一種對含有artpA質粒進行構建的方法
【專利摘要】本發明公開了一種對含有artpA質粒進行構建的方法。步驟如下：首先需要在離心管中加入所述反應體系，然后用離心機高速旋轉后混勻溶液；將離心管放置在漂浮物上，并懸空；在室溫條件為35攝氏度的情況下，預熱36攝氏度；至酶切反應完全狀態；2-3小時后終止反應；取適量瓊脂糖凝膠進行電泳測驗，保持在電壓80-100伏之間；將混合物在子等下進行觀察即可；還需要加入適量緩沖液，所述緩沖液的PH為低于七；所述反應體系中，質粒的重量比例為百分之十到百分之十五。本發明的有益效果是，成本較低、重復性好，轉化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【專利說明】—種對含有artpA質粒進行構建的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生化實驗室方法，具體來說一種對含有artpA質粒進行構建的方法。
【背景技術】
[0002]質粒(Plasmid)是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子(即細胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質粒雖然都是環狀構形，然而目前也發現有少數的質粒屬于線性構形，它存在于許多細菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的線粒體等胞器中。天然質粒的DNA長度從數千堿基對至數十萬堿基對都有。質粒天然存在于這些生物里面，有時候一個細胞里面可以同時有一種乃至于數種的質粒同時存在。質粒的套數(copy number)在細胞里從單一到數千都有可能。有時有些質粒含有某種抗藥基因(如大腸桿菌中就有含有抗四環素基因的質粒)。有一些質粒攜帶的基因則可以賦予細胞額外的生理代謝能力，乃至于在一些細菌中提高它的致病力。一般來說，質粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性的作用。它是基因工程最常見的運載體。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種對含有artpA質粒進行雙酶切的方法，步驟如下:首先需要在離心管中加入所述反應體系，然后用離心機高速旋轉后混勻溶液；將離心管放置在漂浮物上，并懸空；在室溫條件為35攝氏度的情況下，預熱36攝氏度；至酶切反應完全狀態；2-3小時后終止反應；取適量瓊脂糖凝膠進行電泳測驗，保持在電壓80-100伏之間；將混合物在子等下進行觀察即可。
[0004]本發明中，還需要加入適量緩沖液，所述緩沖液的PH為低于七。
[0005]本發明中，所述反應體系中，質粒的重量比例為百分之十到百分之十五。
[0006]本發明的有益效果是，成本較低、重復性好，轉化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【具體實施方式】
[0007]一種對含有artpA質粒進行雙酶切的方法，其特征在于，步驟如下:首先需要在離心管中加入所述反應體系，然后用離心機高速旋轉后混勻溶液；將離心管放置在漂浮物上，并懸空；在室溫條件為35攝氏度的情況下，預熱36攝氏度；至酶切反應完全狀態；2-3小時后終止反應；取適量瓊脂糖凝膠進行電泳測驗，保持在電壓80-100伏之間；將混合物在子等下進行觀察即可。再需要加入適量緩沖液，所述緩沖液的PH為6.2 ;所述反應體系中，質粒的重量比例為百分之十二。
[0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種對含有artpA質粒進行構建的方法，其特征在于，步驟如下:首先需要在離心管中加入所述反應體系，然后用離心機高速旋轉后混勻溶液；將離心管放置在漂浮物上，并懸空；在室溫條件為35攝氏度的情況下，預熱36攝氏度；至酶切反應完全狀態；2-3小時后終止反應；取適量瓊脂糖凝膠進行電泳測驗，保持在電壓80-100伏之間；將混合物在子等下進行觀察即可。
2.如權利要求1所述的一種對含有artpA質粒進行構建的方法，其特征在于，還需要加入適量緩沖液，所述緩沖液的PH為低于七。
3.如權利要求1所述的一種對含有artpA質粒進行構建的方法，其特征在于，所述反應體系中，質粒的重量比例為百分之十到百分之十五。
【文檔編號】C12N15/10GK103756995SQ201310535541
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月4日 優先權日:2013年11月4日
【發明者】劉軍 申請人:劉軍