專利名稱：抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基的制作方法
技術領域：
本發明屬于體外診斷試劑領域，具體涉及一種抗萬古霉素金黃色葡萄球菌的培養基。
背景技術：
在我國，濫用抗生素的情況十分普遍。細菌多次與藥物接觸后，對藥物的敏感性減小甚 至消失，致使藥物對抗藥菌的療效降低甚至無效。金黃色葡萄球菌(簡稱金葡菌)在與抗生 素的"遭遇戰"中，先后戰勝了天然青霉素、氨芐青霉素、頭孢菌素等，甚至出現了可對萬古 霉素產生抗藥性的金葡菌(vancomycin-resistant staphylococcus aureus, 縮寫為VRSA)。細 菌抗藥性的不斷升級幾乎將醫生逼到了無藥可用的尷尬境地。眾多抗藥菌的出現，對醫院病 人也夠成了巨大的威脅。因此，及時準確地了解病人感染的細菌種類和抗藥情況是非常必要 和緊迫的。
選擇培養基是根據某些微生物具有特殊營養要求或對某些化學物質具有抗性而設計的， 是鑒別、分離微生物的常用方法。例如，在培養基中加入某種化學藥物，以限制對其敏感菌 的生長繁殖，從而將對其不敏感的目標微生物分離出來。為了進一步準確、方便地鑒別目標 微生物，可以在選擇性培養基中加入目標微生物特征性酶的顯色底物，將微生物的選擇性培 養和特征性酶檢測結合在一起。當目標微生物在培養基上生長時其菌落會呈現特定的顏色， 這是因為目標微生物所產生的特征性酶能夠降解顯色底物而釋放顯色原，顯色原呈現特殊顏 色或使顯色原的反應物顯色。干擾菌或被抑制或不產生特征性酶而不顯色，因而能被區別。 也即是說，利用這種培養基，只需通過觀察菌落的顏色、形態變化以及一些簡單試驗就可以 輕松鑒別目標微生物。目前，雖然市場上已經出現了抗甲氧西林金葡菌的顯色培養基，但還
未見適用于鑒別抗萬古霉素金葡菌的顯色培養基。
發明內容
本發明的目的在于為抗萬古霉素金黃色葡萄球菌提供一種營養豐富的培養基，并將抗萬 古霉素金葡菌的選擇性培養和其特征性酶的檢測結合在了一起，能夠方便地鑒別、分離抗萬
古霉素金葡菌。
為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為 一種抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基， 含有營養物質、凝固物質以及能夠抑制金葡菌以外的雜菌生長的抑制劑，所述培養基中還含
有萬古霉素。
每1000g所述培養基中含萬古霉素7-32mg。
所述的培養基中還含有顯色指示劑5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽和四唑氮藍。 每1000g所述培養基中含5-溴-4-氯-3-tl引哚磷酸鹽l-2g，含四唑氮藍0.3-lg。 培養基中所使用的雜菌抑制劑為亞碲酸鉀和氯化鋰，每1000g培養基中含亞碲酸鉀3-
8mg，含氯化鋰2-8g;其中亞碲酸鉀能夠抑制革蘭氏陰性菌的生長，與氯化鋰協同作用能夠
抑制金黃色葡萄球菌以外的雜菌的生長。
所述營養物質為胰酪胨、酵母粉、丙酮酸鈉，凝固物質為瓊脂，其在每1000g培養基中
的含量為胰酪胨12-18g、酵母粉2-8g、丙酮酸鈉5-15g、瓊脂10-18g;余量為水。其中胰酪胨、酵母粉為金黃色葡萄球菌提供了氮源和生長因子，丙酮酸鈉有利于金黃色葡萄球菌的生 長，瓊脂則起一定的凝固作用。
在本發明的技術方案中，胰酪胨、酵母粉、丙酮酸鈉、瓊脂及水為金黃色葡萄球菌的生 長提供了豐富的營養和適宜的環境。亞碲酸鉀與氯化鋰協同作用能夠很好地抑制金黃色葡萄 球菌以外雜菌的生長，避免了雜菌對顯色的干擾。向培養基中添加萬古霉素，則對萬古霉素 敏感的金葡菌被抑制生長，作為目標微生物的抗萬古霉素金葡菌因此而被分離出來。為了進 一步確認抗萬古霉素金葡菌，增加鑒別試驗的直觀性和準確性，本發明的培養基中還添加了 指示劑5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽和四唑氮藍。當抗萬古霉素金葡菌在培養基上生長時，5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽被抗萬古霉素金葡菌分泌的堿性磷酸酶降解，產生藍色的顯色原。顯色原與 四唑氮藍作用，轉變為紫紅色。因此，抗萬古霉素金葡菌菌落也會隨之呈現由藍色轉變為紫 紅色的現象，從而與其它抗藥菌相區別。
本發明的培養基將抗萬古霉素金葡菌的層層篩選培養和其特征性酶的檢測結合在一起， 能夠準確、直觀地檢測、鑒別抗萬古霉素金葡菌，其可操作性強，適于在醫院及其它研究機 構推廣，有助于指導醫生用藥和新型抗生素的開發。
