專利名稱：一種支原體培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及檢驗口腔微生物培養領域，具體涉及一種支原體培養基。
背景技術：
非淋球菌性尿道炎(nongonococcalurethritis, NGU)在性傳播疾病(sexually transmitted disease, STD)中所占的比例逐年升高,無論是國外還是國內都居于首位,而解尿支原體(ureaplasma urealyticum,Uu)和人型支原體(Mycoplasma hominis,Mh)是NGU 的主要病原體。因此，準確有效地檢測支原體的存在，成為診斷NGU的關鍵因素之一。Uu和 Mh的檢測目前國內大多采用液體培養法，培養基由黃變紅且液體澄清為陽性，不變色或者變色但液體渾濁為陰性。其原理是根據Uu和Mh分解培養基中的尿素產堿使pH上升，而培養基中的酚紅指示劑在由酸變堿過程中顏色由黃變紅，觀察顏色的變化來判斷陽性。但是能分解尿素的微生物很多，一些細菌能使顏色變紅造成假陽性，還有一些細菌和真菌(尤其是白色念珠菌)能使培養基變紅和渾濁，檢驗科一般會判斷陰性，但如果其中同時有支原體生長，由于渾濁就會造成假陰性的判斷。前國內商品化的支原體培養基(包括液體和固體) 一般添加青霉素類和多粘菌素，青霉素對大多數革蘭陽性球菌的作用較強，對腸球菌作用較差，多粘菌素為多肽類抗生素，對綠膿桿菌等革蘭氏陰性桿菌作用強大，但對G-球菌和 G+細菌均無作用，這兩種對真菌都無抑制作用。所以，如果標本中有混合真菌感染，污染少量則僅變紅而不造成沉淀，可能形成假陽性的判斷；污染量多有沉淀和渾濁，可能形成假陰性的判斷。在固體培養基上，真菌菌落的生長，會掩蓋支原體生長的瓊脂表面，使不能觀察到支原體的典型菌落。
發明內容
本發明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供一種適合于支原體生長的培養基，降低檢驗結果的假陽性和假陰性發生率。本發明解決其技術問題的技術方案是一種支原體培養基，其特征在，配制 IOOOrnl培養基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酚紅20mg ;氯化鈉5. 2g ；L-精氨酸0. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ;無菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至 IOOOrnl。優化方案中，每1000ml培養基還含有京尼平酸2mg。優化方案中，每1000ml培養基還含有濃度200g/L的功勞木水煮液200ml。以上各方案的固體培養基配方中，每1000ml培養基還含有瓊脂15g。其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量；牛心浸粉含有各種多肽、脂肪、生長因子、 激素等，這些物質對促進支原體的繁殖和生長都是很重要的因素；酵母浸粉提供支原體生長所需的維生素B族；氯化鈉維持均衡的滲透壓，且由于支原體較其他的細菌更為耐受高滲環境，所以氯化鈉水平適當的提高還有利于抑制其他細菌生長；瓊脂是培養基的凝固劑； 無菌綿羊血提供能量環境；L-精氨酸屬氨基酸類，為營養劑；苯酚紅為指示劑；氟康唑可以有效的抑制白色念珠菌在其中的生長；紫番荔枝素有抑制白假絲酵母的真菌作用，且還有一定的細胞毒作用，2mg/L的濃度可以有效的抑制雜菌成長，較普通支原體培養集中使用的高毒醋酸鉈安全。京尼平酸能廣泛抑制革蘭氏陰、陽性菌的生長。功勞木為小檗科植物闊葉十大功勞、細葉十大功勞的莖或莖皮，現代研究表明，功勞木水煎劑在體外對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌均有抑制作用。本發明與現有技術相比較，具有支原體檢出可靠的特點。
具體實施例方式以下結合實際情況，對本發明的具體實施方式
