專利名稱：一種治療銀屑病的中藥的質量標準的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥技術領域。具體涉及一種用于銀屑病治療的中藥的質量控制標準。
背景技術：
消銀片是用于治療銀屑病的中藥制劑，具有清熱涼血，養血潤膚，祛風止癢的功效。用于血熱風燥型白疕和血虛風燥型白疕，癥見皮疹為點滴狀，基底鮮紅色，表面覆有銀白色鱗屑，或皮疹表面覆有較厚的銀白色鱗屑、較干燥、基底淡紅色、瘙癢較甚。消銀片是由13味藥材組成，其藥品質量標準收載于2005年版中國藥典一部。上述標準中，采用了薄層色譜法對大青葉，苦參，赤芍，牡丹皮，白鮮皮等五味藥材進行了鑒別，采用HPLC法對苦參一味藥材進行了含量測定。然而，對于有著13味藥材組成的消銀片，質量控制標準仍然期待著提高，而對更多的藥材進行定性、定量測定。
發明內容
本發明提供了一種消銀片的新的質量控制方法，增加了對赤芍和牡丹皮中的芍藥苷的HPLC的定量分析以及對牛蒡子中的牛蒡苷的TLC定性鑒別，使得修訂后消銀片質量標準的可控性大大提高。
本發明的目的通過如下技術方案實現 本發明的一種治療銀屑病中藥的含量測定方法為 苦參照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液(25-35∶75-65)(三乙胺調節pH值至8.0)為流動相；檢測波長為220nm。理論板數按苦參堿峰計算應不低于4000。
對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品30片，除去包衣，精密稱定，研細，取約3.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1ml，三氯甲烷30ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，容器及殘渣用三氯甲烷15ml分3次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每片含苦參以苦參堿(C15H24N2O)計，不得少于0.30mg。
赤芍、牡丹皮照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(7-17∶93-83)或者甲醇-0.02～0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(30-50∶70-50)或者甲醇-水(20-40∶80-60)或者乙腈-水(7-17∶93-83)或者甲醇-乙腈-0.01～0.05mol/L磷酸溶液(1-5∶10-16∶60-90)或者乙腈-0.1～0.4％磷酸溶液(5-20∶95-80)為流動相；檢測波長為230nm，理論板數按芍藥苷峰計算應不低于3000。
對照品溶液的配制精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥12小時以上的芍藥苷對照品適量，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇)制成每1ml含0.05～0.25mg的溶液，即得。
供試品溶液的配制取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)20-150ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率50-500W，頻率20-60kHz)10-40分鐘，放冷，再稱定重量，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每片含赤芍和牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得少于0.30mg。
其中該中藥組合物的原料藥組成為 地黃的重量份數為80-100 牡丹皮的重量份數為40-60 赤芍的重量份數為40-60當歸的重量份數為40-60 苦參的重量份數為40-60金銀花的重量份數為40-60 玄參的重量份數為40-60牛蒡子的重量份數為40-60 蟬蛻的重量份數為10-30白鮮皮的重量份數為40-60 防風的重量份數為10-30大青葉的重量份數為40-60 紅花的重量份數為10-30。
本發明的一種治療銀屑病中藥的鑒別方法包括下列方法的一種或幾種 A、取本品10片，除去糖衣，研細，用三氯甲烷10-30ml加熱回流提取10-30分鐘，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取靛玉紅對照品、苦參堿對照品，分別加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10～20μl、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-丙酮-甲醇(15-17∶5-7∶1)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與靛玉紅對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；噴以改良碘化鉍鉀溶液，供試品色譜中，在與苦參堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
B、取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醇10-30ml，超聲處理20-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水或氯仿)10-20ml使溶解，濾過，濾液用溶劑(醋酸乙酯、氯仿、乙醚)振搖提取2次，每次10-20ml，棄去溶劑(醋酸乙酯、氯仿、乙醚)液，溶劑(水或氯仿)用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次10-20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、正丁醇、水或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(39-41∶4-6∶9-11∶0.1-0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
C、另取牛蒡苷對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、正丁醇、水或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取〔鑒別〕(2)項下供試品溶液及上述對照品溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(39-41∶4-6∶9-11∶0.1-0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液或37％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
D、取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醚5-15ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液各10～20μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
