專利名稱：一種羅伊氏乳桿菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種乳桿菌屬的新菌株及其應用，更準確地說，本發明描述了羅伊氏乳桿菌{Lactobacillus reuteri)的一個新菌株LE16,及其調節腸菌群功能和對腸道致病菌、食品腐敗菌的抑菌作用。本發明還涉及羅伊氏乳桿菌LE16與常規載體組合，可用于預防和/或治療腸道菌群失調。
背景技術：
人的胃腸道棲息著各種細菌，根據對人體的影響可分為有益菌、有害菌和中性菌。人體內有益菌占優勢，就會表現出健康狀態，其中雙歧桿菌和乳桿菌是最具代表性的有益菌。羅伊氏乳桿菌是乳桿菌中重要的一種，是人體腸道固有的細菌。另外，該菌種還存在于母乳中，從226名居住在 瑞典、丹麥、以色列、南非、南韓、日本和秘魯等不同國家的都市或鄉區的母乳中分離出可計數的羅伊氏乳桿菌占12%，屬優勢菌。羅伊氏乳桿菌可調節腸道菌群平衡，有效降低輪狀病毒引起的腹瀉；Sh0mik0Va等于1996年對66名(年齡6 36個月)由輪狀病毒引起腹瀉的小孩進行的研究提出，羅伊氏乳桿菌的治療效果明顯，且有劑量關系，高劑量組效果更佳，每日攝取羅伊氏乳桿菌或產品是比較有效治療輪狀病毒所引起的腹瀉的方法。羅伊氏乳桿菌還具有抗過敏作用，研究提出，對過敏高危險群孕婦及其新生兒口服羅伊氏乳桿菌各一個月，可將嬰兒濕疹比例從46%降低至23%，且沒有觀察到任何的不良反應。研究追蹤更發現，這群小孩在4歲時氣喘及過敏性鼻炎的發生率也明顯下降。
發明內容
本發明的目的是提供一種羅伊氏乳桿菌(羅伊氏乳桿菌LE16)及其應用。實現上述發明目的的解決方案是:
一種羅伊氏乳桿菌，所述羅伊氏乳桿菌在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC N0.6405。上述羅伊氏乳桿菌LE16直接自健康嬰兒糞便中分離獲得，已于2012年7月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱06110:，地址為:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC N0.6405。所述的羅伊氏乳桿菌在調節腸道菌群中的應用。所述的羅伊氏乳桿菌在抑制腸道致病菌或食品腐敗微生物中的應用。所述腸道致病菌是指大腸桿菌、李斯特菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏痢疾桿菌或產氣莢膜梭菌；所述食品腐敗微生物是指枯草芽孢桿菌或蠟樣芽孢桿菌。羅伊氏乳桿菌與常規載體組合在預防和/或治療腸道菌群失調中的應用。所述常規載體是低聚糖、維生素、礦物質、食品輔料的一種或多種。本發明的羅伊氏乳桿菌LE16的形態為桿狀，革蘭氏染色陽性，不形成芽孢，產生乳酸，兼性厭氧。
圖1是本發明的羅伊氏乳桿菌在顯微鏡(X 1000倍)下的菌體形態圖。
具體實施例方式本發明的羅伊氏乳桿菌LE16利用L-阿拉伯糖、核糖、半乳糖、葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖，不利用甘油、赤癬醇、D-阿拉伯糖、D-木糖、L-木糖、阿東醇、β -甲基-D-木糖甙、果糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖、衛矛醇、肌醇、甘露醇、山梨醇、α -甲基-D-甘露糖甙、α -甲基-D-葡萄糖甙、N-乙酰-葡萄糖胺、苦杏仁甙、熊果甙、七葉靈、水楊甙、纖維二糖、海藻糖、菊糖、松叁糖、淀粉、肝糖、木糖醇、龍膽二糖、D-松二糖、D-來蘇糖、D-塔格糖、D-巖糖、L-巖糖、D-阿糖醇、L-阿糖醇、葡萄糖酸鈉、2-酮基-葡萄糖酸鈉、5-酮基-葡萄糖酸鈉。本發明的羅伊氏乳桿菌LE16發酵過程是在MRS液體培養基中37°C培養24h。實施例1 菌株鏡檢
無菌條件下用接種環挑羅伊氏乳桿菌LE16，涂于載玻片上，制片并革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察菌體形態。實施例2 MRS平板純化分離
無菌條件下用接種環挑羅伊氏乳桿`菌LE16，在MRS平板上劃線，平板置于培養箱中37°C培養48h，挑選單菌落進行鏡檢，達到菌株純種分離。實施例3 菌株發酵
用接種環將羅伊氏乳桿菌LE16從斜面上挑取二環至裝有15ml MRS液體培養基中，37°C培養24h，再以1%接種量接入15ml MRS液體培養基中，37°C培養24h，即得羅伊氏乳桿菌LE16發酵液。實施例4 羅伊氏乳桿菌LE16耐酸、耐膽鹽性能
LE16菌株于MRS液體培養基中37°C培養24小時后，離心收集菌體，取Iml細胞重懸液至pH3.0的9.0ml無菌PBS中，37°C處理O、1、2、3小時后進行活菌計數分析(表I)。表I結果表明，pH3.0條件下處理3小時活菌數下降不到一個數量級，具有較好的耐酸能力，能順利通過胃到達腸道發揮益生作用。
_表I 羅伊氏乳桿菌LE16耐酸性能 _
權利要求
1.一種羅伊氏乳桿菌，其特征在于，所述羅伊氏乳桿菌在中國普通微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為CGMCC N0.6405。
2.權利要求1所述的羅伊氏乳桿菌在調節腸道菌群中的應用。
3.權利要求1所述的羅伊氏乳桿菌在抑制腸道致病菌或食品腐敗微生物中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述腸道致病菌是指大腸桿菌、李斯特菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏痢疾桿菌或產氣莢膜梭菌； 所述食品腐敗微生物是指枯草芽孢桿菌或蠟樣芽孢桿菌。
5.權利要求1所述的羅伊氏乳桿菌與常規載體組合在預防和/或治療腸道菌群失調中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述常規載體是低聚糖、維生素、礦物質、食品輔料的一 種或多種 。
全文摘要
本發明公開了一種羅伊氏乳桿菌及其應用，所述羅伊氏乳桿菌在中國普通微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為CGMCC NO.6405。所述的羅伊氏乳桿菌在調節腸道菌群、抑制腸道致病菌或食品腐敗微生物可得到應用。或者，所述羅伊氏乳桿菌與常規載體組合在預防和/或治療腸道菌群失調中能夠得到良好的應用效果。
文檔編號C12N1/20GK103114051SQ201210458798
公開日2013年5月22日 申請日期2012年11月15日 優先權日2012年11月15日
發明者張和春, 杭曉敏, 張旻, 夏祎稚, 陳培青 申請人:上海交大昂立股份有限公司, 上海諾德生物實業有限公司