專利名稱：：對腫瘤生長的抑制的制作方法對腫瘤生長的抑制本發明涉及瘤性組織的治療方法。特別地，它涉及通過使用例如肽的致溶解化合物(lyticcompound)使腫瘤細胞溶解以誘導炎癥反應的方法。通過引發炎癥反應，激活了固有和獲得性免疫系統的途徑，促進腫瘤特異性免疫應答。這種對免疫系統的引發賦予了受試者抗相應肺瘤細胞的獲得性免疫，從而抑制繼發性腫瘤的生長。細胞的不受控生長和分裂可產生胂瘤。以擴散和侵襲為標準，腫瘤通常分為良性或惡性。惡性腫瘤能夠入侵和破壞周圍的組織。其細胞也可擴散至腫瘤原發部位之外。良性腫瘤不具有這些性質，但是良性肺瘤可發展到惡性階段，因此治療良性腫瘤和惡性肺瘤都可能是有益的。例如，口腔鱗狀細胞肺瘤通常不被治療，但是這種狀況很快就會t艮到惡性階段，此時就不得不通過手術將舌頭部分或全部切除。此外，良性腫瘤本身可能也是不良的，特別是如果它們很大并生長在重要器官鄰近，因此，也可能希望對良性腫瘤進4亍治療由此減少了隨后類似的良性腫瘤。來自惡性胂瘤的細胞從原發性肺瘤上脫離并通itjfii流或淋巴系統擴散到體內其它器官的過程被稱作轉移。當這些細胞達到體內新的區域時，它們可侵入組織并繼續分裂，并可形成新的腫瘤。這種新的腫瘤通常被稱作"繼發性肺瘤"。繼發性腫瘤的生長經常對受試者的健康構成威脅，因此需要開發抑制繼發性腫瘤形成或生長的方法。從長期來看，由于胂瘤細胞的繼續存在和之前未檢測到的微轉移隨后的生長，晚期實體腫瘤的切除通常是無效的。在乳腺癌患者中，這一直是復發和最終造成死亡的主要原因。術后，散布的細胞經常休眠于細胞周期G0期。因此，這些非增殖性細胞經常對化療有抗性。晚期頭頸癌患者的治愈率在過去十年里并沒有顯著提高。這些患者中，大多數復發的病例是局部或局域性的，并以使它們難以被接近的方式存在。一個例子為局部晚期食管癌，它們通常不宜手術并且預后差。尋找抑制繼發性腫瘤生長的方法最大的障礙是腫瘤是由來源于受試者自身的細胞形成的。免疫系統盡力將這些細胞識別為異常細胞。外源或異常細胞的識別通常包括檢測位于細胞表面上的分子以及抗原。多數腫瘤細胞具有至少一種區別于正常細胞的抗原，并且在大多數情況下所述抗原是特定的癌癥類型特異性的。一些腫瘤細胞可能具有多種抗原，而其它的細胞可能只具有單一類型的抗原。細胞表面上抗原的類型、不同抗原的數目以及抗原的優勢性都可能影響免疫系統將這些腫瘤細胞識別為異常的機率。多數類型的腫瘤具有的抗原非常少，或者只具有不易凈皮免疫系統識別為外源性的抗原，因此它們能夠逃過免疫系統的識別和破壞。因此，任何特定腫瘤類型所具有的抗原的種類和數量在確定腫瘤的"免疫原性"如何中起到重辨用。"免疫原性"意為引起免疫應答的能力，因此一種腫瘤的免疫原性越強，則它越可能被免疫系統識別并攻擊。已經進行了許多嘗試來幫助免疫系統抵抗腫瘤。一種早期方法包括通過對免疫系統進行一般性剌激，例如，通過施用細菌(活的或滅活的)來引發一般性免疫應答，其也可以用于抵抗腫瘤。這也被稱為非特異性免疫。最近的一些針對幫助免疫系統特異性識別肺瘤特異性抗原的方法包括對受試者施用腫瘤特異性抗原，特別是與佐劑(已知可引起或提高免疫應答的物質)聯合施用。該方法需務本外分離和/或合成抗原，這不僅昂貴而且耗時。一種可以降低不同類型癌癥復發率的替代方法為釆用免疫治療。大多數癌癥在使用免疫治療時都存在一些困難。通常并未鑒定出所有的腫瘤特異性抗原，例如，乳腺癌中，所發現的已知抗原占總腫瘤的20%-30%。因此，^使用腫瘤特異性疫苗只取得了有限的成功。