E、取白鮮皮對照藥材1g，加乙醚5-15ml，浸漬過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取〔鑒別〕(1)項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液各10～20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯柋？9-21∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
本發明主要用于血熱風燥型白疕和血虛風燥型白疕，下述實驗例進一步說明本發明。
實驗例1牛蒡子的薄層鑒別的方法學研究 1.1方案一 薄層色譜條件固定相硅膠G；展開劑三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)；顯色方法噴以10％硫酸乙醇液，加熱至斑點顯色清晰；點樣量5～10μl 對照品溶液的制備稱取牛蒡苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醇(95％)20ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml使溶解，濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次15ml，棄去乙醚液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液(為《中國藥典》2005年版一部消銀片鑒別(2)供試液制備方法)。
陰性對照溶液的制備稱取10％處方量的除牛蒡子以外的各原輔料，按照工藝的制備方法制備陰性對照品100片，稱取10片的量，按照供試品溶液的制備方法制備成陰性對照溶液 1.2方案二 薄層色譜條件固定相硅膠G；展開劑氯仿-甲醇-甲酸(8∶2∶0.1)；顯色方法噴以10％硫酸乙醇液，加熱至斑點顯色清晰；點樣量5～10μl；對照品溶液與供試品溶液制備方法同方案一。
1.3方案三薄層色譜條件固定相硅膠G；展開劑氯仿-甲醇-水(40∶10∶1)；顯色方法噴以10％硫酸乙醇液，加熱至斑點顯色清晰；點樣量5～10μl；對照品溶液與供試品溶液制備方法同方案一 1.4小結 方案一中，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯現清晰的相同顏色的斑點，且Rf值適中；同樣在同一位置上陰性對照溶液無斑點。且三批供試品均符合規定。證明此方法的專屬性及耐用性良好。
實驗例2含量測定條件選擇實驗 1、樣品來源黑龍江福和華星制藥集團股份有限公司生產的消銀片，批號080523、080526、080601、080603、080427、080413、080613、080618、080621、080623； 2、對照品芍藥苷(編號110736-200630)；(編號110736-200423)由中國藥品生物制品檢定所提供； 3、色譜條件與系統適用性試驗 液相色譜儀LabAlliance高效液相色譜儀； Agilent1100 series高效液相色譜儀； 電子天平92SM-202A-DK型(Precisa Instruments Ltd.) 色譜柱Agilent ZARBAX SB-C18 4.6×250mm 5μm； Inertsil ODS-34.6×250mm 5μm； Shimadzu VP-ODS 150L×4.6； 預柱EasyGuard Kit C18 Dikma Technologies. 流動相乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(12∶88)； 流速1.0ml/min； 柱溫30℃ 檢測波長為230nm。
標準貯備液制備取芍藥苷對照品，精密稱定15.57mg，置10ml量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標準貯備液。
對照品溶液的制備取標準貯備液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。
理論塔板數計算取標準貯備液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密吸取5μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并計算理論塔板數n＝5825。
流動相的選擇分別以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(12∶88)、甲醇-水(30∶70)、甲醇-水(20∶80)、乙腈-水(12∶88)、乙腈-0.1％磷酸溶液(15∶85)、乙腈-0.4％磷酸溶液(15∶85)為流動相，進行實驗。
檢測波長的確定參照中國藥典赤芍藥材的芍藥苷測定的色譜條件，選定芍藥苷的檢測波長為230nm。
4、定量限與檢測限 溶液的制備精密量取1ml對照品溶液，置250ml量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度。
檢出限精密吸取上述溶液1μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，信噪比為2.2。結果，芍藥苷的最低檢出限為0.6228ng。
定量限精密吸取5μl上述溶液注入液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜圖。主峰與噪音峰信號的強度比為10∶1以上。
表1、芍藥苷定量限測定結果
結論芍藥苷的定量限為3.114ng。
5、線性試驗精密吸取對照品溶液0.5、2.5、5、7.5、10、12.5μl注入液相色譜儀，記錄峰面積，結果見表2，線性曲線圖如下 表2、線性關系數據 以各峰面積值對進樣量進行線性回歸，得回歸方程 Y＝190.09X+7.8604 R＝0.9997 6、精密度試驗 供試品溶液的配制取本品20片，去除包衣，精密稱定，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml稱定重量，超聲處理20分鐘(功率120W，頻率40Hz)，放冷至室溫，再次精密稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
精密度試驗取同一供試品溶液(批號080523)，分別精密吸取5μl，注入液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜峰面積。精密度試驗結果見表3 表3、精密度試驗結果
試驗結果表明，精密度符合規定。
7、重現性試驗 供試品溶液的配制批號080523，按精密度供試品溶液制備方法，共制備六個供試品。
精密吸取各供試品溶液5μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積。重現性試驗結果見表4 表4、重現性試驗結果
試驗結果表明，重現性符合規定。
8、溶液穩定性取精密度供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、17小時進行測定，記錄色譜圖，結果如表5 表5、溶液穩定性試驗結果
說明本溶液及檢測方法均比較穩定，符合常規化驗要求。
