專利名稱：谷氨酸產生菌的擴大培養方法
技術領域：
本發明屬于生物發酵技術領域。具體是涉及一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式。
背景技術：
目前，隨著發酵工業的發展，發酵罐體積逐漸增大，因而發酵所需的菌種量就增多。只有足夠數量活力旺盛的菌種接入發酵罐中，才有利于縮短發酵周期、提高發酵罐利用率，并且也有利于減少染菌的機會。因此，種子擴大培養的任務，不但要得到純而壯的種子，還要獲得活力旺盛、接種數量足夠的種子。谷氨酸發酵企業中，菌種室制備的搖瓶種子遠不能滿足生產所需要的足夠數量的種子，因此搖瓶種子需要在小型發酵罐中繼續擴大培養。目前菌種的擴大培養方式是采用二級或三級擴大培養方式，均是單一的“一對一”擴大模式，即一個玻瓶種子對應一個種子罐。此擴大培養模式存在著以下幾個弊端1、由于菌種室操作條件的限制，搖瓶的菌種量有限，進而接入到種子罐的種子數量就有限；2、搖瓶菌種接入種子罐時，需要人員在火焰下手動操作完成，此工序因與外界環境接觸易造成雜菌污染；3、菌種室培養種子工作繁瑣，制作搖瓶種子，人員手動操作較多，染菌機會就多；4、搖瓶菌種不適于做無菌檢查，增加了菌種含有雜菌風險。
發明內容
本發明的技術任務是針對上述現有技術的不足，提供一種易于實現的一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式。以便為二級種子罐提供足夠數量的種子。本發明提供的技 術方案是，谷氨酸產生菌的擴大培養方法，米用一個一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種，進行擴大培養。前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，包括下述步驟
a、將菌種室制備的搖瓶種子接入到種子罐中培養，得到種子液，取樣做無菌檢測，其結果不含雜菌時，用冷卻水使其降溫，備用；
b、將a中制備的種子液分別移入到二級種子罐中，接種量為40 50L，經培養10 12h，得到OD=O. 4 O. 6的二級種子液，取樣做無菌檢測；
C、各個不含雜菌的二級種子液接入到其相對應的50m3三級種子罐中培養12 16h，得到OD=O. 4 O. 6的三級種子液，取樣做無菌檢測；
d、步驟c中得到不含雜菌的三級種子液分別接入相對應的500m3發酵罐中進行發酵生產。前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，步驟a搖瓶種子的體積為5L，種子罐的體積為lm3。前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，步驟a在種子罐中培養的時間為20 28h (優選22 26h，更加優選24h)。
前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，步驟a種子液的OD=O. 4 O. 6。前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，步驟a將使種子液降溫至2 10°C(優選8°C)，備用。 前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，步驟b 二級種子罐體積為5m3，數量為6 20 (優選8-15個)。前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，步驟c三級種子罐的體積為50m3。前面所述的擴大培養方法，優選的技術方案是，步驟d發酵罐的體積為500m3。本發明的種子擴大培養新模式與現有技術相比，所產生的有益效果是本發明不改變生產工藝流程，也不改變發酵配方，只改變菌種的擴大培養模式，在生產上實施后，同樣可保證發酵效果。該模式的主要優點是減少染菌機會、提高種子數量、降低工人勞動量、降低設備投資。與現有技術相比，本發明的技術優勢還體現在
1、解決了菌種室制備種子數量不足，減少了菌種室人員手動操作所致的染菌機會，為種子罐提供足夠數量的菌種；
2、一級種子罐移種至二級種子罐時，可以采用密封管道轉移，不與外界環境接觸，降低染菌機會；
3、在接種之前增加 無菌檢測，降低了菌種污染雜菌所帶來的風險；
4、菌種室僅制備一次搖瓶種子，可以實現15 20批次發酵，降低了工人勞動量。本發明公與現有擴大培養模式相比，一級種子罐培養所得菌種數量多，可以緩解菌種室培養搖瓶種子的繁瑣工作壓力，同時在移種時，減少了人員手動操作，降低了雜菌污染。在生物發酵技術領域有著巨大的應用價值。
具體實施例方式下面以具體實施例對本發明的菌種擴大培養新模式作詳細地說明。實施例1谷氨酸產生菌的擴大培養方法
谷氨酸種子的擴大培養過程中，采用一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式。以I個Im3 —級種子罐,6個5m3 二級種子罐、6個50m3三級種子罐、6個500 m3發酵罐為例。該模式包括以下工序
a、將菌種室制備的5L搖瓶種子接入到Im3種子罐中培養20h，得到OD=O. 4的種子液。取樣做無菌檢測，其結果不含雜菌時，用冷卻水使其降溫至2°C左右，備用。b、將a中制備的種子液分別移入到6個同樣的5m3 二級種子罐中，接種量為40L，經培養10h，得到OD=O. 4的二級種子液。取樣做無菌檢測。C、各個不含雜菌的二級種子液接入到其相對應的50m3三級種子罐中培養12h，得到OD=O. 4的三級種子液。取樣做無菌檢測。d、步驟c中得到不含雜菌的三級種子液分別接入相對應的500m3發酵罐中進行發
酵生產。發酵結果谷氨酸含量18. 7%，轉化率74. 6%。本發明菌種室僅制備一個5L搖瓶種子，采用本發明擴培模式可以生產15 20批次發酵，降低了工人勞動量，減少了菌種室因工人手工操作制備種子所造成的染菌機會。
