例6中詳述的制品后，負面情緒(用情緒狀態類型測試(POMS)測量)對時間的函數。REF:酪蛋白水解產物，ALAC-完整的a-乳白蛋白，Trp:游離色氨酸，WEPS-富含色氨酸的溶菌酶水解產物，SYN=合成的二肽Ser-Trp。圖3.溶菌酶水解產物的水溶性肽級分的大小分布。使用材料和方法章節中詳述的測定水解產物中存在的肽和蛋白質分子量分布的方法，分析了根據實施例3中所述方法制備的溶菌酶水解產物。214nm處的吸光度測量記錄了肽鍵的存在。280nm處的吸光度測量記錄了色氨酸和酪氨酸芳香族側鏈的存在。因為色氨酸在該波長下具有比酪氨酸高得多的摩爾吸光系數，所以峰值會主要涉及摻入色氨酸的肽。圖4.實施例9中所述實驗的研究設計流程圖。高壓力易感的志愿者；低抗壓的志愿者；hydr:富含Trp的溶菌酶水解產物；安慰劑酪蛋白水解產物。圖5.實施例9中所述實驗的典型研究日的流程圖。飲品消耗含有富含Trp的水解產物或安慰劑的飲品；血采血用于評價血漿氨基酸水平；表現不可控制的壓力之前和之后的表現測試；壓力算術任務。圖6.攝食實施例9中所述安慰劑(plc)或溶菌酶水解產物(Trp-hydr)后的血漿Trp/LNAA比例(/mi01/1)。黑色符號壓力易感的受試者；空心符號抗壓的受試者。圖7.如實施例9中所述進行的MackworthClock測試的結果。消耗安慰劑(plc;左側圖)或富含Trp的水解產物(Trp-hydr;右側圖)之后、算術任務之前(壓力前)或之后(壓力后)的正確反應數量(垂直軸)。黑色符號壓力易感的受試者；空心符號抗壓的受試者。因為在獨立的日期中給予不同的干涉(intervention)制品，所以僅在相同的處理和日期內的壓力前和壓力后條件之間進行相應的比較。圖8.如實施例9中所述進行的臨界追蹤任務(CriticalTrackingTask)的結果。在攝入安慰劑(plc)或富含Trp的水解產物(Trp-hydr)后表達XCT(指出受試者達到的最終復雜性水平)。黑色符號壓力易感的受試者；空心符號抗壓的受試者。材料和方法材料商品名為"Protex6L"的枯草桿菌蛋白酶得自Genencor(Leiden，荷蘭)，胃蛋白酶來自Sigma且胰蛋白酶/糜蛋白酶(PorcinePEM)來自Novozymes(Bagsvaerd，丹麥)。溶菌酶作為DelvozymeL(22%干物質)從DSMFoodSpecialities(Delft，荷蘭)獲得。酪蛋白水解產物("REF，)基本上如Edensetal(JAgricFoodChem,53(20)7950-7957,2005)所述獲得。用Protex6L充分水解酪蛋白酸鈉，將pH降低至4.5后，用脯氨酸特異的內切蛋白酶達到DH>20%。超濾后對滲透物熱處理，以失活任何剩余的酶活性，并最終將其噴霧干燥。完整的a-乳白蛋白("ALAC")作為"Biopure"(>90%的a-乳白蛋白)從DaviscoFoodsInternational,Inc.(LeSeuer,MN)獲得；富含色氨酸的溶菌酶水解產物("WEPS")如實施例4中所述獲得；合成的Ser-Trp二肽("SYN")如實施例5中所述獲得；純L-色氨酸("TRP")作為L-色氨酸-400從Orthica,Almere，荷蘭獲得。SDS-PAGE通過SDS-PAGE檢査使用的溶菌酶制劑的純度。用于SDS-PAGE和染色的所有材料均購自Invitrogen(Carlsbad,CA,US)。使用SDS緩沖液根據制造商的說明制備樣品，并使用MES-SDS緩沖體系根據制造商的說明在12%Bis-Tris凝膠上分離。使用SimplyBlueSafeStain(CollodialCoomassieG250)進行染色。水解前，溶菌酶在凝膠上作為具有約14kDa分子量的單一條帶出現。LC/MS/MS分析使用HPLC測定通過本發明的工藝生產的酶蛋白質水解產物中含色氨酸的肽(主要是二肽或三肽)的存在，所述HPLC使用與P4000泵(ThermoElectron,Breda，荷蘭)偶聯的離子阱質譜儀(ThermoElectron,Breda，荷蘭)。