9、回收率 精密稱取芍藥苷對照品，置干燥好的具塞錐形瓶中，稱取已知含量的樣品(批號080523)約2.0g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理20分鐘(功率120W，頻率40Hz)，放冷至室溫，稱定重量，用甲醇補足損失溶劑量，搖勻，用0.45um微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。同法制備6份樣品。
測定精密吸取各供試溶液5μl，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法進行計算，測得回收率，結果見表6 表6、回收率測定結果
試驗結果表明，回收率符合規定。
10、耐用性 10.1.流動相pH值變化實驗 乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(12∶88)的pH值為4.6，用磷酸(1ml→100ml)和1％氫氧化鉀分別調節，使流動相在pH值變化4.6±0.2的條件下，進行HPLC測定，記錄色譜圖。
結果在pH值4.6±0.2變化時，主峰拖尾因子均小于2.0，達到基線分離。
10.2、柱溫變化實驗 分別實驗柱溫在30±5℃的條件，記錄色譜圖，實驗柱溫對方法的影響。
結果25℃時，樣品分離效果較好。35℃時，基線飄動較大，但也能基線分離。說明柱溫對測定結果略有影響，25℃～30℃時效果最好。
10.3、流速變化實驗 分別實驗流速相對值變化20％時，即0.8ml/min和1.2ml/min，記錄色譜圖。
結果流速為0.8ml/min時，芍藥苷的出峰時間為18.9min；流速為1.0ml/min時，芍藥苷的出峰時間為15.0min；流速為1.2ml/min時，芍藥苷的出峰時間為12.3min主峰基線完全分離。各個流速條件下，主峰的拖尾因子均小于2.0，均實現基線分離。
10.4、不同色譜柱實驗 分別實驗了三種色譜柱，Agilent ZARBAX SB-C18 4.6×250mm 5μm；Inertsil ODS-34.6×250mm 5μm；Shimadzu VP-ODS 150L×4.6；記錄色譜圖 結果Agilent ZARBAX SB-C18 4.6×250mm 5μm和Shimadzu VP-ODS 150L×4.6效果最好，Inertsil ODS-3 4.6×250mm 5μm稍差，說明色譜柱型號對結果有影響。
10.5、不同超聲時間實驗 超聲機AS3120A Ultrasonic Cleaner 供試品超聲10min、20min和30min比較 結果供試品(080623)超聲處理10～30min之間，差別不大。
10.6、流動相比例 在乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(7∶93)、乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(12∶88)、乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液不同流動相比例時，記錄色譜圖。
結果在增大0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液比例(7∶93)和減少0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液比例(17∶83)時，色譜分離理想。
11、陰性樣品實驗 陰性對照液的制備 陰性溶液1、制備缺少赤芍的一味藥材的陰性對照品； 陰性溶液2、制備缺少牡丹皮的一味藥材的陰性對照品； 陰性溶液3、制備缺少赤芍和牡丹皮兩味藥材的陰性對照品； 陰性溶液4、缺少赤芍、牡丹皮、玄參三味藥材的陰性對照液。
分別取上述溶液進入液相色譜儀。
結果陰性溶液1和2中均檢測到芍藥苷色譜峰。說明赤芍和牡丹皮中均含有芍藥苷。
陰性溶液3和4圖譜中均未見芍藥苷色譜峰，進一步說明赤芍和牡丹皮中含有芍藥苷，而玄參中未檢測到芍藥苷。
12、中間精密度 由不同的分析人員，使用不同的儀器對相同的樣品進行測定，結果如下表7 表7、中間精密度試驗結果
實驗例3含量測定實驗 十批樣品測定結果見表8 表8、十批樣品含量測定結果
結果實驗可知，赤芍和牡丹皮中芍藥苷的平均轉移率為33.87％，赤芍質量標準(中國藥典2005一部P109)中芍藥苷的含量為1.8％(相當于每片含有芍藥苷0.828mg)，牡丹皮中的芍藥苷按平均含量計算為0.25％(相當于每片含有芍藥苷0.115mg)，再綜合藥材的采收季節和產地變化的影響，因此可以在標準中規定消銀片中芍藥苷的限度為本品每片含赤芍以芍藥苷(C23H28O11)計，應不少于0.30mg。
圖1牛蒡子中牛蒡苷薄層色譜圖 其中1、牛蒡苷；2、樣品(批號080523)；3、樣品(批號080526)；4、樣品(批號080601)；5、陰性樣品 圖2芍藥苷含量測定液相譜圖 流動相為甲醇∶水-20∶80 圖3芍藥苷含量測定液相色譜圖 流動相為甲醇∶水-30∶70 圖4芍藥苷含量測定液相色譜圖 流動相為乙腈∶水-12∶88 圖5芍藥苷含量測定液相色譜圖 流動相為乙腈∶1％磷酸溶液-15∶85 圖6芍藥苷含量測定液相色譜圖 流動相為乙腈∶0.4％磷酸溶液-12∶88 圖7芍藥苷含量測定液相色譜圖 流動相為乙腈∶0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-12∶88
具體實施例方式 下面結合實施例對本發明作進一步描述 實施例1本發明片劑的制備 地黃91g牡丹皮46g赤芍46g當歸46g 苦參46g金銀花46g玄參46g牛蒡子46g 蟬蛻23g白鮮皮46g防風23g大青葉46g 紅花23g 以上十三味，金銀花、紅花粉碎成細粉，其余地黃等十一味酌予碎斷，加70％乙醇浸漬12小時，濾過，藥渣再加70％乙醇適量，加熱回流12小時，濾過，合并濾液，回收乙醇至無醇味，濃縮成稠膏，與上述細粉及淀粉、硬脂酸鎂適量混勻，干燥，粉碎，制成顆粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得。
實驗例2本發明另外一種片劑的制備 地黃91g牡丹皮46g赤芍46g當歸46g 苦參46g金銀花46g玄參46g牛蒡子46g 蟬蛻23g白鮮皮46g防風23g大青葉46g 紅花23g 以上十三味藥材，金銀花、紅花粉碎成細粉，牡丹皮酌以碎段，加6倍量水浸泡2小時，水蒸氣蒸餾3小時得蒸餾液，蒸餾液經低溫放置24小時，濾取沉淀物得丹皮酚，過濾液備用。牡丹皮藥渣與其余地黃等十味酌予碎段合并，加70％乙醇適量浸漬12小時，濾過，得浸漬液；加7倍量70％乙醇，加熱回流12小時，濾過，得乙醇提取液；將提取液與浸漬液合并，回收乙醇至無醇味，乙醇回收液與丹皮酚過濾液合并濃縮成稠膏，稠膏與金銀花粉和紅花粉混勻干燥，粉碎，得浸膏粉，取丹皮酚用無水乙醇溶解并均勻噴灑于浸膏粉與淀粉制得的干燥顆粒上，加適量硬脂酸鎂，總混后壓制成片，包薄膜衣，即得。
