一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物的制作方法

專利名稱：一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物；本發明又涉及所說化合物的制備方法和在抗病毒及抗腫瘤方面的應用；本發明還涉及所說化合物的藥物組合物。
背景技術：
格爾德霉素為吸濕鏈霉菌發酵產生的苯醌安莎類抗生素，由一個苯醌結構與一個平面性大環安莎橋構成。格爾德霉素的作用靶點是熱休克蛋白Hsp90，它特異性地使Hsp90失活而抑制病毒的復制。格爾德霉素通過干擾Hsp90的正常功能，阻止Hsp90底物蛋白活化，誘導細胞周期阻斷而抑制病毒復制，從而起到抗病毒或抗腫瘤的作用。獨特的作用機理，使得格爾德霉素具有廣抗病毒/腫瘤譜、與其它藥物沒有交叉耐藥和本身難以產生耐藥性的特性。格爾德霉素是以細胞因子為靶點的新型抗病毒或抗腫瘤藥物合成與篩選的優異先導化合物。
以格爾德霉素為先導物進行結構改造的工作已有一些專利或文獻報道，而國外研究多以抗腫瘤藥物篩選為目的。1979年Kazuya Sasaki等報道了格爾德霉素17位胺基取代衍生物的合成與抗腫瘤活性(Kazuya Sasaki et alJ.Antibiotics，32(8)849-851；1979)。其中，改造物17-環丙胺基和17-丙烯胺基衍生物的抗腫瘤活性強于格爾德霉素。而17-丙烯胺基衍生物的抗腫瘤活性較格爾德霉素有所提高的同時，肝毒性顯著降低，是第一個進入臨床試驗的Hsp90抑制劑。在較低的濃度下，該衍生物能夠迅速與腫瘤細胞來源的Hsp90靶向結合，主要聚集在腫瘤組織，優先殺傷腫瘤細胞。在體外、體內對p185erbB2具有較高的抑制活性(Schnur RC，Coman ML，Gallaschun RJ，et al.J Med Chem，38(19)3813-3820；1995)。
格爾德霉素的另一衍生物17-DMAG(17-二甲基氨基乙氨基-17-去甲氧基格爾德霉素鹽酸鹽)，也是通過與ATP競爭結合Hsp90N-末端結合域來抑制Hsp90活性，目前正在進行I期臨床試驗。在體外活性篩選中，17-DMAG的半數生長抑制數GI50為51nM，強于17-AAG的GI50120nM。17-DMAG對乳腺癌和白血病細胞系顯示了潛在的活性，而這二者對17-AAG不敏感；更重要的是，17-DMAG比17-AAG有更好的溶解性和口服生物利用度。口服17-DMAG 5天，每天2次，每次6.7mg/kg，能夠抑制種植胰腺瘤AsPC-1的生長，而17-AAG在此條件下沒有活性。17-DMAG注射或口服給藥對于黑色素瘤、腺癌、小細胞癌也顯示了明顯的抗腫瘤活性(Hollingshead M，et al.Cancer Chemother Pharmacol.56(2)115-125；2005)。
針對格爾德霉素在體內分布不均、易集中于肝臟和肺部從而引起嚴重肝臟毒性的情況，Mandler R.等合成制備了激素或單克隆抗體與格爾德霉素的偶聯物，該類偶聯物能夠選擇性地引起雌激素受體和HER2的降解，對其它部位無明顯影響，增強了其組織分布選擇性和靶位專一性(Mandler R et alJ.Natl.CancerInst.，92(19)1573-1581；2000)。其中Linker為 的格爾德霉素-雌二醇結合物的抗腫瘤活性最為理想，對HER2和雌激素受體IC50分別為0.1μmol和0.08μmol，對Raf-1的IC50為1.5μmol。格爾德霉素與單克隆抗體Herceptin能免疫偶聯成復合物HAPA-GA。該免疫偶聯物在體外對MDA-361/DYT2細胞的IC50為0.2±0.03mg/mL，而未經修飾的Herceptin在10mg/mL濃度下對MDA-361/DYT2細胞增生抑制率只有25％(Mandler R，Kobayashi H，Davis M，et al.Bioconjug Chem，13(4)786-791.2002)。Randall James等以篩選抗腫瘤藥物為目的，合成了一系列4，5-二氫格爾德霉素17-取代衍生物(RandallJames et alWO 9501342 A1)。Lin Zhang等以改善藥效學和生物學特性為目的，合成了格爾德霉素的二聚體類衍生物(Zhang Lin et alWO 2003066005 A2)，其中，以二乙二胺為橋的格爾德霉素17位二聚體對BT474和SKOV-3腫瘤模型具有抑制活性。
總之，文獻報道針對格爾德霉素的修飾，多為在17位引入脂肪性胺基取代基，或在17位引入單克隆抗體。在格爾德霉素17位引入核苷堿基篩選抗病毒藥物的合成研究，迄今尚未見有文獻報道。
中國醫學科學院醫藥生物技術研究所以抗病毒藥物篩選研究為主要目的，對格爾德霉素進行了系列研究，并擁有格爾德霉素抗病毒感染治療藥物用途的專利(ZL97100523)，對格爾德霉素的抗病毒活性、作用機理和開發應用等作了深入研究(Li Yuhuan，Tao Peizheng et alAntimicrobial Agents and Chemotherapy，48(3)867-872；2004)。在體外抗病毒實驗中，格爾德霉素顯著抑制非洲綠猴腎細胞(Vero)內皰疹病毒HSV-1的復制，其IC50為0.093μmol，對Vero細胞的毒性(CC50)為350μmol。格爾德霉素體外對皰疹病毒HSV-2、水痘禽口疾疫病毒VSV、柯薩奇三型病毒Cox B3、脊髓灰質炎病毒Polio-1、HIV-1和SARS冠狀病毒的IC50均在μmol水平，有明顯抑制活性。
格爾德霉素不影響病毒的吸附、穿入等，具有獨特的抗病毒作用機理以及廣抗病毒譜，并且具有與其它抗病毒藥物無交叉耐藥和本身難以產生耐藥性的特性。
有關研究顯示，格爾德霉素與核苷類抗病毒藥物聯合使具有協同作用，而且對耐藥毒株亦有明顯抑制活性。借鑒抗HIV治療中“雞尾酒療法”的經驗，考慮到聯合用藥的目的以及核苷堿基的強水溶性，本發明合成了一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，測定了所述化合物的抗病毒活性和抗病毒譜。
本發明的主要目的在于通過在格爾德霉素分子中引入水溶性強的核苷堿基，保留或增強格爾德霉素原有抗病毒活性的同時，通過改善其水溶性及組織分布等藥代動力學性質，以期獲得具有較小毒性和較高療效的新型化合物。其中，核苷堿基與格爾德霉素之間以帶有氨基的鏈狀結構部分(稱為Linker)相連。

發明內容
本發明提供了一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，其結構如式(I)所示 其中Linker為含有3-20個碳的直鏈或支鏈、飽和或不飽和、脂肪性或芳香性、不含或含有醚鍵或酯鍵或酰胺鍵的聯結部分；
R為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷等核苷及其結構類似物，或腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶等核苷堿基，以及帶有取代基R1的上述官能團；R1為含有1-8個碳原子的烴基、烴氧基，鹵素，巰基。
本發明提供了式(I)化合物的制備方法，其反應路線如下 其中X為羧基、羥基、氨基或鹵素；R為核苷或R1取代的核苷(R1為1～8個碳原子數的烴基、烴氧基、鹵素、氨基或巰基)；M為羥基、巰基、氨基；Y代表酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵；n＝0～20。
該路線首先參照文獻方法(趙知中等，有機化學中的保護基團，科學出版社，198441-49)，利用Boc2O(市售品)對起始化合物a(γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸、3-氨基丙酸、4-氨基丁醇、4-氨基丁硫醇、1，4-二氨基丁烷、1，3-二氨基丙烷等，均為市售品)的伯氨基進行保護得到Boc保護的相應產物b。
化合物b再與核苷或取代核苷R-M(環狀或非環狀腺苷、鳥苷、尿苷或胞苷，均購自Sigma試劑公司及北京試劑公司)的活潑羥基、胺基或巰基進行縮合，形成酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵實現核苷部分與Linker的連接，得到化合物c。
在三氟醋酸的作用下，化合物c脫去Boc保護基(部分核苷的異丙叉保護基亦同時脫去)，得到帶有游離氨基的化合物d。
化合物d在鹵代烷烴類溶劑如氯仿、醇性溶劑如甲醇或極性非質子性溶劑如N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙酸乙酯、乙腈、丙酮中，堿性條件(三乙胺、吡啶、N，N-二甲基吡啶、碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈣)下，與格爾德霉素(自制樣品，屬于市售商品，可購自Sigma等公司)發生親核取代反應，得到目標化合物(I)。
