本發明涉及一種牛樟芝酵素及其制備方法。
背景技術：
：牛樟芝學名為antrodiacamphorata，又名為樟芝，牛樟菇、樟菇，是中國臺灣特有的真菌。牛樟芝生長于牛樟樹干腐朽的中空內部或倒伏樹干的潮濕表面，子實體形態多變化，有板狀、鍾狀、馬蹄狀或塔狀；初生時鮮紅色，漸長變為白色、淡紅褐色、淡褐色或淡黃褐色。牛樟芝氣芳香味辛苦、平，有祛風行氣、化淤活血、溫中消結、解毒消腫、鎮靜止痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、提升機體免疫力之效；對于治療胃腸疼痛、腹瀉嘔吐、食物中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有獨特功能。現代分離分析技術證實，樟芝主要生理活性物質為多糖體(β-d-葡聚糖)和三萜類化合物。樟芝所含有的三萜類成分為靈芝的數倍之多，為樟芝最重要的化學成分之一。其功效除了有抗癌的效果外，同時可以增強人體免疫力，提升肝臟運作功能，對乙肝病毒等肝炎具有很好的改善效果。此外，三萜類亦有降血壓，降低中風幾率的作用。樟芝多糖屬于雜多糖，具有提升人體免疫力，調整血壓、降血脂、抑制病毒、抗過敏及抗輻射等作用。樟芝所含次要活性物質則包括超氧化物歧化酶(sod)、腺苷、小分子蛋白質(含免疫蛋白)、維生素、固醇類、木質素、不飽和長鏈脂肪酸、麥角甾醇、微量元素鍺以及凝集素、氨基酸、薄孔菌酸(antrodiaacid)等。腺苷是人體遺傳基因的主要成分之一，可以抑制血小板凝聚，改善血液循環；超氧化物歧化酶是一種血蛋白，具有移除超氧陰離子的作用等。由于樟芝在中國臺灣被視為獨特而珍貴的藥用真菌，因此具有極高的研究和商業價值，也是目前中國臺灣最昂貴的野生真菌，在港澳被稱為“神芝”，中國臺灣民間稱之為“森林中的紅寶石”。酵素指以一種或多種新鮮蔬菜、水果、菌菇、中草藥等為原料，經多種有益菌發酵而產生的，含有豐富的維生素、酶、礦物質和次生代謝產物等營養成分的功能性微生物發酵產品。酵素不但保存了發酵原料中所固有的營養物質，而且可以改善發酵原料原有的一些不良風味，更重要的是在發酵過程中產生了一些新的功能成分，對人體有效好的保健效果。然而，微生物發酵是一個復雜的過程，影響酵素產品質量的因素較多，比如，發酵菌種、接種量等工藝參數對酵素質量的影響尤為明顯，確定適宜的發酵條件，從而得到一種風味良好且功能性成分含量較高的酵素產品對技術人員來說十分困難。隨著社會經濟的發展，人們生活水平得到提高，但切伴隨著現代文明病、富貴病及人類普遍亞健康狀態的出現。在物質豐裕的現代，人們越來越注重養生，“中醫不治已病治未病”的保健理念深入人心，近幾年來以具有很好的防癌、抗癌、保肝功效的樟芝真菌為原材料研發的保健食品更是受人追捧，市場對其需求量非常大。樟芝菌絲體在中國臺灣已被中國臺灣衛生部門批準為保健食品，且樟芝保健食品在中國臺灣、日本和香港都已上市多年，并外銷大陸、日本、東南亞等地。技術實現要素：本發明研發了一種牛樟芝酵素產品，能夠改善牛樟芝的口感，提高牛樟芝的抗氧化性能，且服用更加方便，應用前景廣闊。本發明提供了一種牛樟芝酵素及其制備方法。本發明首先提供了牛樟芝酵素的制備方法，步驟如下：(1)取牛樟芝，加入1～4倍量水，浸泡10～30分鐘，破碎打漿，得漿液，果膠酶酶解，分離取汁，滅菌，得酶解液；(2)在步驟(1)所得酶解液中，按重量比0.05～0.15％加入酵母菌，在溫度為20～30℃的條件下發酵12～36小時，得藥液；再在藥液中，按重量比2～6％加入乳酸菌，然后在溫度為30～40℃的條件下發酵12～60小時，得原液；(3)取步驟(2)所得原液，冷凍干燥，粉碎，即可。步驟(1)中，所述牛樟芝是牛樟芝antrodiacamphorata的干燥體。3、根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(1)中，加入4倍量的水。