實施例3本發明中藥質量標準的鑒別 鑒別(1)取本品10片，除去糖衣，研細，用三氯甲烷20ml加熱回流提取20分鐘，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取靛玉紅對照品、苦參堿對照品，分別加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10～20μl、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-丙酮-甲醇(16∶6∶1)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與靛玉紅對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；噴以改良碘化鉍鉀溶液，供試品色譜中，在與苦參堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(2)取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml使溶解，濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次15ml，棄去乙醚液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)另取牛蒡苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取〔鑒別〕(2)項下供試品溶液及上述對照品溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醚10ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液各10～20μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(5)取白鮮皮對照藥材1g，加乙醚10ml，浸漬過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取〔鑒別〕(1)項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液各10～20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯柋？0∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例4本發明中藥質量標準的含量測定 含量測定
苦參照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)(三乙胺調節pH值至8.0)為流動相；檢測波長為220nm。理論板數按苦參堿峰計算應不低于4000。
對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品30片，除去包衣，精密稱定，研細，取約3.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1ml，三氯甲烷30ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，容器及殘渣用三氯甲烷15ml分3次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每片含苦參以苦參堿(C15H24N2O)計，不得少于0.30mg。
赤芍、牡丹皮照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(12∶88)為流動相；檢測波長為230nm，理論板數按芍藥苷峰計算應不低于5000。
對照品溶液的配制精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的配制取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率120W，頻率40kHz)20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得 本品每片含赤芍和牡丹皮以芍藥苷(C23H28011)計，不得少于0.30mg。
實施例5本發明中藥的質量控制方法 鑒別(1)取本品10片，除去糖衣，研細，用三氯甲烷20ml加熱回流提取20分鐘，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取靛玉紅對照品、苦參堿對照品，分別加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10～20μl、對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-丙酮-甲醇(16∶6∶1)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與靛玉紅對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；噴以改良碘化鉍鉀溶液，供試品色譜中，在與苦參堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(2)取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml使溶解，濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次15ml，棄去乙醚液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)另取牛蒡苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VI B)試驗，吸取〔鑒別〕(2)項下供試品溶液及上述對照品溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開。取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(4)取本品10片，除去糖衣，研細，加乙醚10ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2005年版》一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液各10～20μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(5)取白鮮皮對照藥材1g，加乙醚10ml，浸漬過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取〔鑒別〕(1)項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液各10～20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(20∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
含量測定
苦參照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)(三乙胺調節pH值至8.0)為流動相；檢測波長為220nm。理論板數按苦參堿峰計算應不低于4000。
對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品30片，除去包衣，精密稱定，研細，取約3.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1ml，三氯甲烷30ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，容器及殘渣用三氯甲烷15ml分3次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每片含苦參以苦參堿(C15H24N2O)計，不得少于0.30mg。