使用Inertsil3ODS3，3jum,150*2.1mm柱(VarianBelgium,Belgium),與用于洗脫的MilliQ水(Millipore,Bedford,MA,USA)中0.1%甲酸(溶液A)和乙腈中0.1%甲酸(溶液B)的梯度組合，分離形成的肽。所述梯度從100%溶液A開始，保持10分鐘，在25分鐘內線性化提高至20。/。B，立即進入初始條件，并保持15分鐘用于穩定。使用的注射體積為50微升，流速為每分鐘200微升，柱溫度維持在55°C。注射的樣品的蛋白質濃度約為50微克/毫升。以滯留時間、質子化的分子為基礎，并通過使用對感興趣的肽專用的MS/MS，使用約30%的最適碰撞能量，鑒定感興趣的肽。通過使用外標法進行含色氨酸的特異肽的定量。使用四肽VVPP(]V^410.2)調節MS模式中的最優靈敏度和MS/MS模式中的最優斷裂(fragmentation)，進行5pg/ml的恒量輸注，得到MS模式中的質子化分子和MS/MS模式中約30%的最優碰撞能量，產生B-離子和Y-離子系列。在LC/MS/MS之前，在室溫和13000rpm下將酶蛋白質水解產物離心IO分鐘，并用濾過Millipore水過濾裝置的去礦質水(MilliQ水)1:100稀釋上清液。氨基酸分析如實施例6中所述，通過HPLC根據vanEijketal(J.Chromatogr.1993:620:143-148)分析血漿中的氨基酸譜。根據如AminoAcidAnalysisSystemofWaters操作員手冊(MilfordMA,USA)中所述的PicoTag方法進行其它氨基酸分析。為此，將終末樣品干燥并使用異硫氰酸苯酯直接衍生化。如所述使用HPLC方法定量存在的經衍生化的氨基酸。因為常規酸水解期間Trp和Cys被破壞，所以使用特殊的方法定量這兩種氨基酸。為了在水解期間防止Cys降解，首先使用過氧化氫將該氨基酸氧化為磺基丙氨酸，然后定量。色氨酸的分解以經輕微修飾的Waters步驟為基礎。在該步驟中，在真空下干燥肽溶液的小份試樣，然后在1小時期間于15(TC下氮中，在含0.2%色胺的4M甲垸磺酸中水解。使用裝備有AlltechAltimaC18柱和熒光檢測的HPLC直接定量反應產物。水解程度使用快速OPA測試(Nielsen,P.M.;Petersen,D.;Dambmann,C.Improvedmethodfordeterminingfoodproteindegreeofhydrolysis.JournalofFoodScience2001，66,642-646)，監測用多種水解混合物孵育期間獲得的水解程度(DH)。克氏定氮(KieldahlNitrogen)通過流動注射分析(FlowInjectionAnalysis)測量總克氏氮。使用TecatorFIASTAR5000流動注射體系，在590nm處定量從含蛋白質的溶液中釋放的氨，所述體系裝備有TKNMethodCassette5000-040、具有SOFIA軟件的Pentium4計算機，和Tecator5027自動采樣器。將對應于本發明動態范圍(0.5-20mgN/l)的樣品量與95-97%硫酸和Kjeltab—起置于消化管中，并進行20(TC下30分鐘隨后36(TC下90分鐘的消化程序。注射進FIASTAR5000體系中后，測量氮峰，從中可推理出被測量的蛋白質水解產物中存在的肽和蛋白質的分子量分布在自動HPLC體系上完成經蛋白酶處理的蛋白質樣品的肽大小分布分析，所述體系裝備有高壓泵、能夠注射10-100微升樣品的注射設備，和能夠在214nm監測柱流出物的UV檢測器。用于該分析的住是用20mM磷酸鈉/250mM氯化鈉pH7.0緩沖液平衡的SuperdexPeptideHR10/300GL(Amersham)。注射樣品(典型地為50微升)后，在90分鐘內以.5ml/min的流速用緩沖液從柱中洗脫多種組分。使用細胞色素C(Mw13500Da)、抑肽酶(Mw6510Da)和四甘氨酸(Mw246Da)的混合物作為分子量標記物校準該體系。以下的實施例進一步闡述本發明。實施例實施例1雞卵溶菌酶不被胃蛋白酶或胰蛋白酶/糜蛋白酶中的任何而切割。為了測試其在人胃腸道中的可消化性，將雞卵溶菌酶與胃蛋白酶以及胰蛋白酶和糜蛋白酶的混合物體外孵育。兩種孵育均在下述pH條件下進行，所述pH條件是胃(胃蛋白酶)和十二指腸(胰蛋白酶/糜蛋白酶)中盛行的pH。