實施例2谷氨酸產生菌的擴大培養方法
谷氨酸種子的擴大培養過程中，采用一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式。以I個Im3 —級種子罐,20個5m3 二級種子罐、20個50m3三級種子罐、20個500 m3發酵罐為例。該模式包括以下工序
a、將菌種室制備的5L搖瓶種子接入到Im3種子罐中培養28h，得到OD=O. 6的種子液。取樣做無菌檢測，其結果不含雜菌時，用冷卻水使其降溫至10°C左右，備用。b、將a中制備的種子液分別移入到20個同樣的5m3 二級種子罐中，接種量為50L，經培養12h，得到OD=O. 6的二級種子液。取樣做無菌檢測。C、各個不含雜菌的二級種子液接入到其相對應的50m3三級種子罐中培養16h，得到OD=O. 6的二級種子液。取樣做無菌檢測。d、步驟c中得到不含雜菌的三級種子液分別接入相對應的500m3發酵罐中進行發
酵生產。發酵結果谷氨酸含量18. 1%，轉化率73. 8%。本發明提高了一級種子數量，縮短了二級種子制備周期，提高了二級種子罐的利用率。實施例3谷氨 酸產生菌的擴大培養方法
谷氨酸種子的擴大培養過程中，采用一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式。以I個Im3 —級種子罐,8個5m3 二級種子罐、8個50m3三級種子罐、8個500 m3發酵罐為例。該模式包括以下工序
a、將菌種室制備的5L搖瓶種子接入到Im3種子罐中培養22h，得到OD=O. 5的種子液。取樣做無菌檢測，其結果不含雜菌時，用冷卻水使其降溫至TC左右，備用。b、將a中制備的種子液分別移入到8個同樣的5m3 二級種子罐中，接種量為50L，經培養12h，得到OD=O. 4 O. 6的二級種子液。取樣做無菌檢測。C、各個不含雜菌的二級種子液接入到其相對應的50m3三級種子罐中培養12 16h，得到OD=O. 6的二級種子液。取樣做無菌檢測。d、步驟c中得到不含雜菌的三級種子液分別接入相對應的500m3發酵罐中進行發
酵生產。發酵結果谷氨酸含量18. 2%，轉化率74. 1%。本工藝一級種子罐移種至二級種子罐時，采用密封管道轉移，不與外界環境接觸，降低了染菌機會。實施例4谷氨酸產生菌的擴大培養方法
谷氨酸種子的擴大培養過程中，采用一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式。以I個Im3 —級種子罐，15個5m3 二級種子罐、15個50m3三級種子罐、15個500 m3發酵罐為例。該模式包括以下工序
a、將菌種室制備的5L搖瓶種子接入到Im3種子罐中培養24h，得到OD=O. 4的種子液。取樣做無菌檢測，其結果不含雜菌時，用冷卻水使其降溫至10°C左右，備用。b、將a中制備的種子液分別移入到15個同樣的5m3 二級種子罐中，接種量為50L，經培養12h，得到OD=O. 6的二級種子液。取樣做無菌檢測。C、各個不含雜菌的二級種子液接入到其相對應的50m3三級種子罐中培養14h，得到OD=O. 6的二級種子液。取樣做無菌檢測。d、步驟c中得到不含雜菌的三級種子液分別接入相對應的500m3發酵罐中進行發
酵生產。發酵結果谷氨酸含量18. 4%，轉化率74. 2%。本發明的一級種子罐替代搖瓶種子為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式，在谷氨酸發酵生產中全面推廣 是可行的。
權利要求
1.谷氨酸產生菌的擴大培養方法，其特征是，采用ー個ー級種子罐為多個ニ級種子罐提供菌種，進行擴大培養。
2.根據權利要求1所述的擴大培養方法，其特征是，包括下述步驟 a、將菌種室制備的搖瓶種子接入到種子罐中培養，得到種子液，取樣做無菌檢測，其結果不含雜菌時，用冷卻水使其降溫，備用； b、將a中制備的種子液分別移入到ニ級種子罐中，接種量為40 50L，經培養10 12h，得到OD=O. 4 0. 6的ニ級種子液，取樣做無菌檢測； C、各個不含雜菌的ニ級種子液接入到其相對應的50m3三級種子罐中培養12 16h，得到OD=O. 4 0. 6的三級種子液，取樣做無菌檢測； d、步驟c中得到不含雜菌的三級種子液分別接入相對應的500m3發酵罐中進行發酵生產。
3.根據權利要求3所述的擴大培養方法，其特征是，步驟a搖瓶種子的體積為5L，種子罐的體積為lm3。
4.根據權利要求3所述的擴大培養方法，其特征是，步驟a在種子罐中培養的時間為20 28h (優選22 26h，更加優選24h)。
5.根據權利要求3所述的擴大培養方法，其特征是，步驟a種子液的OD=O.4 0. 6。
6.根據權利要求3所述的擴大培養方法，其特征是，步驟a將使種子液降溫至2 10°C(優選8°C)，備用。
7.根據權利要求3所述的擴大培養方法，其特征是，步驟bニ級種子罐體積為5m3，數量為6 20 (優選8-15個)。
8.根據權利要求3所述的擴大培養方法，其特征是，步驟c三級種子罐的體積為50m3。
9.根據權利要求3所述的擴大培養方法，其特征是，步驟d發酵罐的體積為500m3。
全文摘要
本發明公開了一種谷氨酸產生菌的擴大培養方法，屬于生物發酵技術領域。其特征是一級種子罐為多個二級種子罐提供菌種的擴大培養模式。與現有擴大培養模式相比，一級種子罐培養所得菌種數量多，可以緩解菌種室培養搖瓶種子的繁瑣工作壓力，同時在移種時，減少了人員手動操作，降低了雜菌污染。在生物發酵技術領域有著巨大的應用價值。
文檔編號C12N1/00GK103045477SQ201210558330
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月21日 優先權日2012年12月21日
發明者楊玉嶺, 滿德恩, 張恒志, 程美科, 郭脈海, 李國良, 殷慧 申請人:菱花集團有限公司