具體實施例方式
下面以每1000g培養基為例，對本發明培養基的組成作進一步說明。
實施例1
每1000g培養基中含有瓊脂10g、胰酪胨18g、酵母粉7g、丙酮酸鈉llg、氯化鋰8g、 亞碲酸鉀5mg、萬古霉素24mg、 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽1.5g、四唑氮藍0.7g，余量為水。上 述原料混合均勻后升溫至100-110°C，加熱10min后灌裝在培養皿中即可。
實施例2
每1000g培養基中含有瓊脂13g、胰酪胨14g、酵母粉2g、丙酮酸鈉8g、氯化鋰2g、 亞碲酸鉀8mg、萬古霉素7mg、 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽lg、四唑氮藍0.3g，余量為水。上述 原料混合均勻后升溫至100-110'C，加熱15min后灌裝在培養皿中即可。
實施例3
每1000g培養基中含有瓊脂15g、胰酪胨16g、酵母粉4g、丙酮酸鈉5g、氯化鋰6g、 亞碲酸鉀3mg、萬古霉素15mg、 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽1.8g、四唑氮藍0.5g，余量為水。上 述原料混合均勻后升溫至100-110'C，加熱15min后灌裝在培養皿中即可。
實施例4
每1000g培養基中含有瓊脂18g、胰酪胨12g、酵母粉8g、丙酮酸鈉15g、氯化鋰5g、 亞碲酸鉀7mg、萬古霉素32mg、 5-溴-4-氯-3-卩引哚磷酸鹽2g、四唑氮藍lg，余量為水。上述 原料混合均勻后升溫至100-ll(TC,加熱10min后灌裝在培養皿中即可。
權利要求
1、一種抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基，含有營養物質、凝固物質以及雜菌抑制劑，其特征是所述培養基中還含有萬古霉素。
2、 如權利要求1所述的抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基，其特征是每1000g所述培養基中 含萬古霉素7-32mg。
3、 如權利要求1或2所述的抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基，其特征是所述的培養基中還 含有5-溴-4-氯-3-B引哚磷酸鹽和四唑氮藍。
4、 如權利要求3所述的抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基，其特征是每1000g所述培養基中 含5-溴-4-氯-3』引哚磷酸鹽l-2g，含四唑氮藍0.3-lg。
5、 如權利要求4所述的抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基，其特征在于培養基中所使用的雜 菌抑制劑為亞碲酸鉀和氯化鋰，每1000g培養基中含亞碲酸鉀3-8mg，含氯化鋰2-8g。
6、 如權利要求5所述的抗萬古霉素金黃色葡萄球菌培養基，其特征在于所述營養物質為胰酪 胨、酵母粉、丙酮酸鈉，凝固物質為瓊脂，其在每1000g培養基中的含量為胰酪胨12-18g、 酵母粉2-8g、丙酮酸鈉5-15g、瓊脂10-18g;余量為水。
全文摘要
本發明屬于體外診斷試劑領域，具體涉及一種鑒別抗萬古霉素金黃色葡萄球菌的培養基。本發明的培養基不僅含有營養物質、凝固物質和雜菌抑制劑，還含有萬古霉素以及顯色指示劑5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽和四唑氮藍。雜菌抑制劑能夠抑制金葡菌以外的雜菌生長，萬古霉素則能夠抑制對其敏感的金葡菌。指示劑能夠使抗萬古霉素金葡菌菌落呈現紫紅色，進一步與其它抗藥菌相區別。本發明將抗萬古霉素金葡菌的層層篩選培養和其特征性酶的檢測結合在一起，能夠準確、直觀地檢測、鑒別抗萬古霉素金葡菌，其可操作性強，適于在醫院及其它研究機構推廣，有助于指導醫生用藥和新型抗生素的開發。
文檔編號C12Q1/14GK101434983SQ20081023144
公開日2009年5月20日 申請日期2008年12月19日 優先權日2008年12月19日
發明者付光宇, 馮長城, 吳學緯, 崔曉曉, 康運凱, 楊紅云, 王則宇, 羅江衛, 鄭業煥 申請人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司