按照上述路線和方法制備得到了化合物1～27，結構見表1。
本發明發現了式(I)化合物具有抗HBV、HIV、HSV作用。
本發明還提供了所說化合物的藥物組合物，可以含有治療有效量的上述化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學上可接受的載體。
本發明的化合物和藥物組合物可用于制備抗病毒或抗腫瘤藥物。
本發明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學領域的常規生產方法制備，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
本發明的藥物組合物優選含有重量比為0.1％-99.5％的活性成分，最優選含有重量比為0.5％-99.5％的活性成分。
發明效果按照以上所說路線和方法，能夠穩定、可重復性地合成得到本發明化合物。
本發明采用細胞培養法測定了發明化合物的體外抗病毒活性和抗病毒譜，結果發明化合物具有廣譜抗病毒活性，對逆轉錄病毒HIV-1和HBV的抑制作用較強，IC50在ng/ml水平，強于對照藥拉米夫定，對皰疹病毒HSV-1和2型的活性明顯強于對照藥阿昔洛韋。另外，發明化合物對CoX病毒也有較強抑制活性。各化合物的活性測定結果如表1所示。
表1發明化合物的抗病毒活性

具體實施例以下實施例可以使本專業技術人員更全面的理解本發明，但不以任何方式限制本發明。所有化合物的結構均經1H NMR或MS所確定。
實施例117-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(1)的制備參照文獻(趙知中等，有機化學中的保護基團，科學出版社，198441-49)，以Boc2O為原料，保護γ-氨基丁酸的伯氨基，得到γ-叔丁氧酰胺-丁酸。
取γ-叔丁氧酰胺-丁酸0.45g(2.22mmol)，加入5mL CHCl3。溶解后加入二環己基碳二亞胺(DCC)0.6g(2.91mmol)，室溫攪拌，出現大量白色混濁。反應進行4小時，濾除白色沉淀，含有γ-叔丁氧酰胺-丁酸酐的濾液備用。
取拉米夫定0.6g(2.63mmol)置250mL帶回流冷凝裝置的圓底燒瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺50mL，70℃攪拌，至拉米夫定完全溶解。將上步反應所得濾液轉入反應瓶，加入DCC 0.6g(2.91mmol)、N，N-二甲基吡啶(DMAP)0.06g(0.49mmol)，室溫攪拌，出現白色混濁。反應進行30小時，濾除不溶物，油泵減壓濃縮得略顯黃色的粘稠液體，加入乙醚20mL，攪拌，出現大量白色沉淀，減壓過濾，收集固體產物，得到拉米夫定與γ-叔丁氧酰胺-丁酸的酯化粗產物。
取上步所得拉米夫定與γ-叔丁氧酰胺-丁酸的酯化粗產物50mg(0.121mmol)，加入三氟醋酸0.5mL，N2保護下，室溫反應約0.5小時。減壓濃縮，得淡黃色油狀液體。加入乙醚10mL攪拌，析出白色固體，過濾，得到拉米夫定與γ-氨基丁酸的酯化產物。
取格爾德霉素50mg(89.29μmol)，加入5mL CHCl3，甲醇0.5ml，攪拌至格爾德霉素溶解，反應液呈橙黃色。加入上步操作所得拉米夫定與γ-氨基丁酸的酯化產物70mg(164μmol)，室溫反應進行4天，蒸干溶劑，得暗紫色固體，將固體殘留物溶于10mL乙酸乙酯，依次用去離子水，飽和NaHCO3，1mol/LHCl溶液，飽和食鹽水洗。有機相中加入無水Na2SO4干燥過夜。濾除干燥劑，有機相減壓濃縮。用硅膠柱進行層析分離，得化合物(1)46.2mg(61.2％)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.783(s，3H，C8-CH3)；2.011(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.532(s，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；2.7～3.1(m，4H，C17-NH-CH2，氧硫雜環4位2H)；3.287(s，3H，C12-OCH3)；3.355(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，2H，C11-H，C12-H，)；4.3～4.6(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；4.902(br，2H，-NH2)；5.205(s，1H，C7-H)；5.3～5.4(m，1H，氧硫雜環2位1H)；5.8～5.9(m，2H，C9-H，C5-H)；6.281(s，1H，胞嘧啶C5-H)；6.409(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.562(t，J＝11.2Hz，1H，C4-H)；6.948(d，J＝11.6Hz，1H，C3-H)；7.224(s，1H，C19-H)；7.896(d，1H，J＝5.6Hz，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝845(M+2)，843(M+)，112(胞嘧啶)。
實施例217-(4’-((5”-(4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(2)的制備核苷堿基部分以5-氟拉米夫定為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(2)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.3(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.983(s，3H，C8-CH3)；2.211(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.632(s，2H，CH2-COO)；2.8～3.0(m，4H，C17-NH-CH2，氧硫雜環4位2H)；3.182(s，3H，C12-OCH3)；3.458(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H)；4.2～4.3(m，2H，COO-CH2-CH-S)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.294(s，1H，C7-H)；5.3～5.4(m，1H，氧硫雜環2位1H)；5.9～6.2(m，2H，C9-H，C5-H)；6.427(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.692(t，J＝11.6Hz，1H，C4-H)；7.148(d，J＝11.4Hz，1H，C3-H)；7.524(s，1H，C19-H)；8.362(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝863(M+2)，861(M+)。
實施例317-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(3)的制備核苷堿基部分以阿昔洛韋為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(3)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.645(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；2.135(s，3H，C8-CH3)；2.261(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.7(m，2H，CH2-COO)；2.7～2.9(m，2H，C17-NH-CH2)；3.242(s，3H，C12-OCH3)；3.388(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側鏈O-CH2-CH2OOC)；4.1～4.4(m，2H，核苷側鏈OCH2-CH2-OOC)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；5.073(s，1H，C7-H)；5.283(s，2H，核苷側鏈N-CH2-O)；6.0～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.773(t，J＝11.4Hz，1H，C4-H)；6.9～7.1(m，1H，C3-H)；7.449(s，1H，C19-H)；7.862(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝842(M+1)，841(M+)。