步驟(1)中，所述滅菌的方式是煮沸10分鐘。步驟(1)中，所述果膠酶酶解的方法是：調解漿液ph至3～4，在45～50℃條件下，按重量比加入0.2～0.5％的果膠酶，酶解2～4小時；優選地，所述分離取汁的分離方法是過濾。步驟(2)中，所述酵母菌為葡萄酒·果酒專用酵母rw。所述葡萄酒·果酒專用酵母rw可以購自安琪酵母股份有限公司，編號：80000877。步驟(2)中，所述乳酸菌是保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、青春雙歧桿菌中一種或數種混合菌。其中，保加利亞乳桿菌可以是來自北京北納創聯生物技術研究院的編號：bncc223619的保加利亞乳桿菌；嗜熱鏈球菌可以是來自北京北納創聯生物技術研究院的編號：bncc134430的嗜熱鏈球菌；嗜酸乳桿菌可以是來自北京北納創聯生物技術研究院的編號：bncc185342的嗜酸乳桿菌；青春雙歧桿菌可以是來自北京北納創聯生物技術研究院的編號：bncc186535的青春雙歧桿菌。步驟(2)中，所述乳酸菌是保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、青春雙歧桿菌中一種或數種混合菌；或者，所述酵母菌按照重量比0.10％的比例加入；或者，所述酵母菌發酵的溫度為20～28℃，優選28℃；或者，所述酵母菌發酵的發酵時間可以為24～36h，優選24h。步驟(2)中，所述乳酸菌發酵的接種量為優選3～6％，最優選4％；或者，所述乳酸菌發酵的發酵時間是30～60h，最優選36h；或者，所述乳酸菌發酵的發酵溫度是35～40℃，優選35℃。步驟(3)中，所述冷凍干燥的方法是-12～-36℃低溫預冷凍12-24小時，再在真空度20-30pa、溫度20-30℃條件下干燥24-48小時。本發明還提供了前述方法制備得到的牛樟芝酵素。本發明還提供了前述牛樟芝酵素在制備抗氧化或者提高免疫力的藥品、食品或者保健食品中的用途。本發明方法制備得到的牛樟芝酵素口感優良，具有抗氧化性能和提高機體免疫力的作用，而且效果均顯著高于牛樟芝藥材，應用前景優良。顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。具體實施方式實施例1本發明牛樟芝酵素的制備方法一、制備方法取牛樟芝，除去雜質，洗凈，加入4倍量煮沸滅菌后冷卻的純凈水，浸泡30分鐘，破碎打漿。調節ph至3～4，在45～50℃條件下，按重量比加入0.2～0.5％的果膠酶，酶解2～4小時，分離取汁(過濾分離)，煮沸10分鐘滅菌，冷卻至室溫；按重量比0.05～0.15％加入酵母菌(采用的酵母菌為葡萄酒·果酒專用酵母rw，物料編號：80000877，來源：安琪酵母股份有限公司)，在溫度為20～30℃的條件下發酵12～36小時，分離上清液，再在藥液中，按重量比2～5％接種乳酸菌(嗜酸乳桿菌與青春雙歧桿菌的混合菌，嗜酸乳桿菌：編號:bncc185342，來源：北京北納創聯生物技術研究院；青春雙歧桿菌：bncc186535，來源：北京北納創聯生物技術研究院)，在溫度為30～35℃的條件下發酵12～60小時，離心，取上清液，灌裝，于4℃條件下保存，即得本發明的酵素原液；取原液，在-12～-36℃低溫預冷凍12～24小時，再在真空度20～30pa、溫度20～30℃條件下干燥24～48小時，粉碎，即得酵素凍干粉。實施例2本發明牛樟芝酵素的工藝篩選實驗一、制備方法1、酵母菌發酵工藝研究取牛樟芝，除去雜質，洗凈，加入4倍量煮沸滅菌后冷卻的純凈水，浸泡30分鐘，破碎打漿。調節ph至3～4，在45～50℃條件下，按重量比加入0.2～0.5％的果膠酶，酶解2～4小時，分離取汁，煮沸10分鐘，滅菌，冷卻至室溫，按下法進行酵母菌單獨發酵工藝研究。