為此，將5%(w/w)溶菌酶溶液與酶(1%w/w酶比溶菌酶蛋白質)在37'C下孵育2小時。為了防止進行的蛋白質水解造成的重大pH改變，孵育在McIlvane緩沖液(0.2M檸檬酸加上Na2HP04)中進行。在37'C水解兩小時后獲得的低DH值(見表1)證明了在模擬胃中和十二指腸與空腸中消化條件的條件下溶菌酶分子不能被降解，因為可預期成功的蛋白水解導致至少10%的DH值。因此，存在于完整的雞卵溶菌酶分子中的色氨酸殘基在胃腸道中不會被解離，因此意味著存在于完整雞卵溶菌酶中的色氨酸分子不能有助于血漿色氨酸水平。表1:通過胃蛋白酶和胰蛋白酶/糜蛋白酶混合物的溶菌酶水解<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>實施例2在提高的PH值下，雞卵溶菌酶被枯草桿菌蛋白酶有效切割。為了測試非生理pH和酶條件下溶菌酶對酶水解的易感性，在堿性pH條件下將溶菌酶溶液與微生物枯草桿菌蛋白酶(EC3.4.21.62)體外孵育。為此，在pH7.0、8.0和9.0下將5%(w/w)溶菌酶溶液與12.5微升Protex6L./克存在的溶菌酶蛋白質一起孵育。孵育在6(TC下進行3小時，使用1MNaOH持續調節pH。孵育產生沒有任何顯著沉淀物的輕微混濁的溶液。用于失活枯草桿菌蛋白酶活性的加熱步驟后，根據材料和方法章節中所述方案測量多個孵育的DH值。與生理條件下獲得的結果(見實施例1)相反，使用枯草桿菌蛋白酶的堿性孵育導致完全的溶菌酶水解。pH7.0孵育得到6.3的DH，pH8.0孵育得到11.2的DH，pH9.0孵育得到16.4的DH。反應產物隨后的SDS-PAGE分析表明，整個溶菌酶分子被降解，即枯草桿菌蛋白酶孵育后沒有殘余大分子量片段。另外，在Cr0wnpakCR+柱(Daicd)上對水解產物的HPLC分析揭示了含有色氨酸的肽未發生顯著的外消旋化，即便是在pH9.0下長時間加熱后也未發生。實施例3使用Protex水解溶菌酶并鑒定形成的肽。使用NaOH將含10%(w/w)純溶菌酶的溶液調節至pH8.2，并加熱至52°C。通過添加25微升Protex/g存在的蛋白質開始水解。在連續的攪拌下和將pH維持于8.2時，將水解持續5.5小時，得到沒有可見沉淀物的幾乎澄清的溶液。在用于失活Protex活性的加熱步驟后，取樣用于DH分析。溶液的DH顯示幾乎為30。/。。在10kDa濾器上超濾經熱處理的溶液，得到完全澄清的液體。該澄清液體被用于LC/MS分析，用于存在的肽和蛋白質的分子量分布分析，以及用于離子交換色譜。為了得到存在的肽和蛋白質的分子量分布的印象，如材料和方法章節中所述對澄清的液體進行分子量分析。獲得的結果(見圖3)清楚地表明幾乎所有摻入帶有芳香族側鏈的氨基酸(即色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸)的肽具有低于500kDa的分子量。考慮到這些氨基酸的高分子量，意味著大部分這些小肽是三肽或二肽。根據材料和方法章節中所述步驟進行LC/MS分析。通過選擇這些含有色氨酸("W")的肽，可以檢測肽AW、GNW、WIR、NAW、WVA、VAW、AWR、SLGNW和小量WW和SRWW。孵育后水解產物中游離色氨酸的水平被確立為代表少于1%的存在的總(溶菌酶)色氨酸。因為二肽和三肽容易被腸壁中存在的肽運載體吸收，所以毫無疑問在口服攝入本發明的溶菌酶水解產物后，這類肽中存在的色氨酸殘基會被快速吸收并導致提高的血漿色氨酸水平。實施例4提高水解產物的色氨酸含量。溶菌酶摻入了驚人的大量堿性精氨酸和賴氨酸殘基。另外，溶菌酶分子摻入了顯著量的酸性谷氨酸和天冬氨酸殘基。該數據已被用于設計朝向具有高Trp/LNAA比例的水解產物的創新和優良的純化途徑。然而，該純化途徑的關鍵需求是，在還含有精氨酸或賴氨酸殘基或谷氨酸或天冬氨酸殘基任一的肽中，僅出現非常少的色氨酸殘基。如實施例3中所示，本文使用的特異水解途徑僅產生很少的含有精氨酸殘基的含色氨酸的肽，并且不產生含有賴氨酸、谷氨酸或天冬氨酸殘基的肽。理論預測，在pH3左右能夠達到含和不含谷氨酸或天冬氨酸殘基的肽之間的最大電荷差異。在pH5左右能夠達到含和不含精氨酸或賴氨酸殘基的肽之間的最大電荷差異。