專利名稱：畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種復合菌，特別涉及一種畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法、及其應用。
背景技術：
發酵飼料是指在人工控制條件下，微生物通過自身的代謝活動，將植物性、動物性和礦物性物質中的抗營養因子分解或轉化，產生更能被牲畜采食消化、吸收的養分更高且無毒害作用的飼料原料。生產畜禽發酵飼料的微生物主要有酵母菌和乳酸菌，有時還有少量的芽孢桿菌。但是對于普通的畜禽飼料，如果含水量達到30%以上，有適量的酵母菌和乳酸菌就足夠啟動發酵了。目前，畜禽養殖行業逐漸開始推廣使用發酵飼料，但是生產發酵飼料的菌種都是由專業的生物技術公司生產，生產工藝比較復雜，價格也很高。實際上，生產 畜禽發酵飼料用的菌種制劑不需要很復雜的操作工藝，也不需要很大的設備投入，一些簡便的生產技術同樣能達到很理想的效果。
發明內容
有鑒于此，本發明的目的在于提供一種畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法、及其應用，制備復合菌制劑的工序少，工藝簡單，操作方便，無需大型設備的投入，推廣性強，節約經濟成本；所制備出的復合菌制劑能夠有效促進飼料營養成分的轉化，提高飼料轉化率。本發明公開一種畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，所述復合菌制劑為含有面包酵母菌和乳酸菌的復合菌制劑，所述乳酸菌為采用高密度液體厭氧培養的厭氧乳酸菌，所述復合菌制劑的制備方法包括以下步驟a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:19-22混合攪拌至紅糖完全溶解并密封存儲，并在溫度為105-115°C之下消毒18-22分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用1-3倍于牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:25-30的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，將該混合液在溫度為115-125 下消毒18-22分鐘后冷卻至常溫，然后加入重量比為混合液乳酸菌=50:0. 05-0. I的乳酸菌，并在溫度為35-40°C下恒溫培養22-26小時，即得接種種液；c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為35-45°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入30-40乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3-7分鐘，然后加入1-2吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌1-4分鐘，制得生產畜禽發酵飼料用復合菌制劑；進一步，步驟a中，將紅糖與牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:20混合攪拌至紅糖完全溶解并密封存儲，并在溫度為110°c之下消毒20分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；進一步，步驟a中，所述牛奶為不含抗生素且未經稀釋的牛奶； 進一步，步驟b中，用2倍于牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:28的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，將該混合液在溫度為120°C下消毒20分鐘后冷卻至常溫，然后加入重量比為混合液乳酸菌=50:0. 08的乳酸菌，并在溫度為37°C下恒溫培養24小時，即得接種種液；
進一步，步驟c中，將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為40°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；進一步，步驟d中，將步驟c中的乳酸菌培養液加入35乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附5分鐘，然后加入I. 5吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌3分鐘，制得生產畜禽發酵飼料用復合菌制劑；進一步,所述厭氧乳酸菌包括嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、糞腸球菌(Enterococcus. faecalis)和屎腸球菌(Enterococcus. faecium)中的一種或兩種以上混合物。進一步，所述面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌；本發明還公開一種畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為0. 1-0. 2%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑。本發明的有益效果本發明的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法、及其應用，選用的乳酸菌同型乳酸發酵的厭氧菌，這些乳酸菌主要包括屎腸球菌、糞腸球菌和嗜熱鏈球菌，它們都是畜禽養殖業最常用的乳酸菌，代謝過程基本不產生氣體，只要保持發酵體系有較好的密閉性，這些乳酸菌就可以很好地生存和代謝，對絕大多數畜禽飼料的發酵都有較好的適用性。選用的酵母菌是面包酵母菌，就是商業市場上流通的生產面包的酵母菌，每克面包酵母干粉含100億Cfu活性酵母菌；這種酵母液具有很好很廣泛的適用范圍，是一種生產畜禽發酵飼料很好的微生物。特別是在發酵的起始階段，這種酵母菌有很強的發酵力，可以快速地消耗原料中殘留的氧氣，為乳酸菌的快速繁殖和正常代謝提供很好的厭氧環境。面包酵母菌是采用成熟的面包酵母干粉(安琪酵母粉，食品級面包酵母，已商業化流通)。乳酸菌采用高濃度液態培養，培養結束后用干燥的麥芽粉吸附，吸附的比例是30 40。即30 40倍重量的麥芽粉與I倍重量的液態乳酸菌培養液混合。由于普通干燥麥芽粉的含水量一般都不超過5%，因此通過大比例吸附稀釋后，最終產品中的含水量一般不超過9. 0%。在真空包裝條件下可存放3-6個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在50-65%左右。這種復合菌產品在畜禽發酵飼料中接種0. I 0. 2%就可以很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。
具體實施例方式實施例一a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:20混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為110°C之下消毒20分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。
b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用2倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:28的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為120°C下消毒20分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. 08的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為37°C下恒溫培養24小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為40°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入35乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附5分鐘，即35倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入I. 5吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌3分鐘，即I. 5倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母 菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 15%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為嗜熱鏈球菌；本實施例中，將嗜熱鏈球菌按同等重量比替換為糞腸球菌、屎腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O. 6%，在真空包裝條件下存放6個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在65%。實施例二a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:19混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為105°C之下消毒18分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用I倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:25的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為115°C下消毒18分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. 05的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為35°C下恒溫培養22小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液(后密封存儲，在溫度為35°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入30乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3分鐘，即30倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入I吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌I分鐘，即I倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億Cfu的活性酵母菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 1%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為糞腸球菌；本實施例中，將糞腸球菌按同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、屎腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O . 