1.1發酵時間對酵母菌數量和sod活性的影響發酵時間影響著酵母菌的數量和sod的活性，在保證充分溶氧的條件下，將發酵溫度設為25℃，酵母菌的接種量為0.1％，分別研究了在0，6，12，24，36，48和72h發酵后酵母菌數量、sod活性、糖度和ph的變化，結果如表1。表1發酵時間對酵母菌數量和sod活性的影響從表1可知，隨著發酵時間的延長，發酵液中的sod活性和酵母菌的數量不斷增加，發酵時間達到24h時酵母菌數量最大，此時sod活性為401.7u/g，糖度為12.0，隨后發酵液中的酵母菌數量開始下降，此時sod活性增趨于穩定，而在此過程中ph一直在緩慢減少。實驗結果說明，本發明發酵方法中，酵母菌發酵的發酵時間可以為12～36h，優選24～36h，最優選24h。1.2酵母菌接種量對酵母菌發酵的影響接種量會影響發酵液中酵母菌的生長，合適的接種量可以使生產菌在發酵過程中迅速生長，從而減少雜菌的生長機會，但是接種量過大也可能使菌種生長過快，導致培養液黏度過大，從而使溶氧不足，影響產物的合成。試驗在保證充分溶氧的條件下，將發酵溫度設為25℃，發酵時間設為24h，酵母菌的接種量分別為0.05％，0.08％，0.10％，0.12％和0.15％，研究了在不同接種量時酵母菌數量、sod活性等相關指標的變化，結果如表2。表2酵母菌接種量對酵母菌數量和sod活性的影響由表2可知，當接種量在0.05％～0.10％時，酵母菌數量和sod活性明顯呈上升趨勢，當接種量在0.10％時達到最大值，此時sod活性為401.7u/g，當接種量在0.10％～0.15％時兩者有明顯下降，在整個發酵過程中ph和糖度變化趨勢不明顯，因此酵母菌的最佳接種量為0.10％。實驗結果說明，本發明發酵方法中，酵母菌發酵的接種量可以為0.05～0.15％，優選0.10％。1.3發酵溫度對酵母菌發酵的影響溫度會影響微生物細胞的生長的速率和產物形成、產物合成方向，因此它對酵母菌數量和sod活性有直接的影響。在保證充分溶氧的條件下，接種0.10％的酵母菌，發酵時間設為24h，研究不同發酵溫度下20℃，25℃，28℃，30℃和33℃酵母菌數量、sod活性等相關指標的變化，結果如表3。表3發酵溫度對酵母菌數量和sod活性的影響由表3可知，在一定溫度范圍內隨著溫度的升高，酵母菌數量和sod活性隨之增加，28℃下達到最大，此時sod活性為351.3u/g，在28℃～33℃2種顯著下降，但在整個溫度范圍內糖度、ph趨于穩定，變化不明顯。此時28℃可設為最佳發酵溫度。實驗結果說明，本發明發酵方法中，酵母菌發酵的發酵溫度可以是20～28℃，優選28℃。2、乳酸菌發酵工藝研究取牛樟芝，除去雜質，洗凈，加入4倍量煮沸滅菌后冷卻的純凈水，浸泡30分鐘，破碎打漿。調節ph至3～4，在45～50℃條件下，按重量比加入0.2～0.5％的果膠酶，酶解2～4小時，分離取汁，煮沸10分鐘，滅菌，冷卻至室溫，按下法進行乳酸菌單獨發酵工藝研究。2.1發酵時間對乳酸菌數量和酸度的影響在發酵溫度為35℃，接種量為3％的條件下，采用6，12，18，24，30，36，48和60h不同的發酵時間對牛樟芝液進行發酵，根據產酸量和乳酸菌數量確定最佳發酵時間，結果見表4。表4發酵時間對乳酸菌數量和酸度的影響由表4可知，在發酵前12h內產酸較慢，此時植物乳桿菌生長比較緩慢，可能與植物乳桿菌接種到新的環境有關，隨著發酵時間延長，乳酸含量不斷增加，在36h時，乳酸菌數開始下降，當發酵36h時酸度達到最大值0.58％，可能是因為營養物質有限，細胞進入生長后期，基本停止產酸。實驗結果說明，本發明發酵方法中，乳酸菌發酵的發酵時間可以是12～60h，優選30～60h，最優選36h。2.2乳酸菌接種量的確定適當增加接種量可以縮短甚至消除遲緩期，加快產酸速度，在發酵溫度為35℃，發酵時間為36h的條件下，采用1％，2％，3％，4％，5％和6％不同的接種量對棗液進行發酵，結果如表5。