為了闡述該途徑的選擇能力，根據實施例3中說明的步驟制備溶菌酶水解產物。然后使用乙酸將水解產物的pH調節至pH3.1，并將約0.5克蛋白質應用在用20mm檸檬酸鈉pH3.1平衡的SPSepharoseFF(GEHealthcare,Diegem,Belgium)柱的15ml柱床體積上。用一倍柱體積的檸檬酸鈉緩沖液洗滌柱，去除摻有谷氨酸或天冬氨酸的大部分肽后，將洗脫緩沖液變更為20mm檸檬酸鈉緩沖液pH5.1。用三倍體積的后一緩沖液洗滌柱時，洗脫了一系列含有色氨酸的肽。根據LC/MS分析，二肽AW以及三肽GNW、NAW、WVA、VAW大量存在，并存在小量戊肽SLGNW。多種pH5.1級分的氨基酸分析顯示，選擇性合并(sdectivepooling)產生具有1.75的分子Trp/LNAA比例的溶液和幾乎30%的色氨酸產率。更少選擇性的合并產生具有0.4的分子比例的溶液和70%的色氨酸產率。隨后，用三倍體積的20mM檸檬酸鈉pH7.1洗滌柱。根據LC/MS數據，該步驟洗脫了含精氨酸的肽WIR、AWIR并驚人地洗脫了肽WW。用1MNaOH、水和1M乙酸最后洗滌柱制備了用于下一輪的柱。實施例5二肽Ser-Trp的化學合成。根據標準的肽技術合成二肽Ser-Trp。第一步中，通過碳酸酐方法(J.Am.Chem.Soc.1967,5012)將Z-Ser-OH和Trp-OMe偶聯，產生受保護的二肽Z-Ser-Trp-OMe。為此，將Trp-OMe.HCl懸浮于四氫呋喃(THF)中，隨后添加N-甲基嗎啉(NMM)。將混合物攪拌1小時，隨后添加至Z-Ser在四氫呋喃/二甲基酰胺(THF/DMF)中的溶液中。添加NMM的第二等價物，并將混合物冷卻至-15t:。以下述速率添加氯甲酸異丁酯，所述速率使得內部溫度不超過-15"C。隨后，將混合物攪拌3小時，允許溫度提高至室溫并通過過濾去除沉淀的NMM.HCl。將濾液在4。C保持過夜，之后過濾額外的沉淀物并將濾液真空濃縮。通過柱色譜(Si02，乙酸乙酯/庚烷)純化殘基。將組合的級分濃縮，用水洗滌去除任何剩余的DMF并真空濃縮。在第二步中，使用Alcalase2.5LDX(/W./尸e;^^/仏1990,52)完成Z-Ser-Trp-OMe的酶水解，隨后的催化氫解提供了呈灰白色固體的期望的肽。為此，將純化的Z-Ser-Trp-OMe溶于WwO/7和水中，添加Alcalase2.5LDX(Novozymes,Bagsvaerd,丹麥)。攪拌混合物，直至(幾乎)所有的起始材料被消耗。然后將混合物真空濃縮，并將殘余物吸收在pH7的水中。用乙酸乙酯萃取水性混合物以去除任何剩余的起始材料，隨后酸化水相。通過用乙酸乙酯萃取分離期望的產物Z-Ser-Trp-OH;將萃取物在硫酸鈉上干燥并在真空中濃縮。在第三步中，獲得二肽Ser-Trp-OH。為此將濃縮的Z-Ser-Trp-OH溶于MeOH和水(l:l)中，添加Pd/C，在正的氫氣壓(5bar)下攪拌混合物。完成反應后，通過過濾去除催化劑加上大部分產物，并棄去濾液。用milliQ水充分洗滌濾器，真空干燥濾液，得到呈白色到灰白色固體的二肽Ser-Trp-OH。如下達成額外的純化在丙酮-水的混合物中攪拌產物，并通過過濾分離肽。這得到了適合口服消耗的產物。實施例6健康志愿者中不同色氨酸來源對血漿Trp/LNAA比例和情緒的影響本研究的目的是在健康受試者中研究消耗含不同色氨酸的制劑后血漿Trp/LNAA譜和情緒。測試了以下的制劑-完整的a-乳白蛋白(見材料和方法)-經水解的酪蛋白酸鹽(DH>20%;見材料和方法)-具有高Trp/LNAA比例的富含Tip的溶菌酶水解產物(見實施例4)-合成的SW二肽(實施例5)-游離的L-色氨酸(見材料和方法)。十八個健康的學生(9個男性和9個女性年齡18-30歲之間)參與了該研究。參與的排除標準是慢性病和當前病，精神病或醫學病史，使用藥物或藥品，醇消耗(>2單位/天)，代謝疾病、激素-疾病或腸疾病和無規則的膳食或偏離標準的進食習慣(通過健康和生活方式調査問巻來評價)。參與實驗的受試者在體重指數的正常范圍內(以kg計的BMI/n^在20-25之間)，女性受試者符合避孕。女性在其卵泡期的中晚期(第4-10天)參與，而使用避孕手段的女性當她們實際使用避孕藥時參與。