實施例417-(4’-((5”-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(4)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉腺苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(4)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.861(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.943(s，3H，C8-CH3)；2.181(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.7(m，2H，CH2-COO)；2.8～2.9(m，2H，C17-NH-CH2)；3.231(s，3H，C12-OCH3)；3.428(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H)；4.1～4.4(m，2H，-CH2OCO)；4.6～4.7(m，，1H，C6-H)；5.294(s，1H，C7-H)；5.6～6.2(m，3H，C9-H，C5-H，糖環2位H)；6.427(s，1H，糖環5位H)；6.6～6.7(m，1H，C4-H)；6.9～7.0(m，1H，C3-H)；7.524(s，1H，C19-H)；8.164(s，1H，腺嘌呤C2-H)；8.758(s，1H，腺嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝883(M+2)，881(M+)實施例517-(4’-((5”-(2-氨基-6-氧代-1，6-二氫嘌呤-9-基)-3”，4-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(5)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉鳥苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(5)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.728(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.739(s，3H，C8-CH3)；1.927(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.3(m，1H，C10-H)；2.3～2.5(m，2H，CH2-COO)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.263(s，3H，C12-OCH3)；3.381(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H)；4.1～4.3(m，2H，)；4.5～4.8(m，1H，C6-H)；4.972(s，1H，C7-H)；5.6～6.2(m，3H，C9-H，C5-H，糖環2位H)；6.3～6.4(m，1H，糖環5位H)；6.7～6.8(m，1H，C4-H)；7.0～7.1(m，1H，C3-H)；7.739(s，1H，C19-H)；8.258(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝898(M+1)，897(M+)實施例617-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(6)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(6)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.752(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；1.815(s，3H，C8-CH3)；2.108(s，3H，C2-CH3)；2.1～2.4(m，3H，C10-H，CH2-COO)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.183(s，3H，C12-OCH3)；3.377(s，3H，C6-OCH3)；3.5～4.4(m，7H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H，-CH2OCO，糖環2位H)；4.6～5.0(m，3H，C6-H，糖環5位H，胞嘧啶C5-H)；5.359(s，1H，C7-H)；5.5～5.8(m，2H，C9-H，C5-H)；5.9～6.0(m，1H，C4-H)；6.2～6.4(m，1H，C3-H)；6.829(s，1H，C19-H)；7.441(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+2)，857(M+)實施例717-(4’-((5”-(2，4-二氧代-3，4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(7)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉尿苷為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(7)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.594(m，2H，C17-NH-CH2-CHH2-CH2-COO)；1.775(s，3H，C8-CH3)；1.972(s，3H，C2-CH3)；2.0～2.4(m，3H，C10-H)；2.5～2.8(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；2.891(s，3H，C12-OCH3)；3.117(s，3H，C6-OCH3)；3.5～4.0(m，4H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H)；4.1～4.3(m，3H，-CH2OCO，糖環2位H)；4.4～4.6(m，2H，C6-H，糖環5位H)；4.947(s，1H，C7-H)；5.2～5.5(m，2H，C9-H，C5-H)；5.6～6.1(m，2H，C4-H，尿嘧啶C5-H)；6.3～6.3(m，1H，C3-H)；6.582(s，1H，C19-H)；7.763(s，1H，尿嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+1)，858(M+)實施例817-(3’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲氧基)-3’-氧代丙胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(8)的制備核苷堿基部分以拉米夫定為原料，Linker部分為3-氨基丙酸，按實施例1類似方法合成得到(8)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.1～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.886(s，3H，C8-CH3)；2.113(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.4(m，1H，C10-H)；2.523(s，2H，氧硫雜環4位2H)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.179(s，3H，C12-OCH3)；3.325(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，COO-CH2-CH-S-)；4.4～4.7(m，2H，C6-H，胞嘧啶C5-H)；4.886(br，2H，-NH2)；5.120(s，1H，C7-H)；5.8～5.9(m，3H，C9-H，C5-H，氧硫雜環2位1H)；6.113(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.2～6.4(m，1H，C4-H)；6.6～6.7(m，1H，C3-H)；6.972(s，1H，C19-H)；7.396(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝831(M+2)，829(M+)。