赤芍、牡丹皮照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(12∶88)為流動相；檢測波長為230nm，理論板數按芍藥苷峰計算應不低于5000。
對照品溶液的配制精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的配制取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率120W，頻率40kHz)20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每片含赤芍和牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得少于0.30mg。
權利要求
1.一種治療銀屑病的中藥的質量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定為
A.色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以25-35∶75-65的乙腈-0.1％磷酸，并用三乙胺調節上述混合液pH值至8.0的溶液為流動相；檢測波長為220nm；理論板數按苦參堿峰計算應不低于4000；對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品30片，除去包衣，精密稱定，研細，取3.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1ml，三氯甲烷30ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，容器及殘渣用三氯甲烷15ml分3次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；該藥物組合物制劑每單位制劑含苦參以苦參堿C15H24N2OO計，不得少于0.30mg
B.色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以下述a～f的任一溶液為流動相
a.7-17∶93-83的乙腈-0.02～0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液；
b.30-50∶70-50的甲醇-0.02～0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液
c.20-40∶80-60的甲醇-水；
d.7-17∶93-83的乙腈-水；
e.1-5∶10-16∶60-90的甲醇-乙腈-0.01～0.05mol/L的磷酸溶液；
f.5-20∶80-95的乙腈-0.1～0.4％的磷酸溶液；
檢測波長為230nm，理論板數按芍藥苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的配制精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥12小時以上的芍藥苷對照品適量，加甲醇、乙醇、水、正丁醇制成每1ml含0.05～0.25mg的溶液，即得；取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿20-150ml，密塞，稱定重量，在功率為50-500W、頻率為20-60kHz條件下超聲處理10-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；該藥物組合物制劑每單位制劑含赤芍、牡丹皮以芍藥苷C23H28011計，不得少于0.30mg；
其中該中藥組合物的原料藥組成為
地黃的重量份數為80-100牡丹皮的重量份數為40-60
赤芍的重量份數為40-60 當歸的重量份數為40-60
苦參的重量份數為40-60 金銀花的重量份數為40-60
玄參的重量份數為40-60 牛蒡子的重量份數為40-60
蟬蛻的重量份數為10-30 白鮮皮的重量份數為40-60
防風的重量份數為10-30 大青葉的重量份數為40-60
紅花的重量份數為10-30。
2.如權利要求1所述的中藥組合物的質量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定為
A.色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以20∶80的乙腈-0.1％磷酸，并用三乙胺調節上述混合液pH值至8.0的溶液為流動相；檢測波長為220nm；理論板數按苦參堿峰計算應不低于4000；對照品溶液的制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品30片，除去包衣，精密稱定，研細，取3.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1ml，三氯甲烷30ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，容器及殘渣用三氯甲烷15ml分3次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；該藥物組合物制劑每單位制劑含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于0.30mg；
B.色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以12∶88的乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相；檢測波長為230nm理論板數按芍藥苷峰計算應不低于5000；對照品溶液的配制精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時的芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得；取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，在功率為120W、頻率為40kHz條件下超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；該藥物組合物制劑每單位制劑含赤芍、牡丹皮以芍藥苷C23H28O11計，不得少于0.30mg。
3.如權利要求1所述的中藥組合物的質量控制方法，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為
地黃的重量份數為91牡丹皮的重量份數為46
赤芍的重量份數為46當歸的重量份數為46
苦參的重量份數為46金銀花的重量份數為46
玄參的重量份數為46牛蒡子的重量份數為46
蟬蛻的重量份數為23白鮮皮的重量份數為46
防風的重量份數為23大青葉的重量份數為46
紅花的重量份數為23。
4.如權利要求1-3任一所述的中藥組合物的質量控制方法，其特征在于該方法還包括如下鑒別中的一種或幾種