參與者是非吸煙者，并且在研究之前和期間不能使用任何醇。所有參與實驗的受試者簽署征得同意書(InformedConsentForm)。該研究根據52ndWMAGeneralAssembly,Edinburgh,蘇格蘭，2000年10月所采取的優良臨床試驗規范(GoodClinicalPractice,GCP)EC原則進行。指導受試者禁食過夜；只允許不含糖的水和茶。在五個進行實驗的清晨階段，受試者來到實驗室，攝入含有不同Trp或LNAA濃度的飲品后監測血漿Trp/LNAA濃度和情緒。平衡多種飲品的出現順序，四個實驗日通過一周的周期間隔開。在每個進行實驗的清晨，提供含有不同色氨酸(Trp)或LNAA濃度的312ml飲品(表1)。所有的飲品含有0.10g甜味劑(乙酰舒泛)并用凈水補充達到312ml。由不了解(blindto)膳食條件的助研人員管理不同飲品的施用。表l:使用的飲品的蛋白質/氨基酸組成<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>攝入之前和攝入之后15、30、60、90、120、180和210分鐘時，在含肝素鈉的5ml真空采血管(vacutainer)中一式兩份收集血樣，然后于4°C下在5000rpm離心5分鐘。將得到的上清液與磺基水楊酸(4mg/100微升)混合，并直接儲存于-80。C直至分析。如vanEijketal(J.Chromatogr.1993:620:143-148)所述，利用2-3/miBischofSpherisorbODSII柱，用HPLC進行血漿氨基酸分析。通過用血漿摩爾色氨酸濃度除以大中性氨基酸纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的血漿摩爾濃度總和，計算血漿Trp/LNAA比例。使用普通線性模型(GLM:SPSS12.0forWindows),借助于變量的重復測量多變量和單變量分析(MANOVA和ANOVA)，進行統計學分析。所有的統計學在P=0.05的顯著性水平上評價。血漿Trp/LNAA值以條件和時間作為對血漿Trp/LNAA比例的受試者內因素的第一種變量重復測量分析揭示了時間和條件的主要顯著影響和顯著的條件x時間相互作用。在提供"SYN，，(60分鐘后提高263%)和"WEPS"(90分鐘后提高255%)后發現了血漿Trp/LNAA比例中最高的顯著提高(見圖l)。這兩種產物后Trp/LNAA的提高比攝入"TRP'，(120分鐘后提高191%)或"ALAC"(120分鐘后提高67%)后顯著更快和更高。消耗"REF，后，從60分鐘起到210分鐘，存在顯著的Trp/LNAA降低(-27%)。發現用"WEPS"得到的Trp/LNAA中255%的提高可觀地超過了如先前用完整的o;-乳白蛋白(Markusetal.,2000;Booijetal.,2006)所發現的50-70%的提高，和所有較早報道的使用其它食物如碳水化合物時20-45%的提高(Markus,2003)。盡管血漿Trp/LNAA中40-50%的變異被認為足以改變腦中的Trp水平和5-HT合成和釋放(Markusetal.，2000)，但是該提高被預期為引起可獲得的腦Trp禾n5-HT的高得多的提高，因此也可導致功能活性腦5-HT的更大釋放。情緒狀態類型(POMS)。使用情緒狀態類型調査問巻(WaldandMellenbergh，NedTijdschrPsychol1990:45:86-90)的Dutch縮短版的紙-筆版本測量多個參與者的情緒改變，直觀類比標度(VASscale)范圍從"強烈不同意"到"強烈同意"POMS包括物種不同的情緒亞刻度；范圍從憤怒、抑郁、疲勞和緊張(表示消極的情緒狀態)到有活力(涉及積極的情緒)。以條件和時間作為對總情緒分數的受試者內因素的變量重復測量分析揭示了時間的顯著影響和顯著的條件x時間相互作用；表明跨越時間的情緒改變在多個條件之間顯著不同。攝入"WEPS"和"TRP"后60分鐘發現相當的情緒改善，但是與"TRP"相比，只有"WEPS"直到攝入后210分鐘仍進一步改善情緒。相反，攝入"REF"和"ALAC"后未發現情緒改變。