實施例917-(3’-((5”-(2，4-二氧代-3，4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-3’-氧代丙胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(9)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉尿苷為原料，Linker部分為3-氨基丙酸，按實施例1類似方法合成得到(9)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.0(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.1～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.687(s，3H，C8-CH3)；1.904(s，3H，C2-CH3)；2.1～2.4(m，3H，C10-H，)；2.5～2.7(m，2H，CH2-COO)；2.731(s，3H，C12-OCH3)；2.8～3.0(m，2H，C17-NH-CH2)；3.317(s，3H，C6-OCH3)；3.6～4.0(m，4H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H)；4.1～4.3(m，3H，-CH2OCO，糖環2位H)；4.4～4.6(m，2H，C6-H，糖環5位H)；5.073(s，1H，C7-H)；5.2～5.5(m，2H，C9-H，C5-H)；5.6～6.1(m，2H，C4-H，尿嘧啶C5-H)；6.3～6.4(m，1H，C3-H)；6.941(s，1H，C19-H)；7.795(s，1H，尿嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝844(M+)實施例1017-(3’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H))-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-3’-氧代丙胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(10)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為3-氨基丙酸，按實施例1類似方法合成得到(10)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.6(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.742(s，3H，C8-CH3)；1.992(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.5(m，3H，C10-H，CH2-COO)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.205(s，3H，C12-OCH3)；3.385(s，3H，C6-OCH3)；3.5～4.2(m，7H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H，-CH2OCO，糖環2位H)；4.4～4.8(m，3H，C6-H，糖環5位H，胞嘧啶C6-H)；5.497(s，1H，C7-H)；5.6～5.8(m，2H，C9-H，C5-H)；6.0～6.2(m，1H，C4-H)；6.3～6.4(m，1H，C3-H)；6.795(s，1H，C19-H)；7.418(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝845(M+2)，843(M+)實施例1117-(5’-((5”-(2-氨基-6-氧代-1，6-二氫嘌吟-9-基)-3”，4-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-5’氧代戊胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(11)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉鳥苷為原料，Linker部分為δ-氨基戊酸，按實施例1類似方法合成得到(11)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；1.742(s，3H，C8-CH3)；1.875(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.8(m，7H，C10-H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO-CH2)；3.147(s，3H，C12-OCH3)；3.304(s，3H，C6-OCH3)；3.4～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H)；4.1～4.3(m，2H，糖環2位H)；4.5～4.8(m，1H，C6-H)；4.855(s，1H，C7-H)；5.6～6.5(m，3H，C9-H，C5-H，糖環5位H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～6.9(m，1H，C3-H)；7.334(s，1H，C19-H)；8.049(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝911(M+)實施例1217-(5’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲氧基)-5’-氧代戊胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(12)的制備核苷堿基部分以拉米夫定為原料，Linker部分為δ-氨基戊酸，按實施例1類似方法合成得到(12)。
1H-NMR δ(ppm)1.0～1.3(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，4H，CONH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；1.895(s，3H，C8-CH3)；2.007(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.9(m，5H，C10-H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；3.173(s，3H，C12-OCH3)；3.464(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.7(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環4位2H)；4.3～4.6(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，2H，C6-H，胞嘧啶C5-H)；4.902(br，2H，-NH2)；5.325(s，1H，C7-H)；5.472(s，1H，氧硫雜環2位1H)；5.8～6.0(m，2H，C9-H，C5-H)；6.397(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.7～6.8(m，1H，C3-H)；7.129(s，1H，C19-H)；7.382(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝857(M+)。
