專利名稱：小分子化合物tws119作為神經干細胞分化誘導劑的新應用的制作方法
小分子化合物TWS119作為神經干細胞分化誘導劑的新應用技術領域
本發明所涉及的是再生醫學和細胞生物學領域，具體涉及TWS119作為誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的誘導劑的新應用。
背景技術：
神經干細胞(neural stem cells, NSCs)存在于胚胎和成年哺乳動物的中樞神經系統，具有自我更新和多向分化潛能，能分化為各種神經細胞，如神經元、少突膠質細胞以及星形膠質細胞等，為中樞神經系統損傷、神經系統變性疾病或遺傳性代謝疾病、神經退行性疾病等提供了新的治療策略。中樞神經系統損傷后，大部分NSCs分化為膠質細胞，在損傷部位形成膠質瘢痕，阻礙了軸突生長，使損傷不能修復。因此，提高NSCs向神經元的分化比例成為神經科學研究的熱點。
目前，國內外通用的體外誘導NSCs增殖分化的方法是給予絲裂原，如堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)及表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)等,干預維持培養的神經干細胞,使其處于增殖狀態,除去絲裂原并添加含胎牛血清的培養基后，誘導NSCs進行分化，但這種方法所得到的分化細胞主要是膠質細胞，神經元比例較低。
TWSl 19 (3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡咯并[2，3_D]嘧啶_4_基]氧基]苯酚)是一種小分子有機化合物，最早是美國Scripps Research Institute的Wu等在2002年合成的[Wu，X. et al J. Am. Chem. Soc. (2002) 124,14520-14521]。TffSl 19 的結·構式如下
權利要求
1.TWS119(4，6-二取代吡咯[2，3-d]嘧啶)作為誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的誘導劑的新應用。
2.誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基，其特征在于所述細胞培養基中含有誘導劑TWS119。
3.根據權利要求2所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基，其特征在于所述細胞培養基中含有濃度為200 500nM的誘導劑TWSl 19。
4.根據權利要求3所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基，其特征在于所述細胞培養基中含有濃度為350nM的誘導劑TWSl 19。
5.根據權利要求2、3、4之任一權利要求所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基，其特征在于所述細胞培養基中還含有胎牛血清。
6.根據權利要求5所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基，其特征在于所述細胞培養基中還含有體積百分濃度為5 20%的胎牛血清。
7.根據權利要求6所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基，其特征在于所述細胞培養基中還含有體積百分濃度為10%的胎牛血清。
8.權利要求2所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基的制備方法，包括以下步驟a.DMEM/F12基礎培養液的制備取制備DMEM/F12基礎培養液IL用量的DMEM/ F12(l I)干粉I袋、谷氨酰胺2. 5g，用濃度為O. lmol/L、pH值為7. 35的磷酸鹽緩沖液即 PBS溶解并稀釋至1L，調節pH值為7. 5，用O. 2um微孔濾膜過濾除菌，即得；b.細胞培養基的制備按照制備IOOml細胞培養基計，將誘導劑TWSl19 (200 500nM) 加入步驟a制得的DMEM/F12基礎培養液70ml使溶解，用O. 2um微孔濾膜過濾除菌后，加入胎牛血清5 20ml、青霉素與鏈霉素的混合液(即由濃度為4萬U/ml的青霉素溶液、濃度為4萬U/ml的鏈霉素溶液按1:1混合而成)的溶液1ml，最后用DMEM/F12基礎培養液定容至100ml，即得。
9.根據權利要求8所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基的制備方法，其特征在于步驟b中誘導劑TWSl 19的終濃度為350nM。
10.根據權利要求9所述的誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基的制備方法，其特征在于步驟b中誘導劑TWSl 19的終濃度為350nM，胎牛血清的加入量為10ml。
全文摘要
本發明公開了TWS119(4，6-二取代吡咯[2，3-d]嘧啶)作為誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的誘導劑的新應用，公開了一種誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化的細胞培養基，含有誘導劑TWS119，并且提供了此種細胞培養基的制備方法；實驗證實在哺乳動物神經干細胞分化培養基中加入誘導劑TWS119后，神經干細胞向神經元分化的比例明顯提高，特別是當TWS119濃度為350nM時效果最佳。含有TWS119的細胞培養基可誘導哺乳動物神經干細胞向神經元分化，具有潛在的臨床應用價值。
文檔編號C12N5/0793GK103031274SQ20111029114
公開日2013年4月10日 申請日期2011年9月30日 優先權日2011年9月30日
發明者田杰 申請人:北京清美聯創干細胞科技有限公司