完整的a-乳白蛋白后情緒效應的缺失與先前的研究相當，所述研究顯示完整的a-乳白蛋白后和僅在急性壓力暴露下的壓力易感受試者中，對情緒溫和的有益影響(Markusetal.,2000;Markusetal.,2000,Markus,2003)。盡管攝入"SYN"后情緒似乎改善，但是在該實驗設定中該影響并不顯著。這些目前的結果提出血漿Tip/LNAA中255%的巨大提高可能足以在正常的非壓力易感的受試者中改善情緒。基于先前的發現，預期Trp-增強的溶菌酶水解產物對情緒的這些有益影響在處于高精神壓力條件下的壓力易感受試者中甚至會更大(Markus，2003)。與我們的預期相反，攝入合成的二肽后不存在顯著的情緒改善。該預料之外的結果可能歸因于目前的實驗設定，或歸因于來自這些多種來源的色氨酸生物可利用度的差異。表2:攝入酪蛋白水解產物("REF")、完整的a-乳白蛋白("ALAC")或Trp-增強的溶菌酶水解產物("WEPS")后血漿氨基酸濃度(/miol/l)隨時間的改變。時間(分鐘)<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>表3:攝入游離的L-Trp("TRP")或合成的二肽SW("SYN")后，血漿氨基酸濃度(/miol/l)隨時間的改變。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>實施例7大規模溶菌酶水解。在更大規模的溶菌酶水解步驟中，基本上遵循實施例3中所述的步驟進行一些較小的修飾。將含7.3%(w/w)純溶菌酶的溶液加熱至65°C，然后使用NaOH將pH調節至pH8.2。通過添加25微升Protex6L/g干物質開始水解。在連續攪拌下和將pH維持于8.2并將溫度維持于53"C時，將水解持續2小時。然后將pH值提高至9.0并將孵育再繼續3.5小時，得到含有一些沉淀物的溶液。然后將溶液的pH降低至4.5，并將溶液冷卻至低于4°C。為了獲得完全澄清的產物，將液體濾過Z2000濾器(Pall)，隨后通過納米過濾去除過量的水和鹽。然后在12(TC對得到的濃縮物進行UHT處理7秒，蒸發并最終干燥獲得干燥形式的溶菌酶水解產物。由此獲得的產物具有約0.19的摩爾Trp/LNAA比例。實施例8制備摻入溶菌酶水解產物的飲料。以下的配方說明了無脂肪的、含溶菌酶水解產物的草莓飲品的制備。向IO克溶菌酶水解產物粉(根據實施例7制備)中添加40克葡萄糖、2.4克檸檬水、0.38克蘋果酸、0.15克三氯蔗糖(sucralose)和0.5克草莓香料(Buteressence,Zaandam,荷蘭)。該粉末混合物在1升水中容易地溶解，獲得具有高Trp/LNAA和高Tyr/BCAA比例的即飲型飲料。粉末混合物適用于例如藥囊填充。可使用多種己知的技術生產包裝的液體制品。實施例9壓力易感和抗壓的健康志愿者中溶菌酶水解產物對壓力后表現的影響。本研究的目的是比較根據實施例7中所述步驟制備的溶菌酶水解產物與安慰劑(酪蛋白水解產物；見實施例6)對血漿Trp/LNAA水平的影響及其對壓力后表現任務造成的結果。已知使用的表現任務強調個體的"警覺"和"眼-運動控制"方面。四十位個體參與了本研究，其中有二十個男性和二十個女性。根據研究前的調査問巻，一半該組被歸類為抗壓的，另一半被歸類為壓力易感的。個體的參與(in)和排除(exclusion)標準以及一般研究管理與實施例6中所述相同。圖4中給出所述研究設計的流程圖，圖5中給出典型研究日的概圖。在進行實驗的清晨，受試者在禁食狀態下來到實驗室。抵達后，給予他們含溶菌酶水解產物或安慰劑的飲品，即含有酪蛋白水解產物的飲品。測試飲品和安慰劑飲品的組成列于表4中。表4:使用的飲品的組成。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>消耗300ml飲品后90分鐘，采取血樣評價Trp/LNAA比例(見實施例6)。隨后，將抗壓組或壓力傾向組的受試者進行表現測試，隨后暴露于壓力下。該壓力由必須在噪音刺激下進行的算術任務組成。引導受試者相信噪音的存在或消失取決于他們在測試中的表現。事實上，算術任務以所有的受試者每個試驗都不成功的方式操作。己知該設定誘導生理壓力，并被認為是高度不可控制的(Peters,M.L.,Godaert,G.L.R.,Ballieux,R.E.etal.