表5乳酸菌接種量對乳酸菌數量和酸度的影響由表5可知，隨著接種量的增加，發酵液中乳酸含量呈上升趨勢，接種量為1％，2％和6％時的牛樟芝液經36h發酵后產酸量小于0.30％，產酸較慢，達不到飲料生產的要求。接種量為3～5％時的牛樟芝液經發酵后酸度能達到0.50％，隨后酸度呈下降趨勢，最佳接種量為4％。實驗結果說明，本發明發酵方法中，乳酸菌發酵的接種量可以為2～6％，優選3～6％，最優選4％。2.3發酵溫度對乳酸菌發酵的影響在接種量為3％，發酵時間36h的條件下，研究25℃，30℃，35℃，40℃和43℃不同的發酵溫度對棗液進行發酵，結果如表6。表6發酵溫度對乳酸菌數量和酸度的影響由表6可知，在整個溫度范圍內，發酵液中乳酸含量隨著溫度的升高呈先升高后下降的趨勢，乳酸菌發酵牛樟芝液的最適溫度為30℃～35℃左右，此時乳酸含量都超過0.40％，在35℃下酸度高達0.58％，發酵溫度低，乳酸菌產酸緩慢，達到要求酸度的時間比較長；發酵溫度過高會抑制植物乳桿菌的生產，會產生刺激性較強的酸味，綜合考慮乳酸菌發酵的最適溫度為35℃。實驗結果說明，本發明發酵方法中，乳酸菌發酵的發酵溫度可以是30～40℃，優選35～40℃，最優選35℃。3、結論根據上述試驗結果，確定牛樟芝酵素的最佳發酵工藝為：按重量比0.1％加入酵母菌，在溫度為28℃的條件下發酵24小時，分離上清液，再在藥液中，按重量比4％接種乳酸菌，在溫度為35℃的條件下發酵36小時，離心，取上清液，灌裝，于4℃條件下保存，即得本發明的酵素原液。實施例3本發明牛樟芝酵素的制備方法一、制備方法取牛樟芝，除去雜質，洗凈，加入4倍量煮沸滅菌后冷卻的純凈水，浸泡30分鐘，破碎打漿。調節ph至3～4，在45～50℃條件下，按重量比加入0.2～0.5％的果膠酶，酶解2～4小時，分離取汁(過濾分離)，煮沸10分鐘，滅菌，冷卻至室溫；按重量比0.1％加入酵母菌，在溫度為28℃的條件下發酵24小時，分離上清液，再在藥液中，按重量比4％接種乳酸菌，在溫度為35℃的條件下發酵36小時，離心，取上清液，灌裝，于4℃條件下保存，即得本發明的酵素原液；取原液，在-12～-36℃低溫預冷凍12～24小時，再在真空度20～30pa、溫度20～30℃條件下干燥24～48小時，粉碎，即得酵素凍干粉。二、性質檢測表7本發明牛樟芝酵素質量評價結果*注：％指g/100g牛樟芝藥材。測定結果表明，本發明酵素與原藥材相比，口感更好，服用更方便，總多糖、乳酸菌等有益成分顯著增加，并且增加了sod活性。以下通過實驗例的方式來證明本發明的有益效果：實驗例1本發明牛樟芝酵素的藥效活性1.抗氧化功能1.1材料與儀器實驗動物清潔級icr10月齡小鼠30只，體重(45±5)g，由廣東省醫學實驗動物中心提供；牛樟芝酵素凍干粉(自制)；牛樟芝菌，批號160701，由中山安蕎生物科技有限公司提供；丙二醛(mda)、超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽過氧化物酶(gsh－px)測試盒由南京建成生物工程研究所提供。動物臺秤，常熟雙杰測試儀器廠；dzkw-s-4型電熱恒溫水浴鍋，北京市永光明醫療儀器有限公司；tu-1810dp型紫外-可見分光光度儀，北京普析通用；tdl-40b離心機，上海安亭科學儀器廠。1.2實驗方法1.2.1供試藥物溶液的制備(1)牛樟芝酵素凍干粉溶液：取凍干粉(按照實施例3的方法制備)，加蒸餾水適量溶解，制成每1ml含1g牛樟芝的混懸液，備用。(2)牛樟芝藥材溶液：取牛樟芝藥材，粉碎成粗粉，加8倍量水煎煮2次，每次30分鐘，濾過，合并濾液，濃縮成每1ml含1g牛樟芝的混懸液，備用。1.2.2動物分組及給藥方法實驗前，小鼠稱重后眼眶取血，分離血清，按試劑盒說明書測定血清中的mda含量。