仍然非常需要抑制繼發性胂瘤生長或形成的替代方法。本發明人令人驚奇的發現，致溶解化合物可用于溶解患者體內第一腫瘤的細胞，并因此抑制所述患者體內繼發腫瘤的生長。如本文實施例中所述，使用致溶解肽證明了此效果。其它一些致溶解化合物是本領域已知的，其實例包括去污劑如TritonX-100和酸如鹽酸。基于其溶解腫瘤細胞的能力，在本領域中已經提出致溶解肽用于腫瘤治療的用途(Rissoetal"Cell.Immunol.[1998107和WO01/19852)。有關這種致溶解肽不僅用于治療第一腫瘤、還抑制第二腫瘤生長的發現是完全出人意料。不受理論的限制，懷疑第一腫瘤的溶解引發了炎癥反應。所述溶解可6造成癌細胞特異性抗原的暴露。"暴露，，意為使得抗原可以被免疫系統識別為外源物質。因此"暴露，，包括使抗原更容易被免疫系統接近和/或使其以一種更可能被免疫系統識別的方式呈遞給免疫系統，例如，它是在細胞片段上，而不是在整個細胞上。因此，術語"暴露"包括從細胞間隙內釋放抗原，但也包括任何細胞結構上的其它變化，使得抗原變得更容易被免疫系統識別。暴露的抗原可激活免疫系統中特異性B細胞和/或T細胞并使得這些細胞其中一些成熟成為記憶細胞。記憶細胞通常具有很長的壽命，并且當它們第二次或又一次遇到相同抗原時，它們比處女型(virgin)B或T細胞更容易應答。該產生和維持特異記憶細胞的過程通常被稱作"免疫記憶"或"獲得性免疫"。因此，本發明的發明人出人意料的發現致溶解試劑(例如肽)可用來i秀導抗腫瘤的免疫記憶。本發明的發明人已證實通過用致溶解化合物成功治療腫瘤后，就觀察不到第二肺瘤的生長了。在模式實驗中，來自先前用致溶解化合物成功治療(治愈)的動物的脾(免疫)細胞的過繼轉移顯示出賦予未治療的接受者以特異性免疫。因此，接受來自之前治愈小鼠的脾細胞的接受者能夠消除^的腫瘤，而接受來自未處理(naive)小鼠的脾細胞的接受者不能消除植入的胂瘤。這些結果證明保護性作用是由于先前成功的腫瘤消除賦予了對隨后腫瘤的長期的特異性免疫，特別是隨后的同類型腫瘤。而且，腫瘤通常誘導一般性免疫抑制，因此本發明中所觀察到的免疫系統的引發是非常有利的。因此，一方面本發明提供了在受試者中誘導獲得性免疫的方法，所述方法包括對所述受試者施用有效量的致溶解化合物，其中所述致溶解化合物通過第一肺瘤內細胞的溶解產生抑制第二腫瘤生長或形成的免疫應答。簡單的說，本發明提供了在受試者中誘導獲得性免疫的方法，它包括對所述受試者施用有效量的致溶解化合物。在本文中，獲得性免疫應被理解為抗肺瘤生長或形成的免疫，特別是抗與所述致溶解化合物直接靶向溶解的腫瘤相同或相似的腫瘤。因此，致溶解化合物被設計或選擇成用來溶解腫瘤細胞。從另一個角度看，本發明提供了治療受試者中癌癥的方法，它包括對所述受試者施用有效量的致溶解化合物，其中所述的致溶解化合物通過第一肺瘤內細胞的溶解而產生抑制第二腫瘤生長或形成的免疫應答。再從另一方面看，本發明的發明者們發現致溶解化合物可用于第一腫瘤的治療以產生抗第二肺瘤的疫苗。疫苗是原位產生的，即"i秀導免疫應答和產生免疫記憶的抗原由于胂瘤細胞的溶解而被呈遞給免疫系統。在對受試者施用例如肽的致溶解化合物而原位(體內)產生抗原的這類疫苗與現有技術中的疫苗完全不同，后者通常是在實驗室(即體外)制備好抗原然后再施用于受試者。因此，另一個方面本發明提供了致溶解化合物在制備用作抗腫瘤生長或發展疫苗的藥劑中的用途。"生長和n，包括腫瘤的形成。