(1998).Cardiovascularandcatecholamineresponsetoexperimentalstress:effectsofmentaleffortandcontrollability.Psychoneuroendocrinology.23，1—17)。算術任務后，重復第一種表現測試，來定量有效的血Trp/LNAA比例影響下，壓力對表現的影響。進行的表現測試是MackworthClock測試(Mackworth,N(1948)Thebreakdownofvigilanceduringprolongedvisualsearch.QuartJExpPsych.1,6-21))和臨界追蹤任務(JexHRetal.,(1966)A"critical"trackingtaskforman-machineresearchrelatedtotheoperator'seffectivedelaytime.NASAContractR印NASACR.:1-105)。MackworthClock測試是被廣泛用于測量持久的時間段中"警覺"、機警和精神集中的測試。受試者坐在計算機屏幕前，所述計算機屏幕展示60個點的環狀排列，所述60個點模擬時鐘上的秒標記。點以每500ms—個的速率，以順時針轉向短暫照亮。通常，該轉動以單個(一個點)跳躍繼續。告知受試者，該靶標罕見地、以不規則的間隔通過遺漏正常順序中的一個點，以兩個(連個點)跳躍繼續。這會提示受試者盡可能快地按下按鈕。在45分鐘的測試期間總共出現了30次這樣的情況。10個情況發生在各連續的15分鐘周期內，間隔范圍從8秒到7.2分鐘。臨界追蹤任務被用作知覺-運動表現任務(perceptual-motorperformancetask)，所述任務在第一命令補償知覺-運動協調任務(first-ordercompensatoryperceptual-motorcoordinationtask)中領!j量控帝U顯示的錯誤信號的能力。在該任務中，受試者必須通過使用靈敏的操縱桿控制計算機屏幕上不穩定的光標。錯誤會顯示為光標與水平線性標度的中點的水平偏差。受試者必須通過持續地進行補償性操縱桿運動，保持不穩定的光標處于軸線中心，將偏差降低至零。光標偏差的頻率作為時間的隨機、線性函數提高，因此要求受試者以逐漸更高的頻率進行補償性運動。受試者的補償性應答也會以下述頻率提高，從而喪失控制，所述頻率隨著具有提高的相位滯后(增加而不是減少錯誤的應答)。受試者喪失控制的頻率就是臨界頻率。將該測試進行五次；排除最低和最高得分計算平均臨界頻率，作為該測試的因變量(dependentvariable)。消耗飲品后90分鐘測定血漿Trp/LNAA比例，揭示了在所應用的實驗條件下，對血漿Trp/LNAA比例改變的顯著影響(PO.OOOl)。溶菌酶水解產物("Trp-hydr")的攝入將血漿Trp/LNAA值提高至0.25pmol/l。酪蛋白水解產物("plc")的攝入得到0.08pmol/1的Trp/LNAA比例(圖6)。各相關氨基酸的值在表5中提供。表5:攝入安慰劑("plc")或溶菌酶水解產物("Trp-hydr")后的氨基酸濃度(拜o1/1)。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>攝入酪蛋白水解產物后，通過暴露于壓力下，進行MackworthClock測試的兩組個體的表現均顯著受損。然而，攝入富含Trp的溶菌酶水解產物在抗壓組中防止了該受損的表現。非常驚人的是，富含Trp的水解產物在壓力傾向組中未防止這類受損的表現。獲得的數據在圖7中圖示。在臨界追蹤任務中，入CT值指出受試者達到的最終復雜度食品。入CT值越高，控制越好。本實驗中獲得的數據顯示暴露于壓力后，當消耗富含Trp的水解產物時XCT值顯著更高。在抗壓的個體中，能夠記錄相對于安慰劑處理16%的提高。非常驚人的是，也在該測試中，壓力傾向組的XCT值顯示在富含Trp的水解產物和安慰劑之間無顯著差異。權利要求1.生產組合物的工藝，所述組合物包含水溶性的、含色氨酸的肽并具有多于0.15的Trp/LNAA比例，所述工藝包括水解溶菌酶，優選地水解雞卵溶菌酶，以制備具有5和45之間的DH的水解產物，并任選地去除含精氨酸或賴氨酸的肽中的部分。