實施例1317-(5’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)-5’-氧代戊胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(13)的制備核苷堿基部分以2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為δ-氨基戊酸，按實施例1類似方法合成得到(13)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；1.874(s，3H，C8-CH3)；2.085(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.7(m，7H，C10-H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-COO)；2.987(s，3H，C12-OCH3)；3.149(s，3H，C6-OCH3)；3.3～4.1(m，7H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H，-CH2OCO，糖環2位H)；4.4～4.8(m，3H，C6-H，糖環5位H，胞嘧啶C5-H)；5.239(s，1H，C7-H)；5.3～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；5.6～5.9(m，1H，C4-H)；6.1～6.3(m，1H，C3-H)；6.913(s，1H，C19-H)；7.294(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝871(M+)實施例1417-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲胺基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(14)的制備核苷堿基部分以2’-氨甲基-2’-去羥甲基拉米夫定為原料，Linker部分為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(14)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.8(m，2H，-NH-CH2-CH2-CH2-CONH)；1.893(s，3H，C8-CH3)；2.161(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.9(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-COO)；3.351(s，3H，C12-OCH3)；3.497(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.8(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環4位2H)；4.3～4.6(m，2H，CONH-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.146(s，1H，C7-H)；5.350(s，1H，氧硫雜環2位1H)；5.8～5.9(m，2H，C9-H，C5-H)；6.341(s，1H，胞嘧啶C5-H)；6.495(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～6.9(m，1H，C3-H)；7.329(s，1H，C19-H)；7.746(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+1)，858(M+)。
實施例1517-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙胺基)-4’-氧代丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(15)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-氨基乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分仍為γ-氨基丁酸，按實施例1類似方法合成得到(15)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.6～1.7(m，2H，NH-CH2-CH2-CH2-CONH)；1.964(s，3H，C8-CH3)；2.219(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.9(m，4H，NH-CH2-CH2-CH2-CONH)；3.152(s，3H，C12-OCH3)；3.371(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側鏈O-CH2-CH2NHCO)；4.1～4.4(m，2H，核苷側鏈OCH2-CH2-NHCO)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；5.124(s，1H，C7-H)；5.316(m，2H，核苷側鏈N-CH2-O)；6.0～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.6～6.8(m，1H，C4-H)；7.1～7.2(m，1H，C3-H)；7.267(s，1H，C19-H)；7.792(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝839(M+)。
實施例1617-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲氧基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(16)的制備參照文獻(趙知中等，有機化學中的保護基團，科學出版社，198441-49)以Boc2O為原料，保護4-氨基丁醇的伯氨基，得到N-叔丁氧酰-4-氨基-丁醇。
取2’-溴甲基-2’-去羥甲基拉米夫定1.0g(3.45mmol)溶于50mlDMSO中，加入N-叔丁氧酰-4-氨基-丁醇2.0g(10.64mmol)，KOH0.5g(8.93mmol)。反應進行8小時后，濾除不溶物，加入50mlH2O，用鹽酸調pH至7，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯相水洗后用無水硫酸鈉干燥過夜。濾除干燥劑后，濾液減壓濃縮，得到無色油狀液體(核苷部分與N-叔丁氧酰-4-氨基-丁醇的縮合粗產物)1.3g。
取得到的油狀液體0.5g，加入CHCl310ml和三氟醋酸1.05mL，室溫反應0.5小時。減壓濃縮。加入乙醚10mL攪拌，析出白色固體，過濾，得核苷與4-氨基-丁醇的縮合產物247mg。
取格爾德霉素50mg(89.29μmol)，加入5mL CHCl3，甲醇0.5mL，攪拌至格爾德霉素溶解，反應液呈橙黃色。加入上述白色固體50mg(166μmol)，室溫避光反應2天，蒸干溶劑，得暗紫色固體，將固體殘留物溶于10mL乙酸乙酯，依次用去離子水10mL，1mol/LHCl溶液10mL，飽和食鹽水10mL洗。有機相中加入無水Na2SO4干燥過夜。濾除干燥劑，有機相減壓濃縮至約1mL，用自制制備型薄層板(20cm×20cm)進行分離，得目標化合物(16)43.8mg(59.2％)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.7(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；1.832(s，3H，C8-CH3)；2.141(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.9(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；3.187(s，3H，C12-OCH3)；3.389(s，3H，C6-OCH3)；3.6～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環4位2H)；4.3～4.6(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.116(s，1H，C7-H)；5.2～5.3(m，1H，氧硫雜環2位1H)；5.489(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.291(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.5～6.7(m，1H，C4-H)；6.8～6.9(m，1H，C3-H)；7.018(s，1H，C19-H)；7.583(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝829(M+)。