本發明還提供了通過對所述患者施用致溶解化合物(優選致溶解肽)來對受試者進行免疫接種以抗腫瘤生長或發展的方法。所提及的"疫苗"和"免疫接種"均表示預防作用，因此，盡管可能有對已有腫瘤的有利的直接治療方法，但一個重要動機是預防或減輕未來的腫瘤形成、生長或發展。不受理論的限制，相信溶解事件誘導炎癥反應，其對于第一腫瘤的消除以及誘導抗一個或多個第二腫瘤的獲得性免疫保護來說似乎非常重要。本發明人的發現證明在同系動物模型中(具有完整的免疫系統)經常可以成功使得第一腫瘤完全消退，而在棵鼠(不具有功能性免疫系統)中，對第一腫瘤的生長抑制無法超過50%。因此，溶解第一腫瘤的一些部分可能就足夠了，其可促進對腫瘤剩余細胞的定向免疫應答，以及誘導抗繼發性腫瘤的保護性抗腫瘤記憶。因此，在受試者體內產生抗腫瘤的獲得性免疫，特別是抗與被溶解的第一腫瘤類型相同或相似的腫瘤。本發明還提供了致溶解化合物在制備誘導受試者體內產生獲得性免疫的藥劑中的用途。特別地，本發明提供了致溶解化合物在制備誘導受試者體內產生獲得性免疫的藥劑中的用途，其中所述致溶解化合物通過第一腫瘤中細胞的溶解而產生抑制第二腫瘤生長或形成的免疫應答。本發明也提供了用于誘導受試者體內產生獲得性免疫的致溶解化合物。更特別地，本發明提供了用于誘導受試者產生獲得性免疫的致溶解化合物，其中所述致溶解化合物通過第一腫瘤中細胞的溶解而產生抑制第二腫瘤生長或形成的免疫應答。因此，"第一腫瘤"是指已在受試者內鑒定的并打算通過使其直接且立即溶解來治療的腫瘤。第一肺瘤通常是原發性腫瘤，即在受試者體內發生和/或被鑒定出來的此類型的第一個腫瘤。然而，所述"第一腫瘤"實際上也可能是繼發性腫瘤。這種情況可能出現在原發性腫瘤從受試者中除去(手術或其它方法)的例子中。因此，"第一腫瘤"并不意P未著必須是在受試者體內發生的第一個腫瘤；術語"第一"的使用與本發明的方法中各事件發生的順序有關。通常會將致溶解化合物局部施用于第一腫瘤，例如，注射入該第一腫瘤或其緊鄰部位，盡管全身性給藥也在預期中。注射液可例如以常規方式生產，如添加例如對羥基苯甲酸酯之類的防腐劑或例如EDTA的穩定劑。隨后將所述溶液填充入注射小瓶或安瓿中。本發明方法和用途的一個目標是產生免疫記憶并由此抑制經受體內第一腫瘤溶解的患者中第二腫瘤的生長或形成。生長抑制包括腫瘤的消退，即尺寸減小，優選減小到肺瘤完全消失和/或不再能檢測到的程度。抑制也包括預防第二腫瘤的形成。因此，才艮據本發明的有效治療可意為患者在對第一腫瘤進行初始溶解治療之后不再發展出可檢測到的腫瘤。生長抑制還包括降低腫瘤生長的正常速度，減緩或防止實體腫瘤內血管網絡的建立。術語"第二肺瘤"通常是指繼發性胖瘤，也稱作轉移，也就是由來自其它腫瘤并擴散到新部位的細胞m成的腫瘤。然而，在本發明的范圍內，術語"第二鐘瘤"也可包括原發性肺瘤。這種情況出現在兩個或更多肺瘤共存時，例如兩個獨立出現的原發性肺瘤，或一個原發性和一個繼發性腫瘤并且其中直接用致溶解肽治療所述繼發性胂瘤以誘導抗該類腫瘤(包括原發性腫瘤)的免疫記憶。術語"第二，，肺瘤包括字面上的第二個和任何隨后或另外的腫瘤。因此，可根據本發明抑制數個繼發性腫瘤的生長。所述"第二"腫瘤也可能是在初始治療后復發的腫瘤，其中所述的初始治療可能采用常規治療(即不一定通過溶解)。所述笫一胂瘤和第二肺瘤優選具有相似的免疫原性，優選所述第一腫瘤和第二腫瘤是相同類型的癌癥。應該理解的是，在任何給定的腫瘤中，并非所有的細胞都具有相同的表型，因此腫瘤的各個細胞可能具有不同的抗原。