A.取本藥物組合物片劑10片，除去糖衣，研細，用三氯甲烷10-30ml加熱回流提取10-30分鐘，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取靛玉紅對照品、苦參堿對照品，分別加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液10～20μl，對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15-17∶5-7∶1的苯-丙酮-甲醇為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與靛玉紅對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；噴以改良碘化鉍鉀溶液，供試品色譜中，在與苦參堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
B.取本藥物組合物片劑10片，除去糖衣，研細，加乙醇10-30ml，超聲處理或熱回流或冷浸提取20-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇、乙醇、水、氯仿5-20ml使溶解，濾過，濾液用醋酸乙酯、氯仿或乙醚振搖提取2次，每次10-20ml，棄去醋酸乙酯、氯仿或乙醚液，甲醇、乙醇、水、氯仿溶液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次10-20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇、乙醇、水、正丁醇、氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以39-41∶4-6∶9-11∶0.1-0.3的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3-7％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
C.取牛蒡苷對照品，加甲醇、乙醇、水、正丁醇、氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取B項下供試品溶液及上述對照品溶液兩種溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以39-41∶4-6∶9-11∶0.1-0.3的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液或3-7％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
D.取本藥物組合物片劑10片，除去糖衣，研細，加乙醚5-15ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液各10～20μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
E.取白鮮皮對照藥材1g，加乙醚5-15ml，浸漬過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為對照藥材溶液；吸取A項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液各10～20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以19-21∶1的甲苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
5.如權利要求4所述的中藥組合物的質量控制方法，其特征在于該方法還包括如下鑒別中的一種或幾種
A.取本藥物組合物片劑10片，除去糖衣，研細，用三氯甲烷20ml加熱回流提取20分鐘，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取靛玉紅對照品、苦參堿對照品，分別加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液10～20μl，對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以16∶6∶1的苯-丙酮-甲醇為展開劑，置氨蒸氣預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與靛玉紅對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；噴以改良碘化鉍鉀溶液，供試品色譜中，在與苦參堿對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
B.取本藥物組合物片劑10片，除去糖衣，研細，加乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml使溶解，濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次15ml，棄去乙醚液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以40∶5∶10∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
C.取牛蒡苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；吸取B項下供試品溶液及上述對照品溶液兩種溶液各5～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以40∶5∶10∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
D.取本藥物組合物片劑10片，除去糖衣，研細，加乙醚10ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液各10～20μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以甲苯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
E.取白鮮皮對照藥材1g，加乙醚10ml，浸漬過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為對照藥材溶液；吸取A項下的供試品溶液及上述對照藥材溶液各10～20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以20∶1的甲苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
全文摘要
本發明涉及一種用于銀屑病治療的中藥的質量控制標準。對消銀片的原有質量標準進行了改進，增加了HPLC法測定赤芍和牡丹皮中的芍藥苷的含量測定方法，另外也可增加TLC法牛蒡子中的牛蒡苷的鑒別實驗。本發明技術方案的應用，使得該銀屑病治療藥的質量可控性顯著提高。
文檔編號A61K36/808GK101647903SQ20081030374
公開日2010年2月17日 申請日期2008年8月13日 優先權日2008年8月13日
發明者吳光彥 申請人:黑龍江福和華星制藥集團股份有限公司