2.根據權利要求1的工藝，其中所述組合物包含AW或GNW，優選地包含AW和GNW。3.—種組合物，其包含至少兩種不同的水溶性的、含色氨酸的肽，并且其中組合物的Trp/LNAA比例至少為0.15，優選地在0.15和1.8之間。4.根據權利要求3的組合物，其包含AW或GNW，優選地包含AW和GNW。5.包含至少兩種選自二肽或三肽的不同肽的組合物，其中選自二肽或三肽的所述兩種肽各自以占二肽和三肽總量至少5mol。/。的量存在，且其中總色氨酸中多于30mol%作為與肽結合的色氨酸存在，并且優選地，與肽結合的色氨酸中多于40mo1。/。、更優選地多于50moP/。、進一步更優選地多于60mol%、仍然更優選地多于70mol%和最優選地多于80mol%以二肽或三肽的形式存在，優選地所述組合物具有多于0.15的Trp/LNAA比例，優選地具有15和1.8之間的Trp/LNAA比例。6.包含溶菌酶水解產物的水溶性級分的組合物。7.根據權利要求3到6中任一項的組合物，其可通過權利要求1或2的工藝獲得。8.根據權利要求3到7中任一項的組合物，其為溶菌酶水解產物，優選地為雞卵溶菌酶水解產物。9.根據權利要求3到8中任一項的組合物，其中AW與GNW的摩爾比例在1比2禾B10比1之間，優選地在1比2禾口5比1之間。10.根據權利要求3到9中任一項的組合物，其還包含游離的色氨酸。11.下述組合物用于改善情緒、認知、食欲、機警、警覺、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的用途，或在用于情緒、食欲、機警、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的食物、飼料、膳食補劑或營養藥物組合物的制備中作為成分的用途，所述組合物是通過水解溶菌酶、優選地水解雞卵溶菌酶獲得的組合物，或是根據權利要求3到10中任一項的組合物。12.AW、SW或GNW用于改善情緒、認知、食欲、機警、警覺、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的用途，或在用于情緒、食欲、機警、睡眠開始和質量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應控制或性行為的食物、飼料、膳食補劑或營養藥物組合物的制備中作為成分的用途。13.溶菌酶生產下述組合物的用途，所述組合物包含至少兩種不同的水溶性、含色氨酸的肽，優選地肽AW和GNW，并具有多于0.15的Trp/LNAA比例。14.食物、寵物食物、飼料、膳食補劑或營養藥物組合物，其包含根據權利要求1或2的工藝生產的組合物，或根據權利要求3到10中任一項的組合物，或包含GNW、SW或AW。15.根據權利要求14的食物，其為嬰兒配方。16.根據權利要求3到10中任一項的組合物或水溶性含色氨酸肽用于在攝取肽或蛋白質后90分鐘內、優選地60分鐘內、最優選地30分鐘內提高血漿中Trp/LNAA比例的用途，或用于制備下述營養藥物組合物的用途，所述營養藥物組合物用于在攝取肽后90分鐘內、優選地60分鐘內、最優選地30分鐘內提高血漿中的Trp/LNAA比例。17.權利要求16的用途，其還包括與所述水溶性肽同時或幾乎同時地攝取蛋白質或含蛋白質的食物。18.根據權利要求16或17的用途，其中血漿中的Trp/LNAA比例變得比根據權利要求3到10中任一項的組合物或水溶性肽的Trp/LNAA比例更高。全文摘要本發明涉及生產組合物的工藝，所述組合物包含水溶性肽并具有多于0.15的Trp/LNAA比例，所述工藝包括水解溶菌酶(優選地為雞卵溶菌酶)以制備具有5和45之間的DH的水解產物。文檔編號C12P21/06GK101535494SQ200780041021公開日2009年9月16日申請日期2007年10月30日優先權日2006年11月2日發明者亞歷山大·露西雅·萊昂納德斯·迪沙托,安德烈·利納爾杜斯·魯斯·德,瓊瑞斯·克勞克,路泊·埃登斯,魯道夫·弗拉其蘇斯·威廉姆斯·柯納里斯·比克霍文·范申請人:帝斯曼知識產權資產管理有限公司