這可能會導致溶解后暴露出大量抗原，并可能提供抗多種癌細胞類型的免疫記憶。由于對免疫記憶的^l"導，如上所討論，在施用致溶解化合物時受試者中可能不存在"第二腫瘤"或至少檢測不到。因為最初的溶解事件"引發"了受試者并激活了免疫系統，因此認為產生了原位癌癥疫苗是恰當的。整篇文章中，除非文中另有清楚說明，任何前面沒有"第一"或"第二"修飾的術語"腫瘤"都應被理解為適用于第一和第二腫瘤。第一腫瘤的"溶解，，應被理解為意味著所述腫瘤一個或多個細胞的溶解。因此并不需要整個肺瘤溶解。本文所用的"溶解"包括細胞的部分和完全溶解。部分溶解意味著已充分地使細胞外膜去穩定化而造成細胞成分從細胞內泄漏和/或造成外膜的部分從細胞上脫離下來。抗原呈遞并不要求腫瘤細胞完全破碎。優選的，腫瘤選自'淋巴瘤、癌瘤(carcinoma)和肉瘤，最優選B細胞淋巴瘤。黑色素瘤也涵蓋在內。總的來說，腫瘤是天然發生的、病理性肺瘤；如上所述，良性胂瘤可以是耙標。本發明另一個優選應用是良性腫瘤的治療，例如，口腔上皮細胞良性腫瘤。以前，這類肺瘤在最初確診后可能沒有進行治療，而是"觀察并等待"一段時間。通過對該腫瘤的早期治療，可能會阻止它向惡性腫瘤轉化的過程。對化療有抗性的良性腫瘤特別適合作為目標。本發明并不涉及化學誘導的腫瘤。"化學誘導腫瘤"是指由人類干預，通常是用于研究目的而故意導致產生的腫瘤。這些屬于"非天然腫瘤"。化學誘導的腫瘤的一個實例是由曱基膽蒽誘導的MethA纖維肉瘤。因此本文中所涉及的所有腫瘤應排除這類化學誘導腫瘤。在并非任何有意造成腫瘤發生的情況下由于暴露于環境化學品而在受試者體內產生的腫瘤不在"化學誘導腫瘤"的定義范圍之內，因此本發明涵蓋了這些腫瘤。"環境化學品，，是指受試者可以自然接觸到的任何化學品，例如空氣傳播的、7JC傳播的和/或食品傳播的化學品，這些化學品通常都以低劑量存在。10受試者可能是任何人或非人動物，優選哺乳動物，最優選人。"致溶解化合物"是指任何能夠造成動物細胞溶解的化合物。優選地，致溶解化合物對肺瘤細胞具有相當高的特異性，也就是與相當的健康細胞相比，它會優先溶解腫瘤細胞，從而使受試者施用化合物所經受的副作用最小。致溶解化合物優選地是肽。合適的致溶解肽是本領域已知的，其包括例如在WO00/12541、WO00/12542、WO01/19852和WO01/66147中以及在下列文獻中所描述的PapoN,ShaharMEisenbachL，ShaiY."AnovellyticpeptidecomposedofDL-aminoacidsselectivelykillscancercellsinculture肌dinmice"./及V/C%ctw2003;278(23):21028匪23。PapoN,Bra皿steinA，EshharZjShaiY.SuppressionofhumanprostatetumorgrowthinmicebyacytolyticD-,L-aminoAcidPeptide:membranelysis,increasednecrosis,andinhibitionofprostate~specificantigensecretion.Clawm*W^2004;64(16):5779-86。LeuschnerC，HanselW.Membranedisruptinglyticpeptidesforcancertreatments.C"iri^flf附"es2004;10(19):2299-310。