一種萜類二氫喹啉酮生物堿化合物及其晶體、制備方法與作為海洋防污劑的應用的制作方法
【專利摘要】一種萜類二氫喹啉酮生物堿化合物及其晶體、制備方法與作為海洋防污劑的應用，制備時先對真菌Scopulariopsis?sp.(TA01-33)進行菌種培養，再對該真菌進行發酵培養，過濾除去菌體，濾液濃縮后，用乙酸乙酯萃取；依次進行正相硅膠柱層析、Sephadex?LH-20凝膠柱層析、HPLC高效液相色譜，即得式I化合物。式I化合物、其藥學上可接受的鹽或其晶體可用于制備高效低毒的海洋防污劑。
【專利說明】一種萜類二氫喹啉酮生物堿化合物及其晶體、制備方法與作為海洋防污劑的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種具有新穎職類二氫喹啉酮(terpenoid dihydroquinolone)生物堿化合物及其晶體、制備方法與應用，特別是涉及一種對海洋污損生物藤壺Balanusamphitrite幼蟲具有極強的抑制活性的萜類二氫喹啉酮生物堿化合物及其晶體、制備方法
與應用。
【背景技術】
[0002]海洋生物污損是有機分子、微生物、動物、植物、以及它們的副產物在海洋潛沒設施表面的危害性積聚。這種危害性積聚經常發生在沒有保護的海洋潛沒設施的表面，包括海運和旅游的船舶，海軍軍艦，熱交換器，海洋傳感器以及水產養殖基地等。生物污損引起了巨大的經濟損失，僅以美國海軍軍艦為例，每年在這方面的經濟損失在18到26億美元之間，而美國海軍軍艦數量僅占全球船舶數量的0.5%，因此海洋生物污損是極其嚴重的自然危害。藤壺因其很強的黏附能力是目前所知的污損生物中非常普遍的代表性生物。自2008年全球取消了有毒防污劑有機錫的使用后，尋找安全高效的海洋防污劑成為國際上急需解決的課題。海洋天然產物被認為是新型海洋防污劑的重要來源。實際上，在過去的幾十年里已經從海綿，珊瑚和海藻等海洋生物中發現了很多有強抗污損活性的化合物。然而，從上述大型生物中發現的活性化合物由于受到量的限制而大大影響了其潛在的應用。海洋微生物由于在實驗室中可以大規模發酵，不易破壞自然環境，而成為活性海洋化合物的最重要來源。然而，近年來尚未見到從海洋微生物中獲得有重要抗污損活性的萜類二氫喹啉酮生物堿化合物作為防污劑的使用。(J.A.Callow, Μ.E.Callow, Nat.Commun.2011,2,244-253 ；C.M.Kirschner, A.B.Brennan, Annu.Rev.Mater.Res.2012，42，1-19 ；M.Schultz,J.Bendick，E.Holm，W.Hertel，Biofouling2011，27，87-98 ；N.Fusetani，Nat.Prod.Rep.2004，21，94-104 ；N.Fusetani，Nat.Prod.Rep.2011，28，400-410 ；P._Y.Qian, Y.Xu,N.Fusetani，Biofouling2010，26，223-234。)
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于提供一種來源于海洋真菌的具有新穎萜類二氫喹啉酮生物堿化合物及其晶體、制備方法與作為海洋防污劑的應用，它能滿足現有技術的上述需求。菌種保藏信息:保藏單位名稱:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所；保藏日期:2012年12月
17H ;保藏編號:CGMCC6959 ;分類命名=Scopulariopsis sp.。
[0004]本發明提供式I 化合物或其藥學上可接受的鹽:
[0005]
【權利要求】
1.一種萜類二氫喹啉酮生物堿化合物，其特征在于具有式I的結構:
2.權利要求1所述的式I化合物的制備方法，其特征在于先在菌種培養基中對真菌Scopulariopsis sp.(TA01-33)進行菌種培養,再在發酵培養基中對該真菌進行發酵培養，然后將所得發酵液過濾，除去菌體，將濾液濃縮后，用乙酸乙酯萃取；萃取液濃縮后分別進行正相硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析后，再經HPLC高效液相制備色譜，將所得洗脫液濃縮，得無色結晶，即為式I化合物。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述菌種培養基優選含有葡萄糖0.1 % -5.0 %、酵母膏 0.01 % -1 %、蛋白胨 0.01 % -1 %、瓊脂 0.1 % -3.0 %、氯化鈉0.05% _5%，其余為水，上述百分含量均為重量百分比，培養溫度優選為0-30°C，培養時間優選為3-15天。
4.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述發酵培養基優選含有葡萄糖0.1% -5.0%、酵母膏0.01% -1%、蛋白胨0.01% -1%、氯化鈉0.05% _5%，其余為水，上述百分含量均為重量百分比，培養溫度優選為0-30°C，培養時間優選為10-60天。
5.如權利要求2-4任一項所述的制備方法，其特征在于所述的正相硅膠柱層析采用的固定相為200-300目硅膠，流動相為體積比為15%-40%的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑；所述Sephadex LH-20凝膠柱層析采用的流動相為體積比為石油醚:氯仿:甲醇=2:1:1的混合溶劑；所述HPLC高效液相制備色譜中采用的色譜柱為KromasillOX 250mm，7 μ m,流速為1.0-5.0mL / min，流動相為體積比50% -80%的甲醇-水混合溶劑。
6.權利要求1所述的式I化合物為晶體，其特征在于該晶體的空間群為P2(l)，晶胞參數為 a= 8.3171(2) Kb= 13.6456(3) A, c = 11.0036(2) A, α = 90。，β = 94.543(2)。，Y= 90°，V =1244.89(5) A3, Z = 2，Dc = 1.247g/cm3，F(OOO) = 500，μ = 0.714mm_1,Flack常數為0.05(11),4401個可觀測點(I > 2σ (I)，可觀測點精修最終偏離因子R =0.0266，wR = 0.0707。
7.權利要求6所述晶體的制備方法，其特征在于將式I化合物溶于甲醇、乙醇、四氫呋喃或丙酮中的任一種或幾種，靜置緩慢結晶即可得到式I化合物的晶體。
8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于靜置緩慢結晶的條件為在0-30°C下，靜置1-30天。
9.一種海洋生物防污劑，其特征在于其含有權利要求1所述的式I化合物或其藥學上可接受的鹽作為有效成分。
10.一種海洋生物防污劑，其特征在于其含有權利要求6所述的晶體作為有效成分。
11.權利要求1所述的式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備海洋防污劑中的應用。
12.權利要求6所述的晶體在制備海洋防污劑中的應用。
【文檔編號】C12P17/16GK103554090SQ201310500640
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月15日 優先權日:2013年10月15日
【發明者】王長云, 邵長倫, 胥汝芳, 王開玲, 錢培元, 徐穎 申請人:中國海洋大學