按mda水平將小鼠分為老齡對照組、牛樟芝酵素組、牛樟芝藥材組(5g/kg·bw劑量的牛樟芝液給老齡小鼠灌胃)三個組。實驗時按所設劑量進行灌胃給藥，連續30d。1.2.3觀察指標及檢測方法(1)一般體征觀察。實驗期間觀察小鼠的精神、活動和毛色。(2)血清脂質過氧化指標的測定。末次給藥后小鼠摘眼球取血，置于試管中，離心(4000r/min，10min)，分離血清測mda含量。mda含量測定采用硫代巴比妥酸(tba)比色法。(3)組織勻漿抗氧化酶活力的測定。末次給藥后，小鼠摘眼球取血后處死小鼠，立即取新鮮肝臟組織塊(0.2～1g)，除去血液，濾紙拭干，稱重，加入9倍重量的冷生理鹽水，用組織勻漿機制成10％勻漿液，檢測sod活力。sod活力測定采用鄰苯三酚氧化法。1.2.4實驗數據統計所測定指標均采用均數±標準差表示，使用spss10.0軟件中的t檢驗進行分析。1.3結果與分析1.3.1一般體征觀察結果給予牛樟芝酵素和牛樟芝提取液30d的組，小鼠反應靈敏、行動靈活、毛色光亮；老齡對照組反應遲滯、行動緩慢、毛色粗糙。1.3.2牛樟芝對老齡小鼠血清過氧化脂質的影響給予牛樟芝藥材和牛樟芝酵素30d后，各組與對照組比較血清mda含量降低，差異有顯著性；牛樟芝酵素與牛樟芝藥材組比較，差異也具顯著性，見表8。表8牛樟芝提取物對老齡小鼠血清mda含量的影響注：與對照組比較，**p＜0.01；與牛樟芝藥材組比較△p＜0.051.3.3牛樟芝對老齡小鼠肝組織勻漿中超氧化物歧化酶(sod)活力的影響給予牛樟芝藥材和牛樟芝酵素30d后，各組與對照組比較，肝組織中sod活力升高差異有顯著性；牛樟芝酵素與牛樟芝藥材組比較，差異也具顯著性，見表9。表9牛樟芝提取物對老齡小鼠血清mda含量的影響劑量組動物數(只)sod活力(nu/ml)對照組1090.83±8.23牛樟芝藥材組10120.13±6.27**牛樟芝酵素組10145.76±7.52**△注：與對照組比較，**p＜0.01；與牛樟芝藥材組比較△p＜0.051.4結論本發明制得的牛樟芝酵素，能顯著增強衰老小鼠的抗氧化能力，延緩小鼠的衰老。效果也明顯優于牛樟芝藥材。2.增強免疫力功能2.1材料與儀器實驗動物清潔級昆明種小鼠30只，雌雄各半，體重(20±2)g，由廣東省醫學實驗動物中心提供；牛樟芝酵素凍干粉(自制)；牛樟芝菌，批號160701，由中山安蕎生物科技有限公司提供；二硝基氟苯(dnfb)，丙酮，麻油，硫化鈉，0.1％na2co3溶液，印度墨水，血清白介素－2(il－2)elisa測定試劑盒(rapidbio公司產品)。動物臺秤，常熟雙杰測試儀器廠；dzkw-s-4型電熱恒溫水浴鍋，北京市永光明醫療儀器有限公司；tu-1810dp型紫外-可見分光光度儀，北京普析通用；tdl-40b離心機，上海安亭科學儀器廠。2.2實驗方法2.2.1供試藥物溶液的制備(1)牛樟芝酵素凍干粉溶液：取凍干粉，加蒸餾水適量溶解，制成每1ml含1g牛樟芝的混懸液，備用。(2)牛樟芝藥材溶液：取牛樟芝藥材，粉碎成粗粉，加8倍量水煎煮2次，每次30分鐘，濾過，合并濾液，濃縮成每1ml含1g牛樟芝的混懸液，備用。2.2.2動物分組及給藥方法實驗前，小鼠隨機分為3組，分別為空白對照組、牛樟芝酵素組、牛樟芝藥材組，每組10只。牛樟芝酵素組、牛樟芝藥材組按5g/kg·bw劑量灌胃給藥，空白對照組給予等體積的生理鹽水。連續給藥10d。2.2.3觀察指標及檢測方法(1)免疫器官指數：頸椎脫臼處死小鼠，取小鼠胸腺和脾臟，電子天平稱重，計算胸腺指數和脾臟指數。胸腺指數＝胸腺重量/體重；脾臟指數＝脾臟重量/體重。(2)免疫功能檢測:①小鼠碳廓清試驗:按100ml/kg體重從小鼠尾靜脈注入稀釋4倍的印度墨汁，注入墨汁后2、10min分別從眼內眥靜脈叢取血20μl，并將其加到0.1％na2co3溶液2ml中，在600nm波長處測光密度值(od)，以0.1％na2co3溶液作空白對照。