實施例1717-(4’-((5”-(4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲氧基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(17)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基-5-氟拉米夫定為原料，Linker部分為4-氨基丁醇，按實施例16類似方法合成得到(17)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.3(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.3～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.8(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；2.036(s，3H，C8-CH3)；2.315(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～3.0(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；3.215(s，3H，C12-OCH3)；3.341(s，3H，C6-OCH3)；3.4～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環4位2H)；4.2～4.4(m，2H，COO-CH2-CH-S)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.047(s，1H，C7-H)；5.2～5.4(m，1H，氧硫雜環2位1H)；5.5～5.8(m，2H，C9-H，C5-H)；6.264(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.4～6.6(m，1H，C4-H)；6.7～6.8(m，1H，C3-H)；7.261(s，1H，C19-H)；8.024(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝847(M+)。
實施例1817-(4’-((5”-(2，4-二氧代-3，4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲氧基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(18)的制備核苷堿基部分以1’-溴-2’，3’-異丙叉尿苷為原料，Linker部分為4-氨基丁醇，按實施例16類似方法合成得到(18)。
1H-NMR δ(ppm)0.9～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；1.724(s，3H，C8-CH3)；1.899(s，3H，C2-CH3)；1.9～2.2(m，3H，C10-H，)；2.3～2.6(m，6H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-)；2.773(s，3H，C12-OCH3)；3.057(s，3H，C6-OCH3)；3.3～4.0(m，4H，C11-H，C12-H，糖環3，4位H)；4.1～4.4(m，1H，糖環2位H)；4.4～4.6(m，2H，C6-H，糖環5位H)；4.826(s，1H，C7-H)；5.1～5.3(m，2H，C9-H，C5-H)；5.7～6.0(m，2H，C4-H，尿嘧啶C5-H)；6.3～6.5(m，1H，C3-H)；6.831(s，1H，C19-H)；7.572(s，1H，尿嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝844(M+)實施例1917-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙氧基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(19)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為4-氨基丁醇，按實施例16類似方法合成得到(19)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.8(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；2.036(s，3H，C8-CH3)；2.194(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.5(m，1H，C10-H)；2.6～3.1(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-O-)；3.252(s，3H，C12-OCH3)；3.329(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，核苷側鏈O-CH2-CH2-O-)；4.2～4.3(m，2H，核苷側鏈OCH2-CH2-O-)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；4.957(s，1H，C7-H)；5.1～5.3(m，2H，核苷側鏈N-CH2-O)；6.1～6.4(m，2H，C9-H，C5-H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～7.0(m，1H，C3-H)；7.252(s，1H，C19-H)；7.742(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝828(M+1)，827(M+)實施例2017-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲硫基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(20)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基拉米夫定為原料，Linker部分為4-氨基丁硫醇，按實施例16類似方法合成得到(20)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；1.921(s，3H，C8-CH3)；2.024(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.078(s，3H，C12-OCH3)；3.254(s，3H，C6-OCH3)；3.3～3.5(m，2H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；3.6～3.8(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環4位2H)；4.2～4.5(m，2H，COO-CH2-CH-S-)；4.5～4.6(m，1H，C6-H)；4.984(s，1H，C7-H)；5.1～5.2(m，1H，氧硫雜環2位1H)；5.329(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.029(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.9～7.0(m，1H，C3-H)；7.215(s，1H，C19-H)；7.483(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝844(M+)。
實施例2117-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙硫基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(21)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為4-氨基丁硫醇，按實施例16類似方法合成得到(21)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.1～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；1.875(s，3H，C8-CH3)；2.096(s，3H，C2-CH3)；2.4～2.5(m，1H，C10-H)；2.7～2.8(m，2H，C17-NH-CH2)；3.0～3.2(m，2H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；3.275(s，3H，C12-OCH3)；3.367(s，3H，C6-OCH3)；3.4～4.0(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側鏈O-CH2-CH2-O-)；4.2～4.3(m，2H，核苷側鏈OCH2-CH2-