JohnstoneSA,GdmonK,MayerLD,HancockRE,BallyMB./"v/加characterizationoftheanticanceractivityofmembrane-activecationicpeptides.I.Peptide國mediatedcytotoxicityandpeptide-enhancedcytotoxicactivityofdoxorubicinagainstwild-typeandp-glycoprotdnover-expressingtumorcelllines.^4wftVwicerDrwgDra.2000;15:151-60以及SelstedME,NovotnyMJ，MorrisWL,TangYQ,SmithW,C函rJS.Indolicidin,anovelbactericidaltridecapeptideamidefromneutrophils./Cte1992;267(7):4292-5。致溶解肽作為致溶解劑是特別優選的。通常它們的半衰期較短，也就是說，它們通常在溶解細胞之后很快會分解，例如由于從細胞內釋放的蛋白酶和類似的物質所致。半衰期短會降低全身毒性的風險，并且因此可能具有優勢，但是在一些情況下更長的半衰期可能合乎需要。肽的半衰期可能被操控，也就是根據需要而增長或縮短。例如，肽的半衰期可以通過引入D-氨基酸和/或修飾C-末端和/或N-末端來延長。另一類優選的致溶解化合物是已知或預測的致溶解肽的擬肽。目前在該領域中用具有在功能上相當的活性的擬肽取代基于肽或蛋白質的活性劑如治療性肽。通常，這類化合物可以簡單的用替代性的線性柔性主鏈例如(-C(R)NHCO)-n或(-C(R)CH2CH2)-n或者非線性主鏈(例如基于環己烷稠環結構的一類物質)替換肽的(-C(R)CONH)-n主鏈。除了主鏈的變化，側鏈官能團(原肽中的側鏈)以相似的方式存在，使得該化合物具有相似的溶解活力。已知有各種分子文庫和組合化學技術，它們可用于通過標準技術鑒定、選擇和/或合成這類化合物(Kieber-Emons,T.etal.CurrentOpinioninBiotechnology19978:435-441)。所述肽通常的長度是至少3個氨基酸，例如4-30個，優選長5-30個氨基酸，優選長7-25個氨基酸，并且會帶有一個或多個，優選2-8個，更優選4-8個正電荷。優選的，所述肽包括大的，例如4個或更多個，優選7個或更多非氫原子的親脂性基團，這些基團4皮認為與細胞膜相互作用并有助于溶解，優選地所述肽^^有2-6個這樣的基團。在一個優選實施方案中，致溶解肽包含至少一個聯苯基丙氨酸(Bip)和/或至少一個二苯基丙氨酸(Dip)殘基。更優選的肽包含l-5個，例如2-4個色氨酸殘基。優選地，致溶解肽不是乳鐵蛋白的衍生肽，更特別地，它優選不是環狀乳鐵蛋白(LFB，其一級結構為FKCRRWQWRMKKLGAPSrrCWRAF)。肽或擬肽類(特別是上面所提到的那些肽)的酯、酰胺或環狀f汴生物也是本發明所預期的。致溶解肽或擬肽(或其酯、酰胺或環狀衍生物)可以其游離形式或者例如以綴合物或鹽的形式使用。所述鹽優選是可藥用鹽，例如醋酸鹽。在一個優選實施方案中，所述致溶解肽或擬肽以三氟乙酸(TFA)鹽的形式存在。三氟乙酸鹽在色譜技術中經常使用，用于在肽合成之后對肽的純化。非肽類致溶解試劑優選腫瘤內遞送。