專利名稱：一種枯草芽孢桿菌dj-6菌株及在草莓病害防治上的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物及用途，更具體地說涉及一種枯草芽孢桿菌OfeciJAz1Ssubtiiis)Y)y&菌株、用途及其制劑的制備方法，屬于生物農藥技術領域。
背景技術：
由植物病原真菌圍小叢殼菌(67o 6 Ti 77a侵染引發的草莓炭疽病、灰葡萄孢菌cinerea)侵染引發的草莓灰霉病、尖孢鐮刀菌草莓專化型oxysporium Schl. f. fragariae Winks et Wiliams)侵染引發的草莓枯病和由大_花輪枝抱菌(alboatrum和Verticillium t/aA7ia<9)侵染引發的草莓黃萎病是草莓上主要的真菌病害。草莓病害防治效果的高低，將直接影響到產量和種植戶的收 益。草莓病害的防控常用化學藥劑有喃菌酯(azoxystrobin)、醚菌酯(kresoxim-methyl)、苯醚甲環唑(difenoconazole)、烯]3虧菌酯(enestroburin)、卩定酸菌胺(boscalid)、多菌靈(carbendazim)、卩比唑醚菌酯(pyraclostrobin)和咪鮮胺(prochloraz)等。長期以來，由于多頻次、多劑量施用化學藥劑，造成病原菌對常用化學藥劑都產生了不同程度的抗(耐)藥性，生產上屢屢出現防治失敗的事例。目前成功用于防治病害的生物農藥專用制劑還沒有。文獻已報道生物防治控制病害的生防菌屬(種)主要有(I)木霉菌屬真菌spp.)中的綠色木霉(Tri choderma viri de)和哈茨木霉(Tri choderma harzianum ) ； (2)芽抱桿菌屬細菌(.Bacillus spp.)中的枯草芽抱桿菌{Bacillus subtilis、、多粘芽抱桿菌{BacilluspoIymyxa )和巨大芽抱桿菌 iBacillus megaterium') ； (3)假單胞菌屬細菌{Pseudomonasspp.)中的突光假單胞細菌fluorescens^)等。因草莓是即采即食的應時鮮果，且無果皮防護，所以對藥劑的選擇有很大的局限性。因此對草莓病害的生物防治在生產上具有一定迫切需求。本發明提供的可同時兼治草莓各類病害的頡頏細菌枯草芽孢桿菌DJ-6菌株及制劑，在現有技術中沒有提及和公開。
發明內容
本發明解決現有技術存在的不足，提供一株分離自黃杜鵑花的內生芽孢桿菌枯草芽孢桿菌UaciBm subtilis)V)i-&菌株，該菌株可用于防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黃萎病。同時本發明還提供用該枯草芽孢桿菌DJ-6菌株加工成懸浮劑的制備方法。本發明是通過以下技術方案實現的
本發明的枯草芽孢桿菌(拉丁文學名為Bacillus subtil is )DJ-6菌株，已于2012年7月2日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，保藏號為CGMCC No. 6314。本發明的菌種具有如下特征
(I)DJ-6菌株的細胞形態及生理生化特征(見表I)
權利要求
1.一種枯草芽孢桿菌SMiiJi1S)DJ-6菌株，該菌種已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC No. 6314。
2.根據權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6菌株，其特征在于該菌株的16SrRNA基因序列為
3.根據權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6菌株，其特征在于該菌株的gyrB基因序列為
4.權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6在防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黃萎病方面的應用。
5.一種用權利要求I所述的枯草芽孢桿菌DJ-6菌株發酵液制備而成的懸浮劑。
6.一種制備權利要求4所述的懸浮劑的方法，其特征在于包括以下步驟(A)菌液的獲得 用無菌芽簽挑取事先在PDA固體培養基上劃線培養好的DJ-6菌株單菌落斑，接種于裝有5 mL PDA液體培養液的容積為20 mL的三角瓶中，于30 °C >200 rpm條件下振蕩培養16h，過夜，將上步所得培養液5 mL全部接種于裝有400 mL PDA培養液的容積為1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30°C條件下振蕩培養16 h ;把所得的400mL培養液接種于裝有20 L培養液的容積為30L的發酵罐(鎮江東方GUS-30)，20L發酵培養液中固容物含量為豆柏100g、馬鈴薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、碳酸鈣20 g、MnS04 1.0 g，設置發酵條件為溶氧100%，攪拌速度為350 rpm，發酵溫度30 °C，發酵時間36 h，pH 7. 0-7. 2 ； (B)菌劑加工工藝 將發酵好的發酵液按如下方法加工成懸浮劑 (I)將發酵液離心(8000 rpm)后用20%丙三醇溶液(V/V)(溶液用無菌水配制)重新懸浮，測定懸浮液的活芽孢含量，根據測定結果用20%丙三醇溶液(V/V)調節懸浮液的活芽孢數，終含量調節成芽孢含量為LOXIOki cfu/mL (即每毫升含100億個活芽孢);(2)在上述調節好的懸浮液中按5 g/L (W/V)的用量加入黃原膠，并攪拌均勻，得成品懸浮劑的濃度為100億活芽孢/mL。
7.根據權利要求5所述的制備懸浮劑的方法，其特征在于步驟(B)中所述的懸浮劑中的添加劑為丙三醇和和黃原膠。
全文摘要
本發明為一種枯草芽孢桿菌DJ-6菌株(其在CGMCC的保藏編號為CGMCCNo.6314)及發酵液制備成懸浮劑的方法。該制劑能有效防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黃萎病。
文檔編號C12R1/125GK102876604SQ201210354629
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月23日 優先權日2012年9月23日
發明者楊敬輝, 吉沐祥, 姚克兵, 莊義慶 申請人:江蘇丘陵地區鎮江農業科學研究所