專利名稱：一種具抗前列腺癌作用的魚骨膠原多肽的制備方法
技術領域：
本發明涉及到ー種天然產物提取領域，尤其是一種采用生物酶學法制備魚骨中的膠原多肽的方法。
背景技術：
目前，提取膠原多肽的原料以牛、豬等陸產動物的皮、骨為主，數量有限，特別是當受到各種疫情及疾病影響時，膠多蛋白及多肽的安全性受到嚴重的質疑。而水產動物的皮、骨等含有豐富的膠原蛋白，是安全的膠原蛋白及多肽的來源。魚骨中蛋白質90%為膠原、骨膠原及軟骨素(酸性粘多糖)，有增強皮下細胞代謝，延緩衰老的作用。骨蛋白中氨基酸含量豐富，含有構成蛋白質的所有氨基酸，包括人體必需的8種氨基酸。提取膠原蛋白及多肽所采用的方法有酸法、堿法及酶法，但大量的酶法提取前都 采用一部分的酸或是堿對原料進行預處理，從而導致生產過程中大量的鹽離子溶液的后續處理及殘留，影響生產效率及產品性能。采用生物酶法提取制備骨中的膠原多肽主要把握酶解的pH，時間，溫度，料液比對酶解過程的影響。本實驗采用復合風味蛋白酶，多個水解位點，在2-3h內，對骨中的膠原蛋白的多個位點進行定向切斷，將大分子的膠原蛋白分解為小分子片段的膠原多肽分子。此方法對魚骨的處理，充分提高了魚骨廢棄物的附加值，既可變廢為寶，又可保護環境，充分實現環保型生產。
發明內容
本發明的目的在于開發具有抑制前列腺癌的魚骨膠原多肽。以馬面魚骨魚骨為原料，采用生物酶工程法，將魚骨中的骨膠原蛋白通過復合的風味蛋白酶的作用，在最適宜的酶解條件下，制取骨膠原多肽。本發明的有益效果和功能活性作用在于1、通過本發明的魚骨膠原蛋白粉末對前列腺PC-3癌細胞的體外凋亡實驗，結果表明，該魚骨膠原粉末對前列腺PC-3癌細胞有顯著的抑制作用。且具有明顯的量效關系，劑量為20μ g/ml、50l·! g/ml、100l·! g/ml，抑制率分別為0.3.8^.67.3 ^ 2、本發明的黃酮粉末通過熒光分析，表明對轉錄因子NF-κ B活力有顯著的抑制作用，當黃銅粉末的劑量為lOOyg/ml時，熒光素酶的熒光強度僅為對照組的40%。3、本發明還具有材料資源豐富價格低廉，設備簡便，產品提取率高，，在藥用以及功能食品開發前景良好。
具體實施例方式為獲得具有抗前列腺癌的魚骨膠原多肽，本發明的具體實施方案如下魚骨的前處理魚骨洗浄，120°C高壓20min ；酶解粉碎高壓后的魚骨及流出液，不調節pH，加入風味蛋白酶6%，以料液比為2 I補水，溫度55-60°C，攪拌、酶解。2-3h后，90°C滅酶10min，8000轉離心15min，分離過濾。魚骨膠原多肽溶液經過冷凍真空干燥12h，得率為5 %，收集粗魚骨膠原多肽粉末。魚骨膠原多肽的抗前列腺癌實驗結果與現有技術相比，本發明的優點與有益效果是本發明采用具有以下特點酶源穩定，低成本，エ藝簡單，操作方便，設備投資少，提取時間短，提取溫度低，一次性提取率高，不使用任何鹽溶液對原料進行預處理，操作環境友好等，適合エ業化生產。
權利要求
1.一種具有抗前列腺癌作用的魚骨膠原多肽，其特征在于魚骨經酶解得到酶解液，過濾后經冷凍干燥制得魚骨膠原多肽粉末。
2.按權利要求I所述的魚骨，其特征在于其為馬面魚骨。
3.一種具有抗前列腺癌作用的魚骨膠原多肽制備方法，其特征在于以馬面魚骨為原料，經前處理后，粉碎后加入蛋白酶酶解，滅酶經離心過濾得酶解液，酶解液經冷凍干燥即得馬面魚骨膠原多肽粉末。
4.按權利要求3所述的制備方法，其特征在于所用酶為風味蛋白酶，酶解的工藝自然pH，加入風味蛋白酶6%，以料液比為2 I補水，溫度55-60°C，攪拌、酶解2-3h。
5.按權利要求3所述的制備方法，其特征在于滅酶溫度為90°C，時間10分鐘，離心為8000轉/分鐘，時間為15分鐘。
全文摘要
一種具有抗前列腺癌作用的魚骨膠原多肽，此多肽采用生物酶工程法制得，屬于天然產物的領域。此魚骨膠原多肽具有強的抗氧化及抗癌效果。其制備過程是魚骨洗凈，120℃高壓20到30min，保持自然狀態下的pH為6.5左右，加入復合蛋白酶1％，料液比2∶1，提取溫度55℃～60℃，提取時間2～3h，離心分離，即可得到魚骨膠原多肽提取液。本發明涉及的骨膠原多肽，不添加任何的鹽離子溶液，提取時間短，溫度低，酶解液無苦味。本方法得到的魚骨膠原多肽適合于科研實驗及工業化生產，值得在食品保健品及化妝品行業推廣。
文檔編號C12P21/06GK102851346SQ20121035344
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月13日 優先權日2012年9月13日
發明者丁利君, 黃聰華, 楊露, 龐文聰 申請人:廣東工業大學