致溶解肽可以通過這種方式釋放，但因其與具有相同組織類型的健康細胞相比對腫瘤細胞的選擇性，它們也可能全身性遞送。在這方面具有較高選擇性的致溶解肽是優選的。另外，所有的致溶解試劑可能通過其它方式靶向第一腫瘤的位點，例如采用脂質體遞送，糊精綴合，或其它合適的載體溶液。因此，非肽致溶解試劑也可12能采用全身性遞送。優選地，所述致溶解化合物本身是弱免疫原性的，更優選完全沒有免疫原性，即它本身不引起任何抗體反應。下面將參照下列非限定性的實施例對本發明進行描述，其中圖l表示用不同肽治療后Balb/c小鼠中A20B細胞淋巴瘤的itA。圖2表示用不同肽成功治療A20實體腫瘤一個月后重新接種A20細胞的小鼠中肺瘤的t艮。圖3表示在已成功用Mod28或Mod39治療過的動物中重新接種A-20細胞的效果。圖4表示在已成功用C12治療過的動物中重新接種A-20細胞的效果。字母a)和b)表示不同的小鼠。圖5表示在成功用Mod28或Mod39治療過的動物中重新接種A-20細胞的效果。陽性對照表明在未用肽預治療的小鼠中A20細胞的生長情況。圖6表示NDDOl對C26結腸癌的初始作用。圖7表示在成功用NDDOl治療過的小鼠中重新接種C26細胞的效果。圖8表示相比于初次實驗的(naiVe)未處理小鼠，來自成功治愈的小鼠(用Mod39致溶解肽治療)的特異性抗A20癌癥免疫的過繼轉移。接受來自之前治療過的小鼠的脾臟細胞之接受者能夠排斥^的腫瘤，而接受來自未處理(naive)小鼠的脾臟細胞之接受者不能排斥^v的腫瘤。實施例實施例1a)同系Balb/c小鼠作為模型系統使用。通過皮下注射用A20B細胞淋巴母細胞瘤的細胞(5xl(^個)接種小鼠。使腫瘤生長至20-30mii^大小。小鼠被隨機分為6-8只一組，并用選自下表l的肽直接治療腫瘤。所述治療包括一天一次注射50jil的肽溶液以提供0.5mg的肽，連續注射三天。通過測量腫瘤大小來跟蹤肺瘤的t艮。從圖1中可以看出，對照腫瘤(未治療)在15天內表現出尺寸持續增加。用表l中的肽治療腫瘤可以造成腫瘤尺寸減小，從而使得肺瘤^Jf見上完全消失。表1:狀<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>bip-聯苯基丙氨酸dip二二苯基丙氨酸b)重新用A20B細胞淋巴母細胞腫瘤(5xl(^個)接種如上所述成功消除A20B細胞淋巴母細胞腫瘤的小鼠。未治療的小鼠作為陰性對照。不再進一步施用肽或任何其它抗腫瘤劑。結果如圖2所示。當未治療的小鼠接種了腫瘤細胞，發生了明顯的腫瘤生長。當先前用cLfinB治療過的小鼠再用肺瘤細胞接種時，發生了一些初始腫瘤生長，但是在第l天其中的腫瘤就明顯小于對照小鼠中的腫瘤，并且沒有進一步的生長發生。甚至注意到某些腫瘤消退。用腫瘤細胞接種先前用C12或L-Mod39治療過的小鼠，開始會出現非常小的肺瘤，但分別在第6天或第10天后完全消失。實施例2在同系Balb/c小鼠中，研究了三種不同肽抗A20B細胞淋巴母細胞腫瘤的抗腫瘤活性。如實施例1中定義，所述肽是Model28、Model39和C12。將腫瘤細胞(5xl(^個)皮下接種于小鼠腹部，腫瘤在用肽治療之前生長至合適的尺寸(20-30mm2)。小鼠隨機分成5-6只一組，并一天一次用0.5mg/50nl肽對腫瘤進行胂瘤內治療，連續三天。用電子卡尺測量腫瘤尺寸(長和寬的平均)。三周后，成功治療的小鼠(即表現出完全腫瘤消退)，在如上所述的相似條件下接受相同數量和相同類型的肺瘤細胞。