按下式分別計算廓清指數(k)。k＝(lgod1－lgod2)/(t2－t1)。②遲發型變態反應測定:小鼠腹部用硫化鈉脫毛，范圍約3cm×3cm，用10mg/mldnfb溶液50μl均勻涂抹致敏。5d后用10mg/mldnfb溶液10μl均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進行攻擊。攻擊后24h頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm耳片，稱重，以左右兩耳片重量之差為遲發型變態反應值。(3)血清il－2測定：眼眶取血1.5ml，靜置30min，2500r/min離心15min，取上置血清。采用elisa測定法測定血清il－2的含量，所有操作嚴格按照說明書進行。2.2.4實驗數據統計所測定指標均采用均數±標準差表示，使用spss10.0軟件中的t分析進行檢驗。2.3結果與分析2.3.1免疫器官指數比較與空白對照組比較，牛樟芝藥材組、牛樟芝酵素組胸腺和脾臟臟器指數均有增加(p＜0.01，p＜0.05)；與牛樟芝藥材組比較，牛樟芝酵素胸腺和脾臟臟器指數明顯增加(p＜0.05),結果見表10。表明牛樟芝酵素組作用最優。表10各組小鼠胸腺和脾臟臟器指數比較組別動物數(只)胸腺臟器指標(mg/g)脾臟臟器指數(mg/g)空白對照組103.27±0.357.35±0.11牛樟芝藥材組104.57±0.42**8.43±0.22**牛樟芝酵素組105.37±0.35**△9.16±0.40**△注：與對照組比較，**p＜0.01；與牛樟芝藥材組比較△p＜0.052.3.2碳廓清能力比較與空白對照組比較，牛樟芝藥材組碳廓清指數無明顯差異(p＞0.05)，而酵素組碳廓清指數則顯著提高(p＜0.05)。表明酵素組促進小鼠碳粒廓清的能力明顯高于其它各組，即明顯提高小鼠的非特異性免疫功能，見表11。表11各組小鼠碳廓清能力比較組別動物數(只)廓清指數空白對照組105.26±1.02牛樟芝藥材組106.01±0.22牛樟芝酵素組107.8±0.43*△注：與對照組比較，*p＜0.05；與牛樟芝藥材組比較△p＜0.052.3.3遲發型變態反應測定結果與空白對照組比較，牛樟芝藥材組和牛樟芝酵素組小鼠左右耳廓差重明顯縮小(p＜0.05，p＜0.01)；與牛樟芝藥材組比較，牛樟芝酵素組小鼠左右耳廓差重明顯縮小(p＜0.05)，見表12。結果顯示牛樟芝藥材及牛樟芝酵素組均能促進小鼠遲發型變態反應，牛樟芝酵素組效果最優。表12左右耳廓重量之差比較組別動物數(只)耳廓增重(mg)空白對照組101.77±1.02牛樟芝藥材組101.01±0.31*牛樟芝酵素組100.61±0.25**△注：與對照組比較，*p＜0.05，*p＜0.05；與牛樟芝藥材組比較△p＜0.052.3.4血清il－2含量比較與空白對照組比較，牛樟芝藥材組、牛樟芝酵素組血清il-2含量明無明顯差異(p＞0.05；p＞0.01)；與牛樟芝藥材組比較，牛樟芝酵素組血清il-2含量明顯增加(p＜0.05)，見表13。結果顯示牛樟芝酵素組效果最優。表13血清il-2含量比較組別動物數(只)血清il-2含量(ng/ml)空白對照組1012.34±3.75牛樟芝藥材組1015.82±0.93*牛樟芝酵素組1017.94±2.17*△注：與對照組比較，*p＜0.05；與牛樟芝藥材組比較△p＜0.052.4結論本發明制得的牛樟芝酵素，能顯著增強小鼠的免疫能力，效果也明顯優于牛樟芝藥材。綜上，本發明方法制備得到了牛樟芝酵素，其口感優良，抗氧化作用強，可以提高機體免疫力，且顯著優于傳統的牛樟芝藥材，可用于制備具有抗氧化作用和提高機體免疫力的藥品、食品或者保健食品，應用前景優良。當前第1頁12