8%，在真空包裝條件下存放3個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在50%。實施例三a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:22混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為115°C之下消毒22分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用3倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:30的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為125°C下消毒22分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. I的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為40°C下恒溫培養26小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為35°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入30乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3分鐘，即30倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入I吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌I分鐘，即I倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 1%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為屎腸球菌；本實施例中，將屎腸球菌按同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O. 8%，在真空包裝條件下存放3個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在50%。實施例四a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:22混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為105°C之下消毒22分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用3倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:30的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為115°C下消毒22分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. I的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為40°C下恒溫培養22小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度 為35°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入40乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3分鐘，即40倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入2吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪7分鐘，即2倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 15%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為嗜熱鏈球菌；本實施例中，將嗜熱鏈球菌按同等重量比替換為糞腸球菌、屎腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O. 7%，在真空包裝條件下存放5個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在60%。實施例五a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:19混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為112°C之下消毒19分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用2倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:27的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為122°C下消毒19分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. 06的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為37°C下恒溫培養25小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為42°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入32乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3分鐘，即32倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入I. 5吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌I分鐘，即I. 5倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。
本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 18%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為屎腸球菌；本實施例中，將屎腸球菌按同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O. 7%，在真空包裝條件下存放4個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在55%。實施例六a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:21混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為108°C之下消毒21分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用I倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:26的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為118°C下消毒18分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. 07的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為39°C下恒溫培養25小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液(后密封存儲，在溫度為43°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入33乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3分鐘，即33倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入I. 9吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌I分鐘，即I. 9倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 2%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為糞腸球菌；本實施例中，將糞腸球菌按同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、屎腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O. 75%，在真空包裝條件下存放6個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在63%。實施例七a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:21混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為114°C之下消毒19分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用2倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:26的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為121°C下消毒22分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. I的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為36°C下恒溫培養25小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為38°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液；d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入36乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3分鐘，即36倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入2吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪7分鐘，即2倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 2%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為嗜熱鏈球菌；本實施例中，將嗜熱鏈球菌按同等重量比替換為糞腸球菌、屎腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O. 75%，在真空包裝條件下存放6個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在62%。實施例八