結果如圖3-5所示。實施例3在同系Balb/c小鼠中建立的小鼠C26結腸癌模型中，對Ad-LFB14-31A2、3、6、10、17、F7、R4、Kll、L14-NH2、(NDDOl)等肽的抗腫瘤活性進行測試。將C26細胞(50nl中5xl06個細胞)皮下接種于小鼠(3只)腹部，腫瘤在開始治療之前生長至合適的尺寸(20-30mm2)。在第7天時，一天一次用0.5mg/50jil肽對胂瘤進行胂瘤內治療，連續三天，并跟蹤腫瘤的iU艮。在一只小鼠中，獲得了腫瘤完全消退(圖6)。在該小鼠中，在肽治療三周后重新皮下接種C26肺瘤細胞(50^1中5xl(^個細胞)。在未經任何其它治療的情況下，腫瘤在初始生長后消退(圖7)，表明所述小鼠得到了獲得性免疫應答。實施例4初始腫瘤治療選擇同系Balb/c小鼠作為模型系統用于研究由致溶解肽(H2N-WKKWdipKKWK-COOH-Mod39)初始治療所賦予的抗A20B細胞淋巴母細胞瘤的長期抗胂瘤免疫力。在小鼠腹部皮下接種腫瘤細胞(5乂106個)，腫瘤在開始治療之前生長至合適尺寸(20-30mm2)。一天一次用0.5mg/50nl肽對小鼠進行肺瘤內治療，連續三天，并跟蹤胂瘤的t艮。在腫瘤消除后3周，選擇成功治療的小鼠作為脾臟細胞過繼轉移的M(經治療供體)。脾臟細胞轉移第一天-對未處理過的(naive)接受者小鼠進行500cGy的全身照射(TotalBodyIrradiation,TBI),以準備接受來自脾臟供體的免疫細胞的過繼轉移。第二天-如前所述方法制備來自經治療供體小鼠和未處理小鼠的不含紅細胞的脾細胞單細胞懸液(Ward,B.Aetal"J.ImmunologyAughust.1988,vol141p1047)，除了其中用無菌7JC代替氯化銨以除去紅細胞。根據BogenB.etal"EurJImmunology,May1983,vol13(5),pages353-359中所描述的方法，將供體脾細胞(大約4000萬個)靜脈內注射至受體小鼠的尾靜脈中。15第三天-將腫瘤細胞(5xl(^個)皮下接種于小鼠腹部，并通過用卡尺測量腫瘤的大小來追蹤其生長。結果表明從先前成功治療的小鼠中轉移的免疫細胞使接受小鼠獲得對相同類型腫瘤的免疫(圖8-"治愈"組)。相反地，從未處理供體小鼠中轉移免疫細胞后，植入的腫瘤并未減小(圖8-"未處理(na'ive)"組)。這些結果表明保護效果是由于先前成功的腫瘤消除，所述腫瘤消除賦予了對該腫瘤類型的長期的特異性免疫力。實施例l-3采用所提及肽的三氟乙酸(TFA)鹽形式來實施。權利要求1.致溶解化合物在制備用于在受試者中誘導抗腫瘤生長或形成的獲得性免疫之藥劑中的用途。2.致溶解化合物在制備用作在受試者中抗腫瘤生長或形成的疫苗之藥劑中的用途。3.根據權利要求1或2的用途，其中所述致溶解化合物通過溶解第一腫瘤的細胞產生抑制第二腫瘤形成、生長或發展的免疫應答。4.根據權利要求1到3中任意一項的用途，其中所述致溶解化合物為肽。5.根據權利要求4的用途，其中所述肽的長度是至少3個氨基酸，并且帶有一個或多個正電荷。6.根據權利要求4或5的用途，其中所述肽包含大的親脂性基團。7.根據權利要求6的用途，其中所述大的親脂性基團具有7個或更多的非氫原子。8.根據權利要求7的用途，其中所述致溶解肽包含至少一個聯苯基丙氨酸(Bip)和/或至少一個二苯基丙氨酸(Dip)殘基和/或1-5個色氨酸殘基。9.