O-)；4.7～4.8(m，1H，C6-H)；4.931(s，1H，C7-H)；5.3～5.5(m，2H，核苷側鏈N-CH2-O)；6.2～6.4(m，2H，C9-H，C5-H)；6.6～6.7(m，1H，C4-H)；6.8～6.8(m，1H，C3-H)；7.229(s，1H，C19-H)；7.685(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝312(M+)實施例2217-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲硫基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(22)的制備核苷堿基部分以1’-溴-2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為4-氨基丁硫醇，按實施例16類似方法合成得到(22)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-)；1.873(s，3H，C8-CH3)；2.122(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.8(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-S-CH2-)；2.994(s，3H，C12-OCH3)；3.164(s，3H，C6-OCH3)；3.6～3.9(m，3H，C11-H，C12-H，糖環3位H)；4.2～4.5(m，2H，糖環4位H，糖環2位H)；4.5～4.6(m，1H，C6-H)；4.984(s，1H，C7-H)；5.329(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.029(s，1H，糖環5位H)；6.5～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～7.0(m，1H，C3-H)；7.215(s，1H，C19-H)；7.483(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝859(M+)。
實施例2317-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲胺基)丁胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(23)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基-拉米夫定為原料，Linker部分為1，4-二氨基丁烷，按實施例16類似方法合成得到(23)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.1(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.7(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.917(s，3H，C8-CH3)；2.129(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～3.1(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-)；3.187(s，3H，C12-OCH3)；3.254(s，3H，C6-OCH3)；3.6～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環4位2H)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；4.964(s，1H，C7-H)；5.146(s，1H，氧硫雜環2位1H)；5.392(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.4～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.096(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.4～6.6(m，1H，C4-H)；6.7～6.9(m，1H，C3-H)；7.186(s，1H，C19-H)；7.338(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝827(M+)。
實施例2417-(4’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙胺基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(24)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為1，4-二氨基丁烷，按實施例16類似方法合成得到(24)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.6～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH)；1.924(s，3H，C8-CH3)；2.879(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～3.0(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2)；3.248(s，3H，C12-OCH3)；3.451(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，6H，C11-H，C12-H，核苷側鏈O-CH2-CH2NH)；4.6～4.8(m，1H，C6-H)；5.075(s，1H，C7-H)；5.1～5.3(m，2H，核苷側鏈N-CH2-O)；6.0～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.6～6.8(m，1H，C4-H)；7.1～7.2(m，1H，C3-H)；7.314(s，1H，C19-H)；7.498(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝825(M+)。
實施例2517-(4’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-3”，4”-二羥-四氫呋喃-2”-基)甲胺基)丁胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(25)的制備核苷堿基部分以1’-溴-2’，3’-異丙叉胞苷為原料，Linker部分為1，4-二氨基丁烷，按實施例16類似方法合成得到(25)。
1H-NMR δ(ppm)0.6～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.4～1.6(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.916(s，3H，C8-CH3)；2.209(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.4(m，1H，C10-H)；2.6～2.8(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-) ；3.024(s，3H，C12-OCH3)；3.352(s，3H，C6-OCH3)；3.6～4.0(m，3H，C11-H，C12-H，糖環3-H)；4.1～4.5(m，3H，糖環4位-H，糖環2位-H)；4.5～4.6(m，1H，C6-H)；5.046(s，1H，C7-H)；5.142(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；5.961(s，1H，糖環5位-H)；6.4～6.6(m，1H，C4-H)；6.8～7.0(m，1H，C3-H)；7.159(s，1H，C19-H)；7.571(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝842(M+)。
實施例2617-(3’-((5”-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)-1”，3”-氧硫雜環戊-2”-基)甲胺基)丙胺)-17-去甲氧基格爾德霉素(26)的制備核苷堿基部分以2’-溴甲基-2’-去羥甲基-拉米夫定為原料，Linker部分為1，4-二氨基丙烷，按實施例16類似方法合成得到(26)。