a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與未經稀釋且不含抗生素的牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:20混合攪拌至紅糖完全溶解，然后分裝在三角瓶中，瓶口用棉塞封口，外包牛皮紙密封存儲，并在溫度為108°C之下消毒18分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基；紅糖也可有蔗糖替代，同樣能達到實驗目的。b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用I倍于無抗生素牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:30的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，把溶液裝在玻璃瓶中，用橡膠塞密閉玻璃瓶口，將該混合液在溫度為124°C下消毒26分鐘后冷卻至常溫以后轉移到超凈工作臺上，然后打開橡膠瓶塞加入重量比為混合液厭氧乳酸菌=50:0. I的厭氧乳酸菌并用橡膠塞密閉瓶口，轉移到恒溫培養箱內，并在溫度為40°C下恒溫培養23小時，即得接種種液；成熟的種液如果不及時用，需要保存在4°C冰箱內，有效期為10天。c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為39°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液； d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入37乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3分鐘，即37倍重量的麥芽粉與I倍重量的乳酸菌培養液混合，然后加入I吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪6分鐘，即I倍重量的面包酵母粉與I倍重量的乳酸菌培養液(吸附后的)混合，面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌，制得畜禽發酵飼料用復合菌制劑，將復合菌制劑進行真空裝袋保存。本實施例的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為O. 1%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，就能很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。本實施例中，所述厭氧乳酸菌為嗜熱鏈球菌；本實施例中，將嗜熱鏈球菌按同等重量比替換為糞腸球菌、屎腸球菌中的一種，或者按照同等重量比替換為嗜熱鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌中的混合物，均得到合格的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，所得產品性質并無明顯差別。本實施例制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑，含水量為O. 65%，在真空包裝條件下存放6個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在58%。上述實施例中，面包酵母菌粉、乳酸菌和麥芽粉均為外購產品，乳酸菌為厭氧型乳酸菌。而對于以上技術效果，實施例一的配比以及工藝參數，使用效果最好，明顯優于其它實施例，為最佳。由此可見，上述方法制備的畜禽發酵飼料用復合菌制劑在真空包裝條件下可存放3-6個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在50-65%左右。這種復合菌產品在畜禽發酵飼料中接種O. I O. 2%就可以很好地啟動發酵，同時適用于好氧發酵和厭氧發酵，對于厭氧發酵體系更合適。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的宗旨和范圍，其均應涵蓋在本發明的權利要求范圍當中。
權利要求
1.一種畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于所述復合菌制劑為含有面包酵母菌和乳酸菌的復合菌制劑，所述乳酸菌為采用高密度液體厭氧培養的厭氧乳酸菌，所述復合菌制劑的制備方法包括以下步驟 a.制備待接種的液體乳酸菌培養基將紅糖與牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:19-22混合攪拌至紅糖完全溶解并密封存儲，并在溫度為105-115°C之下消毒18-22分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基； b.制備液體乳酸菌培養基的接種種液用1-3倍于牛奶重量倍的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:25-30的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，將該混合液在溫度為115-125 下消毒18-22分鐘后冷卻至常溫，然后加入重量比為混合液乳酸菌=50:0. 05-0. I的乳酸菌，并在溫度為35-40°C下恒溫培養22-26小時，即得接種種液； c.將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為35-45°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液； d.將步驟c中的乳酸菌培養液加入30-40乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附3-7分鐘，然后加入1-2吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌1-4分鐘，制得生產畜禽發酵飼料用復合菌制劑。
2.根據權利要求I所述的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于步驟a中，將紅糖與牛奶按重量比為紅糖牛奶=1:20混合攪拌至紅糖完全溶解并密封存儲，并在溫度為110°C之下消毒20分鐘，然后冷卻至常溫即為待接種的液體乳酸菌培養基。
3.根據權利要求2所述的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于步驟a中，所述牛奶為不含抗生素且未經稀釋的牛奶。
4.根據權利要求3所述的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于步驟b中，用2倍于牛奶重量的水將牛奶稀釋，然后加入重量比為蔗糖牛奶稀釋液=1:28的蔗糖后攪拌至蔗糖完全溶解，將該混合液在溫度為120°C下消毒20分鐘后冷卻至常溫，然后加入重量比為混合液乳酸菌=50:0. 08的乳酸菌，并在溫度為37°C下恒溫培養24小時，即得接種種液。
5.根據權利要求4所述的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于步驟c中，將步驟a中的液體乳酸菌培養基接入步驟b中的接種種液后密封存儲，在溫度為40°C下恒溫靜息培養至培養基出現明顯的凝固狀，即得乳酸菌培養液。
6.根據權利要求5所述的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于步驟d中，將步驟c中的乳酸菌培養液加入35乳酸菌培養液重量倍的干燥麥芽粉吸附5分鐘，然后加入I. 5吸附后乳酸菌培養液重量倍的面包酵母粉混合攪拌3分鐘，制得生產畜禽發酵飼料用復合菌制劑。
7.根據權利要求6所述的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于所述厭氧乳酸菌包括嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、幾腸球菌(Enterococcus.faecalis)和屎腸球菌(Enterococcus. faecium)中的一種或兩種以上混合物。
8.根據權利要求7所述的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法，其特征在于所述面包酵母菌采用每克面包酵母干粉含100億cfu的活性酵母菌。
9.根據權利要求8制得的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的應用，其特征在于向待發酵的飼料原料中加入重量百分比為0. 1-0. 2%的畜禽發酵飼料用復合菌制劑。
全文摘要
本發明的畜禽發酵飼料用復合菌制劑的制備方法、及其應用，選用的乳酸菌同型乳酸發酵的厭氧菌，主要包括屎腸球菌、糞腸球菌和嗜熱鏈球菌，是畜禽養殖業最常用的乳酸菌，代謝過程基本不產生氣體，只要保持發酵體系有較好的密閉性，對絕大多數畜禽飼料的發酵都有較好的適用性。選用的酵母菌是面包酵母菌，就是商業市場上流通的生產面包的酵母菌，每克面包酵母干粉含100億cfu活性酵母菌；制備出的復合菌制劑含水量一般不超過9.0%，在真空包裝條件下可存放3-6個月，酵母菌的數量基本不變，活性乳酸菌的數量保存在50-65%左右。這種復合菌產品在畜禽發酵飼料中接種0.1～0.2%就可以很好地啟動發酵。
文檔編號C12N1/20GK102864104SQ20121033279
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月10日 優先權日2012年9月10日
發明者錢昱龍 申請人:云南軒瑜生物科技有限公司