根據權利要求1到3中任意一項的用途，其中所述致溶解化合物為擬肽。10.根據權利要求1到9中任意一項的用途，其中腫瘤內遞送所述致溶解化合物。11.根據權利要求1到10中任意一項的用途，其中所述生長抑制是腫瘤的消退。12.根據權利要求1到11中任意一項的用途，其中所述生長抑制包括防止第二胂瘤的形成。13.根據權利要求1到12中任意一項的用途，其中所述第二腫瘤是繼發性肺瘤。14.根據權利要求1到13中任意一項的用途，其中所述第一腫瘤和所述第二肺瘤具有相似的免疫原性。15.根據權利要求14的用途，其中所述第一腫瘤和所述第二腫瘤的癌癥類型相同。16.根據權利要求l到15中任意一項的用途，其中所述腫瘤選自，淋巴瘤、癌瘤和肉瘤。17.根據權利要求1到15中任意一項的用途，其中所述腫瘤為良性腫瘤。18.根據先前任意一項權利要求中的用途，其中所述受試者為人。19.在受試者中誘導抗腫瘤形成、生長或發展的獲得性免疫的方法，所述方法包括對所述受試者施用有效量的致溶解化合物。20.對受試者進行免疫接種以抵御腫瘤形成、生長或發展的方法，所述方法包括對所述受試者施用有效量的致溶解化合物。21.根據權利要求19或20的方法，其中所述致溶解化合物通過溶解第一腫瘤中細胞產生抑制第二腫瘤生長或形成的免疫應答。22.治療受試者癌癥的方法，所述方法包括對所述受試者施用有效量的致溶解化合物，其中所述致溶解化合物通過溶解第一腫瘤中細胞產生抑制第二腫瘤生長或形成的免疫應答。23.根據權利要求19到22中任意一項的方法，其中所述致溶解化合物為肽。24.根據權利要求23的方法，其中所述肽的長度是至少3個氨基酸，并且帶有一個或多個正電荷。25.根據權利要求23或24的方法，其中所述肽包括大的親脂性基團。26.根據權利要求25的方法，其中所述大的親脂性基團具有7個或更多的非氫原子。27.根據權利要求26的方法，其中所述的致溶解肽包含至少一個聯苯基丙氨酸(Bip)和/或至少一個二苯基丙氨酸(Dip)殘基和/或1-5個色氨酸殘基。28.根據權利要求19到22中任意一項的方法，其中所述致溶解化合物為擬肽。29.根據權利要求19到28中任意一項的方法，其中肺瘤內遞送所述致溶解化合物。30.根據權利要求21到29中任意一項的方法，其中所述生長抑制是腫瘤的消退。31.根據權利要求21到30中任意一項的方法，其中所述生長抑制包括防止第二肺瘤的形成。32.根據權利要求21到31中任意一項的方法，其中所述第二腫瘤為繼發性肺瘤。33.根據權利要求21到32中任意一項的方法，其中所述第一腫瘤和所述第二肺瘤具有相似的免疫原性。34.根據權利要求33中的方法，其中所述第一腫瘤和所述第二腫瘤的癌癥類型相同。35.根據權利要求19到34中任意一項的方法，其中所述腫瘤選自'淋巴瘤、癌瘤和肉瘤。36.根據權利要求19到34中任意一項的方法，其中所述腫瘤為良性腫瘤。37.才艮據權利要求19到36中任意一項的方法，其中所述受試者為人。全文摘要本發明提供了一種致溶解化合物特別是一種致溶解肽在制備用于在受試者中誘導抗腫瘤生長或形成的獲得性免疫之藥劑中的用途，以及一種癌癥治療和免疫接種的方法。文檔編號A61K38/16GK101466391SQ200780015435公開日2009年6月24日申請日期2007年3月21日優先權日2006年3月21日發明者利夫·托內·埃利亞森,厄于斯泰因·雷克達爾,巴爾杜爾·斯文比約恩松,格爾德·貝格,約翰·西居爾·斯文森申請人:萊特克斯生物制藥股份有限公司