專利名稱：腦脊液感染細菌基因檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及基因領域，具體是一種腦脊液感染細菌基因檢測試劑盒。
背景技術：
隨著醫療手段的進步，神經外科手術(腦外傷、腦腫瘤、腦出血)病例日益增多。手術治療的同時，由于手術過程機體免疫系統受到較大創傷，導致機體免疫力下降，極易導致顱內感染，此外，醫院獲得性感染也是導致顱內感染的重要原因。顱內感染引發的細菌性腦脊髓膜炎是一種發病急、病死率高的常見的中樞神經系統疾病，如能得到及時、正確的診斷和治療，多數患者預后良好，少數感染嚴重者可導致死亡或留有后遺癥。因此，對腦脊液中感染的病原菌進行快速而準確的檢測和鑒定則顯得十分重要。姜緋等對579例顱腦術后患者腦脊液細菌生長分布試驗及藥物敏感試驗結果進行分析發現，腦脊液細菌培養陽性的細菌前十五位為凝固酶陰性葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、B群鏈球菌、類白喉棒狀桿菌、糞鏈球菌、牛鏈球菌、綠色氣球菌、洛菲不動桿菌、鮑曼不動桿菌、綠膿假單胞菌、大腸埃希菌、陰溝腸桿菌、產氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌。 徐明等收集北京天壇醫院神經外科1997年8月至2006年9月送檢的腦脊液標本。統計致病菌分布，分離到致病菌970株，其中革蘭氏陽性菌720株；革蘭氏陰性桿菌250株，排在前6位的致病菌分別為表皮葡萄球菌4% )，金黃色葡萄球菌(9. 4% )，不動桿菌 (6.9%)，腸桿菌屬(5% )，銅綠假單胞菌0.8%)，腸球菌0.8%)。而周建新等收集北京天壇醫院神經外科的2000年1月2004年12月的腦脊液標本，結果分離出致病菌438株， 排在前五位的分別是凝固酶陰性葡萄球菌(53.7% )、金黃色葡萄球菌(10.5% )、腸球菌 (6.2%)、不動桿菌(6. 2% )、銅綠假單胞菌(3. 7% )。和徐明得出結果一致。李光輝等對上海地區部分醫院1995年1月到2004年12月的腦脊液標本按常規方法進行分析，分離致病菌4 例，最常見的細菌分別是凝固酶陰性葡萄球菌、金黃色葡萄球菌屬、腸球菌屬、肺炎鏈球菌屬、不動桿菌屬、克雷伯菌屬、大腸埃希菌。靳桂明1(1等采用薈萃分析方法，對開顱術后顱內感染進行流行病學調查，共有46篇論文進入薈萃分析，其中有34篇論文用于開顱術后顱內感染發病率的統計，共調查43766例，發生顱內感染1137例，發病率為2. 60%;有沈篇論文統計顯示，顱內感染細菌培養陽性率為55. 41 %，金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球及其它凝固酶陰性葡萄球菌占40. 18%，銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌占32. 28%, 真菌占7. 13%。目前，國內外對腦脊液等臨床標本中病原菌的檢驗大多采用所謂的“金標準”-培養法，一般采集標本后需先進行增菌，出現陽性結果后，再分離單個菌落，通過形態、生理生化、免疫學等方法才能最終確診。該法靈敏度低、檢測周期長、易受細菌生理條件和抗生素使用的限制，且不能用于目前還不能培養細菌或新菌種的鑒定。熒光PCR的方法只能檢測一次性只能檢測一種或幾種細菌，而基因芯片具有體積微小、操作方便、能同時特異檢測多種生物分子等優點，為解決上述問題提供了一個新的方向。基于上述原因，開發研制一種簡單、快速、能夠精確檢測出顱內感染且鑒定出所感染大部分細菌的產品是非常必要的。
發明內容
本發明的目的是提供一種腦脊液感染細菌基因檢測試劑盒，用以檢測腦脊液中常見感染的病原菌群金黃色葡萄球菌、腸球菌(糞腸、屎腸)、表皮葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、綠膿桿菌、陰溝腸桿菌、鮑曼不動桿菌、洛菲不動桿菌。本發明的腦脊液感染細菌基因檢測試劑盒，包括(1) 一個基因芯片，其上帶有①檢測以上10種菌群的探針，探針為SEQ ID Nos :1_12 ；②標記有生物素點的DNA序列(Bio)，用于監控雜交是否成功，序列為SEQ ID No. 13 ；③帶有編碼β-球蛋白部分的DNA序列(IC)，作為內控點，用于監控PCR體系是否成功，序列為SEQ ID No. 14 ；(2)弓丨物用于擴增大多數常見細菌的16S rRNA保守序列的引物，DNA序列為SEQ ID Nos. 15-17 ；用于擴增細菌的23S rRNA保守序列的引物，DNA序列為SEQ ID Nos. 18-19 ； 以及用于擴增內控點(IC)的引物，DNA序列為SEQ ID Nos. 20-21。具體序列如下
權利要求
1.一種腦脊液感染細菌基因檢測試劑盒，包括(1)一個基因芯片，其上帶有①檢測菌群的探針，探針為SEQID Nos :1-12 ；②標記有生物素點的DNA序列，序列為SEQID No. 13 ；③帶有編碼β-球蛋白部分的DNA序列，作為內控點，序列為SEQID No. 14；(2)弓丨物用于擴增大多數常見細菌的16SrRNA保守序列的引物，DNA序列為SEQ ID Nos. 15-17 ；用于擴增細菌的23S rRNA保守序列的引物，DNA序列為SEQ ID Nos. 18-19 ；以及用于擴增內控點的引物，DNA序列為SEQ ID Nos. 20-21。
2.權利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述探針5'或3'端經過胺基化處理。
3.權利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述基因芯片包括用于定位探針的位置標記。
4.權利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述基因芯片的探針是固定在尼龍膜上。
5.權利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述引物的5'端標記有生物素。
全文摘要
本發明公開了一種腦脊液感染細菌基因檢測試劑盒，包括(1)一個基因芯片，其上帶有①檢測以上10種菌群的探針，探針為SEQ ID Nos1-12；②標記有生物素點的DNA序列，序列為SEQ ID No.13；③帶有編碼β-球蛋白部分的DNA序列，作為內控點，序列為SEQ ID No.14；(2)引物用于擴增大多數常見細菌的16S rRNA保守序列的引物，DNA序列為SEQ IDNos.15-17；用于擴增細菌的23S rRNA保守序列的引物，DNA序列為SEQ ID Nos.18-19；以及用于擴增內控點的引物，DNA序列為SEQ ID Nos.20-21。本發明所述腦脊液感染細菌基因檢測試劑盒能夠快速準確的檢測10種腦脊液中常見感染細菌種類，對于顱內感染患者能夠得到及時、正確的診斷和治療具有重要的意義。
文檔編號C12R1/19GK102251053SQ201110233170
公開日2011年11月23日 申請日期2011年8月11日 優先權日2011年8月11日
發明者劉志忠, 康熙雄, 朱娟娟 申請人:廣東凱普生物科技股份有限公司