1H-NMR δ(ppm)0.7～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.4(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.5～1.7(m，2H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.927(s，3H，C8-CH3)；2.216(s，3H，C2-CH3)；2.2～2.4(m，1H，C10-H)；2.5～2.8(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-)；3.006(s，3H，C12-OCH3)；3.149(s，3H，C6-OCH3)；3.2～3.6(m，4H，C11-H，C12-H，氧硫雜環4位2H)；4.3～4.6(m，2H，-S-CH-CH2-NH-)；4.6～4.7(m，1H，C6-H)；5.017(s，1H，C7-H)；5.314(s，1H，氧硫雜環2位1H)；5.489(s，1H，胞嘧啶C5-H)；5.5～5.7(m，2H，C9-H，C5-H)；6.168(s，1H，氧硫雜環5位1H)；6.3～6.5(m，1H，C4-H)；6.6～6.8(m，1H，C3-H)；6.902(s，1H，C19-H)；7.371(s，1H，胞嘧啶C6-H)。
MS(FAB)m/z＝813(M+)。
實施例2717-(3’-(2”-((2-氨基-6-氧-1，6-二氫-4H-嘌呤-9(5H)-基)甲氧基)乙胺基)丙胺)-17-去甲氧基-格爾德霉素(27)的制備核苷堿基部分以9-(O-(2’-溴乙基)氧甲基)鳥嘌呤為原料，Linker部分為1，4-二氨基丙烷，按實施例16類似方法合成得到(27)。
1H-NMR δ(ppm)0.8～1.2(m，6H，C10-CH3，C14-CH3)；1.2～1.5(m，5H，C13-H2，C14-H，C15-H2)；1.6～1.8(m，4H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-)；1.994(s，3H，C8-CH3)；2.182(s，3H，C2-CH3)；2.3～2.5(m，1H，C10-H)；2.6～3.0(m，6H，C17-NH-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-)；3.177(s，3H，C12-OCH3)；3.281(s，3H，C6-OCH3)；3.5～3.9(m，4H，C11-H，C12-H，核苷側鏈O-CH2-CH2-NH-)；4.4～4.6(m，1H，C6-H)；4.883(s，1H，C7-H)；4.9～5.1(m，2H，核苷側鏈N-CH2-O)；5.9～6.3(m，2H，C9-H，C5-H)；6.5～6.7(m，1H，C4-H)；6.7～6.8(m，1H，C3-H)；7.172(s，1H，C19-H)；7.604(s，1H，鳥嘌呤C7-H)。
MS(FAB)m/z＝812(M+)實施例28測定化合物抗單純皰疹病毒1型(VR733株)病毒活性的實驗方法在長滿VERO細胞的培養瓶內加入0.25％胰酶0.1ml，0.02％EDTA 5ml。于37℃消化20～25分鐘。廢棄消化液，加培養液吹打。1∶3傳代，3天長滿。配制成每毫升20～30萬個細胞，接種到96孔細胞培養板，每孔0.1ml。于37℃，5％CO2條件下培養24小時，細胞長成單層后進行實驗。
取20～30萬個VERO細胞每毫升的細胞培養液接種96孔細胞培養板，每孔0.1ml。于37℃，5％CO2條件下培養24小時。棄去培養液，加入適量HSV-1病毒，吸附1小時后，棄去病毒液。加入測試藥物，每濃度2孔。于37℃，5％CO2條件下培養。48小時后觀察細胞病變。按下式計算藥物抑制病毒的半數有效濃度(IC50)，結果見表1。
IC50=Antilog(A+50-AB-A×C)]]>A＝log(病變＜50％的藥物濃度)B＝log(病變＞50％的藥物濃度)C＝log(稀釋倍數)實施例29測定化合物抗單純皰疹病毒2型(SAV株)活性的實驗方法按實施例28類似的方法測定化合物抗HSV-2病毒IC50值，結果見表1。
實施例30抗HBV病毒活性的測定采用細胞培養法，測定了本發明化合物在體外對乙肝病毒和HIV病毒復制的影響。抗乙肝病毒活性研究中，樣品細胞毒性試驗方法為將試驗細胞配制成每毫升10萬個細胞接種細胞培養板，96孔板每孔100μl，37℃ 5％CO2培養24小時，細胞長成單層后進行實驗。目標化合物和對照藥用培養液配制成所需濃度后加入96孔細胞培養板，每濃度4孔，每4天換同濃度藥液一次，同時設無藥物細胞對照組。以觀察細胞病變為指標，8天顯微鏡下觀察細胞病變程度。樣品抑制肝炎病毒活性試驗方法為每毫升10萬個試驗細胞接種96孔細胞培養板，每孔100μl，37℃ 5％CO2培養24小時，加入藥物，同時設細胞對照組，4天換原濃度藥液或對照培養液一次。細胞裂解后按分子克隆實驗技術方法提取HBVDNA。各樣品斑點雜交、放射自顯影、測量各雜交點的A值后，利用標準曲線的回歸方程計算細胞對照及給藥組的HBV DNA含量后，計算半數有效濃度(IC50)，結果見表1。
實施例31藥物抑制HIV-1活性測定在96孔細胞培養中加入8個不同稀釋濃度的藥液和陽性對照藥液，每個稀釋度重復2孔，設細胞對照；再將2×105細胞/ml 100μl接種于含藥96孔細胞培養板內。置37℃、5％CO2和飽和濕度培養箱內培養，每天觀察細胞病變。按HIV-1P24抗原試劑盒提供的操作步驟，測定加藥后第4天(96小時)細胞培養上清HIV-1 P24抗原含量，計算藥物半數有效濃度(IC50)，結果見表1。
實施例32測定化合物抗Cox B3病毒活性的實驗方法按實施例28類似的方法測定化合物抗Cox B3型病毒IC50值，結果見表1。
實施例33測定化合物抗Cox B6病毒活件的實驗方法按實施例28類似的方法測定化合物抗Cox B6型病毒IC50值，結果見表1。
實施例34測定化合物抗VSV病毒活性的實驗方法按實施例28類似的方法測定化合物抗VSV病毒IC50值，結果見表1。
權利要求
1.一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，其結構如式(I)所示 其中Linker為含有3-20個碳的直鏈或支鏈、飽和或不飽和、脂肪性或芳香性、不含或含有醚鍵或酯鍵或酰胺鍵的聯結部分；R為腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷等核苷及其結構類似物，或腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶等核苷堿基，以及帶有取代基R1的上述官能團；R1為含有1-8個碳原子的烴基、烴氧基，鹵素，巰基。
2.一種制備權利要求1所述式(I)化合物的方法，其反應式如下 其中，X為羧基、羥基、氨基或鹵素；R為核苷或R1取代的核苷；M為羥基、巰基、氨基；Y代表酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵；n＝0～20；具體反應步驟為A、利用Boc2O對起始化合物a的伯氨基進行保護，得到Boc保護的相應產物b；B、化合物b再與核苷或取代核苷R-M的活潑羥基、胺基或巰基進行縮合，形成酯鍵、酰胺鍵、醚鍵、硫醚鍵及亞胺鍵，實現核苷部分與Linker的連接，得到化合物c；C、在三氟醋酸的作用下，化合物c脫去Boc保護基，得到帶有游離氨基的化合物d；D、化合物d在堿性條件下，與格爾德霉素發生親核取代反應，得到目標化合物(I)。
3.權利要求1所述化合物的藥物組合物，可以含有治療有效量的上述化合物為活性成分，并含有一種或多種藥學上可接受的載體。
4.權利要求1所述化合物及其藥物組合物在制備抗病毒或抗腫瘤藥物中的應用。
5.權利要求1所述化合物的各種劑型可以按照藥學領域的常規生產方法制備，如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
6.權利要求1所述化合物的藥物組合物優選含有重量比為0.1％-99.5％的活性成分，最優選含有重量比為0.5％-99.5％的活性成分。
全文摘要
本發明涉及一組連有核苷堿基的格爾德霉素衍生物，它是通過在格爾德霉素分子中引入水溶性強的核苷堿基，保留或增強格爾德霉素原有抗病毒活性的同時，通過改善其水溶性及組織分布等藥代動力學性質，以獲得具有較小毒性和較高療效的新型化合物，其中，核苷堿基與格爾德霉素之間以帶有氨基的鏈狀結構部分(稱為Linker)相連接。
文檔編號A61P31/00GK1817866SQ20061006523
公開日2006年8月16日 申請日期2006年3月21日 優先權日2006年3月21日
發明者李卓榮, 陶佩珍, 山廣志, 李玉環 申請人:中國醫學科學院醫藥生物技術研究所