作詳細說明。實施例I液體培養基，配制IOOOml培養基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 無菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來制備實施例2固體培養基。實施例3液體培養基，配制IOOOml培養基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 京尼平酸2mg ;無菌綿羊血200ml ;蒸懼水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來制備實施例4固體培養基。實施例5液體培養基，配制IOOOml培養基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹紅20mg ;氯化鈉5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 濃度200g/L的功勞木水煮液200ml ;無菌綿羊血200ml ;蒸餾水加至總量為1000ml。同配方中加入瓊脂15g既可以用來制備實施例6固體培養基。實施例6固體培養基制備方法為 取功勞木加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得功勞木水煮液；將蛋白胨、牛心浸粉、酵母浸粉、苯酚紅、氯化鈉、瓊脂、功勞木水煮液和蒸餾水混勻，在渦旋器上震蕩15min，過濾，濾液210°C滅菌15 min,冷卻到45°C，加入無菌綿羊血、滅菌氟康唑、滅菌紫番荔枝素，混勻后滅菌蒸餾水定容到IOOOml后分裝。所述的功勞木水煮液濃度為200g/L，指的是每升功勞木水煮液中含有生藥200g。本發明所得支原體培養基具有檢出可靠、支原體分離率高的特點，為臨床資料充分證明，有關資料如下。I對象與方法
I. I培養基制備共設8組，分別為實施例f 6方案組和對照I組、對照2組。對照I 組為支原體肉湯液體培養基，對照2組為支原體肉湯固體培養基。I. 2標本采集培養方法婦科和皮膚科門診患者的泌尿生殖道標本拭子108例。 采集方法男性患者用無菌棉球擦干尿道口后，用無菌棉拭子插入尿道口疒3 cm,輕輕旋轉后取出；女性患者清除陰道口分泌物后，用無菌棉拭子插入宮頸口廣2 cm，輕輕旋轉后取出。用拭子先接種固體培養基，然后用于液體培養基接種，36 °C培養。I. 3結果判定方法
I.3. I陽性確定金標準顯微鏡下見到典型支原體生長結合生化反應確認Uu、Mh。I. 3. 2液體培養基陽性確定標準分別于2Γ48 h觀察顏色由黃色變紅色，嚴格按照結果判讀表讀取結果。
I. 3. 3固體培養基陽性確定標準為24 h后逐日觀察顏色的變化(黃色變為紅色)。同時在顯微鏡下觀察典型支原體菌落:Mh煎蛋樣菌落(10(Γ300μπι)，υιι棕褐色顆粒、 棕褐色菌線或棕褐色團塊樣菌落。2結果108份標本最后確定陽性為41例，各組陽性例數見下表。
金標準實施例I實施例2實施例3實施例4實施例5實施例6對照I組對照2組例數(例)413937403940424529 3結論實施例1飛培養基可以有效的提高泌尿生殖道標本支原體檢驗的準確率，減少假陰性和假陽性的發生，使婦科患者的臨床診斷正確率進一步加強。
權利要求
1.一種支原體培養基，其特征在，配制IOOOml培養基的配方中含有蛋白胨15g ；牛心浸粉Sg ；酵母浸粉5g ；苯酌■紅20mg ；氯化鈉5. 2g ；L-精氨酸O. 5g ；氟康唑30mg ；紫番荔枝素2mg ；無菌綿羊血200ml ；蒸餾水加至總量為1000ml。
2.根據權利要求I所述的一種支原體培養基，其特征在于每IOOOml培養基還含有京尼平酸2mg。
3.根據權利要求I所述的一種支原體培養基，其特征在于每IOOOml培養基還含有濃度 200g/L的功勞木水煮液200ml。
4.根據權利要求I至3任意一種所述的一種支原體培養基,其特征在于每IOOOml培養基中還含有瓊脂15g。
全文摘要
本發明公開了一種支原體培養基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml培養基的配方中含有蛋白胨15g；牛心浸粉8g；酵母浸粉5g；苯酚紅20mg；氯化鈉5.2g；L-精氨酸0.5g；氟康唑30mg；紫番荔枝素2mg；無菌綿羊血200ml；蒸餾水加至1000ml。本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、支原體分離率高的特點。
文檔編號C12Q1/04GK102605038SQ20121007019
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月16日 優先權日2012年3月16日
發明者李建新 申請人:李建新